《临床免疫学检验技术》课程实验教学大纲（专升本）.docx

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1、临床免疫学检验技术课程实验教学大纲（专升本）课程代码：32061101a课程名称：临床免疫学检验技术适用专业：医学检验技术课程类别：必修开课学期：第六学期实验学时：32学 分：4一开课实验室医学影像与检验实验室二 课程性质与任务课程性质：临床免疫学检验技术是应用免疫学理论与技术研究疾病的发 生机制、免疫学诊断、治疗和预防的学科，是医学检验技术专业的一门主干课和 专业课。课程任务：通过学习使学生具有扎实的基础理论和临床实践技能，为以后从 事科研工作及临床检验工作并对临床检验结果的正确分析打下坚实基础，使学生 具有一定的的临床应用思维分析能力和对疾病的诊断及防治能力，同时培养学生 具有较强的动手能

2、力和一定的科研能力。三教学目的和要求1 .掌握常用免疫学技术和免疫检验方法的原理、操作、结果判定、质量控制 及方法学评价。2 .熟悉临床应用思维分析能力和对疾病的诊断及防治能力，3 .提高学生具有较强的动手能力和一定的科研能力，解决临床免疫检验相关 实际问题。四、考核形式要求实验成绩100分记，实验考核占总成绩20%o五 实验项目名称与学时分配序号实验项目名称实验 类型实验学时每组人数实验要求 （必做或选做）1免疫原和抗血清的制备综合1012必做2凝集试验验证412必做3酶联免疫吸附试验验证412必做4固相膜免疫测定验证412必做5免疫细胞分离验证212必做6免疫细胞功能检测验证212必做7补

3、体检测设计412必做8实验考核综合212必做六实验项目的具体内容实验一免疫原和抗血清制备1、实验目的和要求(1)掌握免疫血清制备的原理和方法(2)熟悉颗粒性抗原和可溶性抗原的抗血清制备方法2、实验原理应用颗粒性抗原如致病菌、非致病菌、红细胞等或可溶性抗原如人全血清等 反复多次注射到动物体内，使之产生免疫应答，在体内产生高效价的特异性抗体, 然后采集经免疫动物的血液制备血清，此即含有特异性抗体的免疫血清，可用于 血清学诊断和病原体鉴定。本实验以细菌菌体抗原及人全血清的免疫血清制备为 例，说明免疫血清制备的过程。3、材料试剂2-3公斤家兔、伤寒杆菌标准菌株、人全血清、0.4%甲醛生理盐水、消毒用

4、碘酒、酒精、无菌棉签、无菌注射器、试管、研钵等 4、实验步骤(1)领取2-3公斤左右健康雄兔，测体温、呼吸、心跳三天(2)抗原制备 伤寒杆菌O-Ag制备、伤寒杆菌H-Ag制备、人全血清抗原 制备(3)免疫方案颗粒性抗原抗血清制备(。-Ag或H-Ag)可溶性抗原抗血清制备(4)放血心脏取血(5)保存 离心血清，4保存备用。5 .教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验二凝集试验1、实验目的和要求（1）掌握玻片凝集试验（定性）的原理、操作方法及医学意

5、义。（2）掌握试管凝集试验（半定量）的原理、操作方法及医学意义。（3）掌握胶乳凝集试验的方法及应用。2、实验原理颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下发生反应，出现肉眼可见的凝集小块， 称为直接凝集反应。类风湿因子（RF）是一种抗变性IgG的抗体。聚苯乙烯胶乳颗粒具有很强 的吸附蛋白质的能力，借此将抗原（IgG）与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与 待测标本中的抗体（RF）发生凝集反应。3、材料试剂诊断血清、生理盐水、待检细菌的平板培养物、待检血清、伤寒杆菌“0” 和“H”抗原悬液、类风湿因子检测试剂、载玻片、接种环、恒温水浴箱、试管 架、试管、吸管。4、实验内容玻片凝集试验（定性）：试管凝集试验（半定

6、量）：胶乳凝集试验：5.教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验三酶联免疫吸附试验1、实验目的和要求掌握ELISA原理、操作方法及应用。2、实验原理采用抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入抗-HBs-HRP,当标本 中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无 显色反应。3、材料试剂ELISA试剂盒4、实验内容实验准

7、备：加待测标本：加酶标结合物：加显色剂：终止反应：测定：5.教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验四固相膜免疫测定1、实验目的和要求(1)掌握斑点金免疫渗滤试验的方法及应用。(2)掌握斑点金免疫层析试验的方法及应用。(3)掌握免疫印迹试验的方法及应用。2、实验原理将结核杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维膜上，膜上 TB抗原捕获人血清样品中结核杆菌抗体，被捕获的结核IgG抗体可用葡萄球菌 A蛋白(SPA)胶体金缀合物标记呈色(SP

