食品微生物检测基础.ppt精品文稿.ppt
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1、食品微生物检测基础.ppt第1页,本讲稿共56页食品微生物简介食品微生物简介v微生物的概念微生物的概念v微生物包括的种类微生物包括的种类v病原微生物的概念病原微生物的概念v微生物的特性微生物的特性v细菌的基本形态和结构细菌的基本形态和结构第2页,本讲稿共56页微生物的定义:微生物的定义:是一群形体细小、结构简单、人是一群形体细小、结构简单、人肉眼看不见,必须借助于光学显肉眼看不见,必须借助于光学显微镜、电子显微镜放大几百倍、微镜、电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能看到的生几千倍甚至几万倍才能看到的生物。物。第3页,本讲稿共56页微生物包括微生物包括细菌、放线菌、细菌、放线菌、酵母菌、霉
2、菌、螺旋菌、立酵母菌、霉菌、螺旋菌、立克次氏体、衣原体、病毒及克次氏体、衣原体、病毒及微藻类等。微藻类等。第4页,本讲稿共56页病原微生物定义:病原微生物定义:大部分微生物是有益的,只大部分微生物是有益的,只有小部分微生物是有害的,有小部分微生物是有害的,可以引起各种疫病,这部分可以引起各种疫病,这部分微生物叫做病原微生物微生物叫做病原微生物第5页,本讲稿共56页微生物的特性微生物的特性v1个体微小,结构简单个体微小,结构简单v2分布广,种类多分布广,种类多v3繁殖快,数量大繁殖快,数量大v4易于变异,适应力强易于变异,适应力强v5易于培养,代谢活力强易于培养,代谢活力强第6页,本讲稿共56页
3、细菌的基本形态和结构细菌的基本形态和结构细菌是一种具有细胞壁的单细胞生物细菌是一种具有细胞壁的单细胞生物.细菌的大小以微米(细菌的大小以微米(m)为测量单位(一)为测量单位(一微米等于千分之一毫米)。微米等于千分之一毫米)。根据细菌形态一般分为球菌、杆菌、螺根据细菌形态一般分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类。旋菌三大类。细菌具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞细菌具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、核糖体和内含物等基本结构。核、核糖体和内含物等基本结构。细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。孢等。第7页,本讲稿共56页食品微生物检测所涉及的类群食品微生物检测所涉及
4、的类群微生物微生物非细胞生物非细胞生物细胞生物细胞生物病毒病毒原核生物原核生物真核生物真核生物细菌细菌酵母菌、霉菌酵母菌、霉菌第8页,本讲稿共56页微生物检测程序微生物检测程序v 样品的采集样品的采集v注意:注意:v1所用接触样品的用具所用接触样品的用具经过灭菌经过灭菌v2取样要均匀、特殊样取样要均匀、特殊样品要控制温度品要控制温度v3样品采好后要贴上标样品采好后要贴上标签(注明:样品名称、签(注明:样品名称、来源、数量、采样人、来源、数量、采样人、地点及时地点及时间)间)v样品的微生物检验样品的微生物检验v注意:注意:v1采好的样品送检不采好的样品送检不要超过要超过3小时小时v2检完的样品的
5、存放检完的样品的存放时间时间v3报告的填写报告的填写第9页,本讲稿共56页菌落总数的测定菌落总数的测定首先要明白菌落的定义。首先要明白菌落的定义。菌落的定义:菌落的定义:将细菌划线接种在固体培养将细菌划线接种在固体培养基上经基上经18 24小时培养,长出肉眼可见的有单小时培养,长出肉眼可见的有单一细菌生长繁殖而成的细菌集团。一细菌生长繁殖而成的细菌集团。菌落总数:菌落总数:食品检样经过处理,在一定条件下食品检样经过处理,在一定条件下培养后,所得培养后,所得1ml(g)检样中所含菌落的总)检样中所含菌落的总数。数。第10页,本讲稿共56页1、设备和材料:、设备和材料:(见书(见书151页)页)2
6、、培养基和试剂:、培养基和试剂:营养琼脂营养琼脂75乙醇乙醇稀释剂:稀释剂:0.85生理盐水生理盐水第11页,本讲稿共56页菌落总数的检验程序菌落总数的检验程序25g(ml)样品样品+225ml生理盐水生理盐水(1:10的稀释液的稀释液)作几个适当倍数的稀释液作几个适当倍数的稀释液(例如例如1:100,1:1000)选择选择23个适宜稀释度个适宜稀释度各取各取1ml分别加入灭菌培养皿中分别加入灭菌培养皿中每个平皿中加适量(每个平皿中加适量(1520ml)营养琼脂营养琼脂菌落记数菌落记数第12页,本讲稿共56页第13页,本讲稿共56页 (二)菌落计数方法(二)菌落计数方法做平板菌落计数,用肉眼观
