高中生物竞赛课件：微生物的分离和纯培养.pptx

《高中生物竞赛课件：微生物的分离和纯培养.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高中生物竞赛课件：微生物的分离和纯培养.pptx（48页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、微生物的基本特点是什么？小！微生物的分离和纯培养在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性数量取胜发酵酿酒酵母菌免疫病原菌微生物的基本特点是什么？小！微生物的分离和纯培养在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性数量取胜微生物的物种(菌株)一般也是以群体的形式进行繁衍、保存；培养技术在微生物学中具有重要意义！培养物：人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物物种的培养物纯培养物：只有一种微生物的培养物微生物的基本特点是什么？小！微生物的分离和纯培养数量取胜培养技术在微生物学中具有重要意义！培养物：人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多

2、种微生物物种的培养物纯培养物：只有一种微生物的培养物实验结果可重复！科赫建立的微生物基本操作技术微生物的基本特点是什么？小！微生物的分离和纯培养数量取胜培养技术在微生物学中具有重要意义！培养物：人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物物种的培养物纯培养物：只有一种微生物的培养物实验结果可重复！问题：是不是对微生物研究和利用的时候都一定要用纯培养物呢？微生物的基本特点是什么？小！微生物的分离和纯培养 微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究纯培养技术显微技术微生物学成

3、为一门学科1.无菌的概念2.纯培养的概念3.纯培养物的获得方法微生物的分离和纯培养1.无菌的概念微生物的分离和纯培养微生物无处不在我们时刻都生活在“微生物的海洋”中多种微生物组成，混杂的存在形式分离从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步究和利用微生物的第一步无菌技术1.无菌的概念微生物的分离和纯培养无菌技术用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染，其自身也不污染环境1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养1)1)微生物培养的常用器具及其灭菌试管、锥形瓶、接种环、培养皿.培养皿(dish)

4、(dish)培养平板(简称平板，plate)plate)使用之前必须先进行灭菌(包装灭菌)1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养1)1)微生物培养的常用器具及其灭菌高压蒸汽灭菌：将物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽，待水蒸气将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，关闭排气阀，继续加热，蒸汽不能溢出，增加灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度，导致致病菌蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的可杀死所有的微生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体；同时基本保持培养基的营养成分不被破坏1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养1)1)微生物培养的常用器具及其灭菌高温干热灭菌：

5、160160170170，时间长(12h12h)干热灭菌温度不能超过180180，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧塑料材质不适于干热灭菌紫外灭菌1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养1)1)微生物培养的常用器具及其灭菌注意：为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养2)2)接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养器皿中进行培养的操作(微生物学研究中最常用的基本操作)要点：

6、煤气灯(或酒精灯)火焰附近进行无菌操作箱(如生物安全超净柜)或操作室内进行操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时间内用紫外线灯或化学药剂灭菌有的无菌操作箱可通无菌空气维持无菌状态1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养2)2)接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养器皿中进行培养的操作(微生物学研究中最常用的基本操作)要点：煤气灯(或酒精灯)火焰附近进行无菌操作箱(如生物安全超净柜)或操作室内进行操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时间内用紫外线灯或化学药剂灭菌有的无菌操作箱可通无菌空气维持无菌状态1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养2)2)接种操

7、作常见规格及枪头颜色0.5-20 l，白色枪头10-100 l，黄色枪头20-200 l，黄色枪头100-1000 l，蓝色枪头1-5 ml，白色枪头1-10 ml，白色枪头超净工作台：紫外消毒，通无菌空气无菌操作箱1.无菌的概念 微生物的分离和纯培养2)2)接种操作2.用固体培养基获得纯培养培养基液体培养基 微生物的分离和纯培养固体培养基半固体培养基用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基明胶菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体菌苔：固体培养基表面众多菌落连成一片的状态2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养固体

8、培养基不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征(形状，颜色)，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养固体培养基2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养固体培养基树木状串珠状小刺状线状根状使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：纯培养：一个微生物菌落2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养稀释！1稀释倒平板法2涂布平板法3平板划线法4稀释摇管法待分离的材料用无菌水作一系列的稀释 与已熔化并冷却至50左右的琼脂培养基混合倾入灭过菌的培养皿中保温培养注意培养基的温度！区别好氧和厌氧微生物！2.用固体

9、培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养1稀释倒平板法如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，后者可能就是由一个微生物细胞繁殖形成的 挑取单个菌落，或重复以上操作数次，得到纯培养已熔化的培养基倒人无菌培养皿，制成无菌平板生长在表面！2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养2涂布平板法用无菌涂布棒将菌液均匀分散至整个平板表面冷却凝固将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面培养后挑取单个菌落2.2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养一、稀释倒平板法二、涂布平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！2.2.用固体培养

10、基获得纯培养 微生物的分离和纯培养一、稀释倒平板法二、涂布平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养3平板划线法 用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养3平板划线法2.用固体培养基获得纯培养

