细胞生物的学实验7染色体制备技术.pdf

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1、word实验 7染色体制备技术实验目的1、学习染色体标本的制备技术2、掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤实验原理每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。试剂材料1、试剂（1）0.1%秋水仙素溶液生理盐水配置（2）1mol/L 盐酸（3）1%柠檬酸钠溶液（4）0.067mol/L 磷酸盐缓冲液pH6.8Na2HPO412H2(Na2HPO42H2O 5.92g)KH2PO4蒸馏水至 1L（5）Giemsa 原液pH6.8 pH6.8Giemsa 染粉 1g，甘

2、油 33ml,甲醇 45ml染粉在乳钵中滴加少许甘油研磨至无颗粒，再将全部甘油参加，放入 60-65保温 2 小时后参加甲醇混匀。棕色瓶中保存。用时和磷酸缓冲液1：10 混合6低渗液：0.4%KCl2、材料（1）洋葱根尖（2）女性口腔上皮（3）蟾蜍内容方法X 染色体标本制片与观察1、取材：女性漱口后取口腔上皮细胞，涂在干净的载玻片上2、固定：95%乙醇固定 10 分钟，空气枯燥3、水解：1mol/L 盐酸室温水解 10 分钟，然后用新鲜蒸馏水冲洗4 次，晾干4、染色：Giemsa 染色 10 分钟，蒸馏水冲后 90%乙醇分色 1 分钟，酒精灯过火脱水。也可用 0.2%甲苯安蓝染色 5-15 分

3、钟，冲洗后枯燥，观察须知事项：1、女性口腔、牙签和载波片要干净，防止杂质干扰。2、口腔内第一次获取的上皮细胞要弃去，然后在一样部位再获取新鲜的上皮细胞。3、上皮细胞涂片时尽量使细胞分散开，重叠的细胞影响观察。4、人的 X 小体紧贴细胞核膜内侧，但是一般上皮细胞中只有30%-50%的细胞可以观察到 X 小体。小鼠骨髓染色体制备1/2word1、小鼠按照 4g/g 体重经腹腔注射秋水仙素，3-4 小时后杀死动物，取后肢股骨和胫骨，纱布剥离所有肌肉，生理盐水洗净后剪去骨两端。2、注射器针头吸取 2%柠檬酸钠溶液或生理盐水注射入骨髓腔，把骨髓细胞冲出来。3、用针管反复吹吸，使分散成为单个细胞。4、骨髓

4、细胞溶液离心 1000r/min5 分钟，沉淀细胞，去上清。5、用预热至 37的 0.4%KCl 4ml 低渗处理 15min,37。6、1000r/min5 分钟，沉淀细胞，去上清。7、预固定：参加固定液甲醇：冰醋酸3：14ml，注意不要冲动细胞团块静置 20 分钟,然后1000r/min 离心 4 分钟，去上清。8、固定：沉淀细胞参加固定液甲醇：冰醋酸3：14ml 固定 20 分钟。9、滴片：固定后细胞根据多寡参加新鲜配置的固定液，在湿、冷、干净的玻片上方45cm 处滴片，3滴左右，不重叠，滴片后迅速吹口气使细胞分散，在酒精灯上过火几次，晾干。10、Giemsa 染色 10 分钟，后冲洗数

5、秒不要把染料倾去，直接流水冲洗，晾干后观察。须知事项：1、秋水仙素浓度和作用时间：浓度过高、作用时间过长会使染色体过分收缩而不利于形态观察。2、离心转速：转速过高细胞会结团，不利于染色体伸展，一般1000r/min 为宜。3、低渗处理是实验成败关键。低渗目的是使细胞体积膨大，染色体松散，低渗处理时间过长会使细胞破裂，染色体丢失；时间过短染色体聚集在一起，不能伸展。细胞可用蒸馏水37处理 20分钟或预热 37的 0.075M KCl 处理 15 分钟；组织块低渗要延长时间。4、固定液要现配现用。核仁组织区染色1、秋水仙素处理的染色体制备的新鲜染色体可以直接滴加等量 50%硝酸银、2%明胶显影液，盖上搽镜纸，在 70电热板上保温数分钟，颜色转为黄色时用水冲洗。2、小鼠腹水细胞作样品（1）小鼠腹水少许，涂片（2）固定：甲醇中固定 10min，晾干（3）染色：1-2 滴 2%明胶显影液，再滴 2-4 滴 50%硝酸银，混匀（4）盖上搽镜纸，在 70电热板上保温数分钟，颜色转为黄色时用水冲洗。（5）镜检：高倍镜下可见细胞核黄色，核仁黑色。须知事项1、样品新鲜2、载波片清洁、无尘、无细胞碎片，防止干扰3、腹水细胞涂片注意细胞不要重叠作业绘制观察到的染色体2/2