7、察,必要做平板菌落计数,用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,记下各平板菌时用放大镜检查,以防遗漏,记下各平板菌落数后,求出同稀释度的各个平板平均菌落落数后,求出同稀释度的各个平板平均菌落数。数。第14页,本讲稿共56页 (三)菌落计数的报告(三)菌落计数的报告1、平板菌落数的选择、平板菌落数的选择选取菌落数在选取菌落数在30300之间的平板作为之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数。板,应采用两个平板平均数。2、稀释度的选择(见下表)、稀释度的选择(见下表)第15页,本讲稿共56页例次例次稀稀释液及释液及菌菌落落
8、数数两稀释两稀释液之比液之比菌落总数菌落总数(个(个/g或个或个ml)报告方式报告方式(个(个/g或或ml)10-1 10-210-31多不可计多不可计164201640016000或或1.61042多不可计多不可计295461.6377503800038000或或3.83.810104 43多不可计多不可计271602.2271002700027000或或2.72.710104 44多不可计多不可计多不可计多不可计313313000310000310000或或3.03.010105 5527115270270270或或2.72.710102 26000110 10107多不可计多不可计305
9、12305003100031000或或3.13.110104 4第16页,本讲稿共56页三、菌落数的报告三、菌落数的报告1、菌落数在、菌落数在100以内的按其实有数报告。以内的按其实有数报告。2、菌落数大于、菌落数大于100的采用两位有效数字,的采用两位有效数字,有效数字后面的数值采用四舍五入计算。有效数字后面的数值采用四舍五入计算。3、结果也可以用、结果也可以用10的指数表示。的指数表示。第17页,本讲稿共56页注意事项:注意事项:v1操作要在无菌的状态下进行。操作要在无菌的状态下进行。v2操作时间越短越好。操作时间越短越好。v3样品不同选择的稀释倍数不同。样品不同选择的稀释倍数不同。v4培
10、养基冷却温度不宜过高或过低。培养基冷却温度不宜过高或过低。第18页,本讲稿共56页霉菌和酵母菌的计数霉菌和酵母菌的计数第19页,本讲稿共56页1、设备和材料:、设备和材料:(同细菌总数测定)(同细菌总数测定)2、培养基和试剂:、培养基和试剂:孟加拉红培养基孟加拉红培养基灭菌蒸馏水灭菌蒸馏水第20页,本讲稿共56页霉菌和酵母菌的检测程序霉菌和酵母菌的检测程序25g(ml)样品样品+225ml无菌水无菌水作几个适当倍数的稀释液作几个适当倍数的稀释液选择选择3个适宜稀释度,各个适宜稀释度,各以以1ml的量加入灭菌平皿内的量加入灭菌平皿内每个平皿内加入适量每个平皿内加入适量培养液约培养液约20ml左右
11、左右菌落计数菌落计数第21页,本讲稿共56页菌落计数及报告:菌落计数及报告:1、选择菌落数在、选择菌落数在10150之间的平板进行菌落计之间的平板进行菌落计数。数。2、其他同菌落总数一样。、其他同菌落总数一样。注意事项:注意事项:1、培养温度是在、培养温度是在2528,培养时间是,培养时间是5天。天。2、在往平皿中加培养基时应多加一些。(当、在往平皿中加培养基时应多加一些。(当培养基自然漫过平皿底部时再多加一点)培养基自然漫过平皿底部时再多加一点)第22页,本讲稿共56页大肠菌群的测定大肠菌群的测定一、大肠菌群一、大肠菌群MPN的概念及意义的概念及意义大肠菌群系指一群在大肠菌群系指一群在372
12、4小时能发小时能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便,故以次作为粪便指标来评价食品的卫粪便,故以次作为粪便指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。生质量,具有广泛的卫生学意义。第23页,本讲稿共56页培养基和试剂:培养基和试剂:乳糖胆盐发酵管乳糖胆盐发酵管伊红美蓝琼脂平板伊红美蓝琼脂平板乳糖发酵管乳糖发酵管0.85生理盐水生理盐水革兰氏染色液革兰氏染色液大肠菌群的检验程序:大肠菌群的检验程序:第24页,本讲稿共56页 第25页,本讲稿共56页注意事项:注意事项:1.