8、A能与IgG结合)，形成红色斑点, 根据是否出现红色斑点既可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核杆菌抗体。尿中HCG与金标记的鼠抗人-a HCG单抗结合形成免疫复合物，随层析作 用向上移动，至检测线与鼠抗人-6 HCG抗体结合而聚集显色，在检测线未结合 的金标记鼠抗人-aHCG单抗(IgG)随着尿液上行，到达质控线与羊抗鼠IgG(二 抗)结合而显色，作为质控对照。包被抗原的检测膜条与待测标本中的自身抗体结合，加入酶标记的羊抗人 IgG后，形成抗原-抗体-酶标一抗的结合物，加入底物显色，判断有无对应自身 抗体。3、材料试剂结核杆菌抗体试剂盒(胶体金)、HCG检测试纸(胶体金)、抗核抗体谱 (IgG

9、)检测试剂盒4、实验内容斑点金免疫渗滤试验（DIGFA）斑点金免疫层析试验（DICA）免疫印迹试验5.教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验五免疫细胞分离1、实验目的和要求（1）掌握单个核细胞分离的原理、常用分离法及操作方法；（2）掌握细胞活力检测方法。2、实验原理红细胞和多形核细胞比重较大、约为1.092,血小板约为1.093,单个核细胞 比重介于10.761.090之间。因此，本实验利用一种比重介于10.751.092之间 等渗的聚蔗糖-泛

10、影葡胺（ficoll-hypaque）混合分离液作密度梯度离心，离心后不 同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。单个核细胞位于分离液面的上层，红细 胞和多核白细胞位于分离液的最下层。将单个核细胞层取出，经洗涤后即可用于 细胞免疫的某些试验。3、材料试剂外周静脉血、淋巴细胞分离液（聚蔗糖-泛影葡胺，比重1.0751.092）、Hank 液、台盼蓝染液、水平式离心机、显微镜、细胞计数板等。4、实验内容静脉采血：加分离液：水平离心：洗涤：计算单个核细胞的回收率：5.教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实

11、验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验六免疫细胞功能检测1、实验目的和要求(1)掌握淋巴细胞转化试验形态学检测法的原理、操作方法、临床意义。(2)熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。2、实验原理T淋巴细胞转化试验形态学检测法的原理是T细胞在有丝分裂原(PHA或 ConA)或特异性抗原刺激下发生转化，产生一系列形态变化如：细胞变大、细胞 浆增多、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由淋巴细胞转化变成淋巴母细 胞。通过计算淋巴母细胞转化率，了解机体的细胞免疫功能状态。血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步 骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，

12、是机体非特异性免疫的 重要组成部分。3、材料试剂RPMI1640细胞培养液、2.5%碘酒、75%酒精、载玻片、无菌棉签、无菌注 射器5 ml及7号针头、试管毛细滴管、培养瓶、高压灭菌器、CO2孵箱或恒温 培养箱、水平离心机、无菌过滤器、各种吸管、超净台、葡萄球菌、试管、玻片、 采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油。4、实验内容淋巴细胞转化试验(形态学检测法)：小吞噬试验：6 .教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。实验七APH50测定1、实

13、验目的和要求(1)掌握补体激活三条途径的异同点；(2) 了解APH50的临床意义。2、实验原理未致敏的家兔红细胞可激活血清中的B因子，引起旁路途径活化，导致兔 红细胞溶解。当红细胞量一定时，在规定反应时间内，溶血程度与血清中参与 旁路激活的补体量及活性呈正相关。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个 APH50U可计算出待检血清中补体旁路激活途径的溶血活性，以APH50U/ml表 Zj、O3、材料试剂工作液、试管、吸管、水浴箱等。4、实验内容0.5 %兔红细胞悬液配制：待检血清稀释：溶血标准管配制：依次加各成分：离心：结果计算：5.教学方式老师讲解、示教+学生互相操作，老师指导6、考核要求随机抽查二组学生，检查操作的准确性并纠正操作中的错误。7、实验报告要求要求书写实验目的、实验器材、实验内容、检查结果、实验结论。七、实验教材及参考书教材：刘辉主编，临床免疫学检验实验指导，第一版次，人民卫生出版 社，出版时间2015年参考书：1李金明，刘辉主编，临床免疫学检验技术，第一版次，人民卫生出版 社，出版时间2015年2龚非力主编，医学免疫学，第二版次，科学出版社，出版时间2004 年3刘辉主编，临床免疫学与检验实验指导，第四版次，人民卫生出版社， 出版时间2011年4刘辉主编，临床免疫学和免疫检验实验指导，第二版次，人民卫生出 版社，出版时间2005年