免疫荧光步骤.pdf

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免疫荧光步骤1.脱蜡和水化脱蜡前,应将组织切片在室温中放置60min或60恒温箱中烘烤20min;1组织芯片置于二甲苯中浸泡 10min,更换二甲苯后再浸泡 10min；2 无水乙醇中浸泡 5min；395%乙醇中浸泡 5min；470%乙醇中浸泡 5min；动作要快动作要快,减少暴露在空气中中的时间减少暴露在空气中中的时间2.PBS 洗两次各 5min;整个过程中注意切片不能干整个过程中注意切片不能干3.抗原修复,用于多聚甲醛固定的石蜡包埋组织芯片;煮沸热修复电炉或者水浴锅加热 0.01M 柠檬酸钠缓冲溶液 pH6.0 至 95左右,放入组织芯片加热 10min,必须等缓冲液冷却后,方能将切片取出;4.PBS 洗 3 次每次 5min;5.滴加 5%正常山羊血清,室温封闭 30min,甩去多余液体;6.滴加一抗根据说明书的比例稀释,一般为1:100,室温1小时或者4过夜或者371 小时 4过夜后在 37复温 45min;7.PBS 洗 3 次每次 5min;8.滴加荧光标记的二抗,室温避光孵育 1h;注意抗体针对的种属,使用浓度,用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光;9.PBS 洗 3 次每次 5min;10.DAPI 染色：把 DAPI 滴在片上,将切片覆盖,50ul/片,染色 10min;11.PBS 洗 3 次每次 2min;12.封片：抗荧光淬灭封片剂封片,再拍照;