13、乳糖胆盐发酵管和乳糖发酵管在灭菌以后乳糖胆盐发酵管和乳糖发酵管在灭菌以后要检查小导管内有无气泡要检查小导管内有无气泡,如果有气泡就不能如果有气泡就不能再用了。再用了。2.计算产气管的数量时以乳糖发酵管产气管的计算产气管的数量时以乳糖发酵管产气管的数量为准。数量为准。3.从伊红美蓝琼脂平板上挑细菌接种乳糖发酵从伊红美蓝琼脂平板上挑细菌接种乳糖发酵管和进行革兰氏染色时一定要挑取典型菌落,管和进行革兰氏染色时一定要挑取典型菌落,无典型菌落时要多挑几个菌落。无典型菌落时要多挑几个菌落。第26页,本讲稿共56页实验室生物安全实验室生物安全基本知识基本知识第27页,本讲稿共56页微生物实验室玻璃器皿的准备
14、微生物实验室玻璃器皿的准备一、洗涤一、洗涤载玻片和盖玻片在清洗前可先在载玻片和盖玻片在清洗前可先在2%盐酸溶液盐酸溶液中浸泡中浸泡1h。二、灭菌前的准备二、灭菌前的准备制作棉塞制作棉塞包扎器皿包扎器皿灭菌灭菌第28页,本讲稿共56页微生物培养基的制备微生物培养基的制备v培养基的定义:是根据细菌的生长需要人工培养基的定义:是根据细菌的生长需要人工配置的营养环境。配置的营养环境。v按物理性状分类可分为液体、半固体、按物理性状分类可分为液体、半固体、固体培养基。固体培养基。v按用途分类可分为基础培养基、营养培按用途分类可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基、选择培养基、鉴别
15、培养基、厌氧培养基。养基。第29页,本讲稿共56页称出一定量粉状培养基称出一定量粉状培养基加适量的水溶解加适量的水溶解分装分装灭菌灭菌检定检定保存保存第30页,本讲稿共56页消毒与灭菌消毒与灭菌v一、干热灭菌法一、干热灭菌法1.火焰灭菌(酒精灯)火焰灭菌(酒精灯)2.干热灭菌(电热干燥箱)干热灭菌(电热干燥箱)v二、湿热灭菌法二、湿热灭菌法1.煮沸消毒煮沸消毒2.流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌3.巴氏消毒巴氏消毒4.加热蒸汽灭菌法(高压灭菌锅)加热蒸汽灭菌法(高压灭菌锅)第31页,本讲稿共56页消毒灭菌的基本概念v1.灭菌:杀灭物体中所有微生物的繁殖体和灭菌:杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽胞的方法
16、。芽胞的方法。v2.消毒:杀死病原微生物的方法。消毒:杀死病原微生物的方法。v3.防腐:防止或阻止微生物生长繁殖的方法。防腐:防止或阻止微生物生长繁殖的方法。v4.无菌:不含有活的微生物的意思。无菌:不含有活的微生物的意思。v5.无菌技术(无菌操作):防止微生物进入无菌技术(无菌操作):防止微生物进入机体或物体的方法。机体或物体的方法。第32页,本讲稿共56页显微镜的构造显微镜的构造 A、机机械械部部分分:显显微微镜镜的的机机械械装装置置是是显显微微镜镜的的重重要要组组成成部部分分。机机械械装装置置的的作作用用是是固定及调节光学镜头,固定与移动标本等。固定及调节光学镜头,固定与移动标本等。只只
