植物组织中淀粉含量的测定_ (2).pdf

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1、植物组织中淀粉含量的测定植物组织中淀粉含量的测定_(2)_(2)植物组织游离脯氨酸含量的测定原理植物在逆境条件下，游离脯氨酸便会大量积存，且积存指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。使用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或者鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳固的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长 520nm 处有一最大汲取峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。材料、仪器设备及试剂 1.材料植物叶片 2.仪器设备分光光度计；水浴锅：漏斗：大试管（20m1）；具塞刻度试管

2、（20m1）注射器或者滴管（5loml）。3.试剂（1）3磺基水杨酸溶液（2）甲苯；（3）2.5酸性茚三酮显色液：冰乙酸与 6mo1.l-l 磷酸以3：2 混合，作为溶剂进行配制，此液在 4下 23 天有效；（4）脯氨酸标准溶液。准确称取 25mg 脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至 250ml，其浓度为 100ug.ml-l。再取此液 10ml，用蒸馏水稀释至 looml，即成 10g.ml-1 的脯氨酸标准液。1.标准曲线制作（1）取 7 支具塞刻度试管按表 9.2-1 加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热 40min。（2）取出冷却后向各管加入 5ml 甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置

3、待分层后吸取甲苯层以0 号管匀参照在波长 520nm下比色。（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程表 9.2.1 各试管中试剂加入量试管 0 6 脯氨酸标准溶液（m1）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0水（m1）1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0冰乙酸（m1）2 茚三酮显色液（m1）3 样品测定（1）脯氨酸提取。取不一致处理的剪碎混匀植物叶片 0.20.5g（干样根据水分含量酌减），分别置于大试管中，加入 5m13磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提 10min。（2）取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸与 3m1 显色液，于沸水浴中加热 40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取与比色（向各管加入 5ml 甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以 0 号管匀参照在波长 520nm 下比色）。（3）结果计算。从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度脯氨酸含量的百分数。脯氨酸g.g-1（干或者鲜重）（c.v）（aw）1式中：c 一提取液中脯氨酸浓度（ps），由标准曲线求得：v提取液总体积（ml）a-测定时所吸取得体积（ml）w-样品重（g）