11、微生物的分离和纯培养4稀释摇管法厌氧微生物的分离将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热，使琼脂熔化后冷却并保持在50左右在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开分离的材料用这些试管梯度稀释迅速摇匀试管、冷凝2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养4稀释摇管法厌氧微生物的分离将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热，使琼脂熔化后冷却并保持在50左右在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开分离的材料用这些试管梯度稀释迅速摇匀试管、冷凝2.用固体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养4稀释摇管法厌氧微生物的分离厌氧手套箱2.用固体培养基获得纯

12、培养 微生物的分离和纯培养4稀释摇管法厌氧微生物的分离将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热，使琼脂熔化后冷却并保持在50左右在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开分离的材料用这些试管梯度稀释迅速摇匀试管、冷凝一定是厌氧菌吗？对象：个体大的细菌、原生动物和藻类方法：稀释法效果：稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数(一般应超过95%)表现为不生长机率有微生物生长的试管可能是纯培养缺点：只能分离出混杂微生物群体中数量占优势的种类3.用液体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养3.用液体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养注射器的最小吸取量：0.

13、00062 毫升1878年，Lister 分离乳酸链球菌时所使用的微量注射器和酒杯培养装置3.用液体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养注射器的最小吸取量：0.00062 毫升1878年，Lister 分离乳酸链球菌时所使用的微量注射器和酒杯培养装置3.用液体培养基获得纯培养 微生物的分离和纯培养注射器的最小吸取量：0.00062 毫升1878年，Lister 分离乳酸链球菌时所使用的微量注射器和酒杯培养装置显微镜 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或个体进行培养以获得纯培养分离难度与大小成反比较大微生物：毛细管提取 灭菌培养基中转移清洗几次(去污染)(低倍显微镜)较小的微生物：显微

14、操作仪(通过机械、空气或油压传动装置来减小手的动作幅度)，显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子无显微操作仪：适当稀释 制备成小液滴在显微镜下观察，选取只含一个细胞的液滴4.单细胞(孢子)分离 微生物的分离和纯培养没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切生物生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的选择培养已知某种微生物的生长需要，设计一套特别适合该种微生物生长的特定环境，使得即使在混杂的微生物群体中占比很少，也能选择培养出来牛肉膏蛋白胨/LB培养基细菌高氏1号培养基放线菌马丁培养基/PDA真菌满足需要才能生长5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养策略：根据微

15、生物的特点，包括营养、生理、生长条件.目标菌在群落中的数量上升抑制其他大多数微生物生长造成有利于该菌生长的环境平板稀释等方法纯培养分离目的马丁培养基中的孟加拉红和链霉素均可抑制细菌的生长5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养1)选择平板培养产蛋白酶菌添加牛奶或酪素产生蛋白酶透明的蛋白质水解圈不产生蛋白酶无水解圈高温菌高温培养抗性菌抗生素(四环素、氨苄青霉素，卡那霉素)滑行菌(螺旋体、黏细菌、蓝细菌)平板前沿挑菌(重复)固氮菌不添加氮源5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养1)选择平板培养产蛋白酶菌添加牛奶或酪素产生蛋白酶透明的蛋白质水解圈不产生蛋白酶无水解圈高温菌高温培养抗性菌抗生素(四环素、

16、氨苄青霉素，卡那霉素)滑行菌(螺旋体、黏细菌、蓝细菌)平板前沿挑菌(重复)固氮菌不添加氮源5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养蓝白斑筛选基因工程常用的细菌重组子的筛选方法 野生型埃希氏大肠菌(E.coli)产生的-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养2)富集培养5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养利用不同微生物间生命活动

17、特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更容易地从自然界中分离到特定的微生物条件：温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气和营养.最强有力最强有力的技术手段之一，的技术手段之一，营养和生理条件营养和生理条件的几乎无穷尽的几乎无穷尽的的组合组合形式可从自然界选择出特定微生物形式可从自然界选择出特定微生物2)富集培养5.选择培养分离 微生物的分离和纯培养从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物以对羟基苯甲酸为唯一碳源的培养基6.二元培养 微生物的分离和纯培养 培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物病毒和宿主细胞；纤毛虫、变形虫和粘细菌；蛭弧菌及其寄主菌；6.二元培养 微生物的分离和纯培养 培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物病毒和宿主细胞；纤毛虫、变形虫和粘细菌；蛭弧菌及其寄主菌；微生物的纯培养固体培养：稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线法、稀释摇管法单细胞(孢子)分离：微生物在混杂群体中数量占少数液体培养：部分个体大的细菌、许多原生动物和藻类选择培养分离富集培养(降解对羟基苯甲酸的微生物)选择平板培养(产蛋白酶菌、固氮菌、高温菌、黏细菌)微生物的分离和纯培养