17、有有良良好好的的机机械械装装置置,显显微微镜镜才才能能充充分分发发挥挥作作用用。显显微微镜镜的的机机械械装装置置由由各各种种精精密密零件组成。零件组成。第33页,本讲稿共56页 (1)镜座:它是显微镜的底座,一般)镜座:它是显微镜的底座,一般为马蹄形,作用是支撑整个显微镜。有的显为马蹄形,作用是支撑整个显微镜。有的显微镜座内装有照明光源和反射镜。微镜座内装有照明光源和反射镜。(2)镜镜柱柱:联联系系于于镜镜座座和和镜镜臂臂之之间间,有支持显微镜其他部分的作用。有支持显微镜其他部分的作用。(3)镜镜臂臂:一一般般为为弯弯柄柄形形,拿拿取取显显微微镜镜时时握握此此臂臂。镜镜臂臂与与镜镜柱柱之之间间
18、有有关关节节相相连连,可可以以作作适适当当的的倾倾斜斜,以以便便观观察察。有有些些显显微微镜镜的的镜镜臂臂与与镜镜柱柱之之间间没没有有关关系系,不不能能做做任任何何角角度度的的倾倾斜斜。镜镜臂臂有有持持镜镜筒筒、镜镜台台、照照明明装装置置及调节焦距装置等作用。及调节焦距装置等作用。第34页,本讲稿共56页 (4)调节器:为了得到清晰的物象,必须调节物)调节器:为了得到清晰的物象,必须调节物镜和标本之间的距离,使它与物镜的工作距离相等。镜和标本之间的距离,使它与物镜的工作距离相等。这种操作叫做调焦。在镜臂上方(各镜位置不一样,这种操作叫做调焦。在镜臂上方(各镜位置不一样,有的一个在上方,一个在下
19、方),有大小两种螺旋,有的一个在上方,一个在下方),有大小两种螺旋,一般向前方转动时,镜筒下降,向后方转动时镜筒上一般向前方转动时,镜筒下降,向后方转动时镜筒上升;但也有显微镜,转动时镜柱下降;也有些显微镜升;但也有显微镜,转动时镜柱下降;也有些显微镜在转动螺旋时,镜筒不变,而镜台上下升降。在转动螺旋时,镜筒不变,而镜台上下升降。第35页,本讲稿共56页大大螺螺旋旋(粗粗调调节节)可可使使镜镜筒筒作作较较大大距距离离和和较较快快速速度度的的上上升升或或下下降降,通通常常在在使使用用低低倍倍镜镜时时,用大螺旋调节,能迅速找到物景。用大螺旋调节,能迅速找到物景。小小螺螺旋旋(细细调调节节)可可使使
20、镜镜筒筒缓缓慢慢地地上上升升或或下下降降,可以作精细的调节,使物象更加清晰。可以作精细的调节,使物象更加清晰。此此外外,在在镜镜柱柱附附近近还还有有一一个个聚聚光光镜镜螺螺旋旋,可以使聚光镜上升或下降可以使聚光镜上升或下降第36页,本讲稿共56页 (5)镜镜筒筒:镜镜筒筒是是由由金金属属制制成成的的圆圆筒筒,上上端端放放置置目目镜镜,下下端端连连接接物物镜镜。镜镜筒筒内内壁壁,为为了了避避免免光光线线的的乱乱反反射射,喷喷上上黑黑色色无无光光漆漆。筒筒长长度度一一般般为为155250毫毫米米,常常用用的的为为160或或170毫米。国产显微镜通常是毫米。国产显微镜通常是160毫米。毫米。(6)物
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