实验一 MS培养基配制和灭菌.pdf

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1、实验一实验一MSMS 培养基配制和灭菌培养基配制和灭菌一目的和要求一目的和要求：1.学会 MS 培养基的制作方法;2.掌握高压灭菌的方法和基本操作。二、仪器与试剂二、仪器与试剂1.仪器仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等2.试剂试剂：MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖，琼脂粉，1N NaoH和 1N HCl三、方法步骤三、方法步骤（一）配方设计配方设计:以 MS 为基本培养基（mg/L）No.CK12345（二）配制培养基配制培养基(1)溶化琼脂：量取300ml左右蒸馏水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全融化。(2)各种母液的吸

2、取：Macro-e50ml Micro-e 1ml有机成分 1ml Fe盐 5ml肌醇 10ml加在一起，倒入烧杯（1L)（3）加入糖:称取 30g 蔗糖，溶于溶有琼脂的 300ml 蒸馏水中。6-BA00.51.02.01.02.0NAA00.10.10.2IBA0.20.2（4）根据实验设计，量取生长调节剂:加在一起，倒入烧杯。（5）定容:加蒸馏水（用量杯）。（6）调节pH至5.8，用pH试纸进行测定，用1molHcl或1Mol NaoH调节。（7）分装:3040 ml/瓶6，培养基勿碰三角瓶口。（8）用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然

3、后按次序放回原处。（三）灭菌灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为0.120.15MPa,温度为120126，保持1520 min。具体操作步骤：具体操作步骤：1.加水；2.把包扎好的培养基装入高压锅；3.盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；4.加热；5.排除冷空气；6.排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到 1Kg 位置时，开始计算灭菌时间，一般在 1Kg 压力(121)下灭菌 1520 分钟即可，但要注意保持稳定压力。7.灭菌时间达到 20 分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。四四.作业作业1.

4、总结配制培养基的注意事项。2.制作培养基前为何要提前配制母液?实验二实验二短柄五加无性系建立短柄五加无性系建立一目的和要求一目的和要求：1.学习并掌握外植体的消毒方法及具体操作;2.掌握无菌操作技术。二、材料、仪器与试剂二、材料、仪器与试剂1.材料材料：短柄五加休眠枝短柄五加(Eleutherococcus brachypus Harms.)为五加科五加属灌木，在我国的分布范围极其狭窄，主要分布于西北黄土高原，逐渐被认为是濒危植物。其茎具有较高的药用价值，有治疗神经衰弱、妇女更年期综合症、继发性高血压、白细胞减少等功效。2.仪器仪器：超净工作台、灭菌锅、弯头剪、枪状镊子、烧杯（500ml）、培

5、养皿等 3.试剂试剂：配制好的 MS培养基各种母液、1mol/L的NaOH、1mol/LHCL、0.1%的升汞、70%的乙醇。三、方法步骤三、方法步骤(一一)无菌操作无菌操作准备阶段准备阶段接种室：1、紫外灯提前照 20-30min。2、70%乙醇或新洁尔喷雾消毒。操作人员：1、穿专用实验服，戴口罩。2、剪短指甲，流水洗手三次。操作阶段操作阶段1、清理工作台面，70%乙醇擦三次。2、70%乙醇擦手三次。3、避免说话和来回走动(二)无性系建立无性系建立1.1.配制启动培养基配制启动培养基CK MS MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA0.1mg/L MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA0

6、.1mg/L MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2mg/L MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA0.2mg/L MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA0.2mg/L2.2.材料的选择材料的选择：选用的枝条要求表面光滑、无病虫害。3.3.培养步骤培养步骤：（1）外植体消毒：去杂流水水洗 12h70%乙醇（8-10s）无菌水洗 3-5 次0.1%HgCl2（10min）无菌水水洗 5 次（2）接种：用剪刀将灭菌后的枝条剪成 长约 11.5 cm 的单芽茎段。将茎段按其自然极性方向垂直插入培养基，每瓶只接一个。对接种用具、超净台面、操作者手等进行适当灭菌处理，继续接种。（3）培养：培

7、养物置于 25 左右的培养室中，每天光照 12 小时，光照度为 850-1200lx。（4）观察：定期观察培养物的生长情况，及时将污染材料取出。四、四、作业作业1、总结本实验外植体的消毒过程及关键步骤。2、进行试验结果的观测、比较和记录，并通过分析筛选出月季无性系建立的最佳培养基配方。植物生长调节剂植物生长调节剂No.No.接种数接种数/个个萌芽数萌芽数/个个污染数污染数/个个萌芽率萌芽率/%/%芽生长情况芽生长情况6-BACK12345NAAIBA000.51.02.01.02.00.10.10.20.20.2（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）