抗酸染色法实验报告.docx

《抗酸染色法实验报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗酸染色法实验报告.docx（13页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、竭诚为您提供优质文档/双击可除抗酸染色法实验报告篇一：抗酸染色法抗酸染色法目录1简介2抗酸染色的原理3抗酸染色一般步骤?1)初染?2)脱色?3)复染4抗酸染色的染液配制简介编辑抗酸染色法aci d fast stain ingmethodl 882年由埃利 希(F. ehrlich)首创并经F齐尔(Ziehl)改进而创造出 的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔 森(Ziehlneelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl gabbet) 染色法。用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝用旧结核菌素(oT)或纯蛋白衍生物(ppD)注射前臂皮 内，48小时-72小时观察有无红

2、肿硬结。结果：出现红肿硬结直径大于5mm者为阳性,说明机体对结核 杆菌有免疫性;反之,红肿硬结直径小于5mm者为阴性,说明 机体对结核杆菌无免疫性。大于15nlm者为强阳性反应，表明 可能有活动性结核感染,应进一步追查病灶。实际应用：选择卡介苗接种对象和测定卡介苗接种后的免疫效 果。结核菌素试验阴性者应接种或补种卡介苗。在未接种卡介苗的人群中作结核杆菌感染的流行病 学调查，了解人群自然感染率。作为婴幼儿(尚未接种过卡介苗者)结核病的辅助诊 断。测定肿瘤患者的细胞免疫功能。培养特性(示教)1 .营养要求高常用的有Lowenstein-Jensen培养基，内 含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等

3、。孔雀绿可抑制 杂菌生长,便于;分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能 刺激生长。2 .需氧,加6-8%co2可促进生长。3 .生长缓慢:繁殖一代需18小时左右,形成菜花样菌落需时两周以上。形态染色（示教）1 .形态细长,着色不匀,排列成分枝或索状。2 .着色抗酸性一抗酸性染色。抗酸染色法（acid-faststain）：L原理：结核分枝杆菌含脂质多,不易着色,先用石炭酸复红初 染，染色时间要稍长,且需要加温。一旦细菌染上颜色，由于 脂质的存在，即使强脱色剂也不能使之脱色,其它细菌均脱 色,经碱性美兰复染,所以结核分枝杆菌呈红色,其它呈蓝色.2 .方法：取痰液一涂片（略厚）一干燥一固定一5%石

4、炭酸复红 染色30分钟（冷染）后一用3%的盐酸酒精脱色约12分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止一水洗后，用碱性 美蓝复染1分钟一水洗，待干一镜检3 .结果：抗酸杆菌呈红色（+）,其他细菌和背景物质为蓝色（-）， 如下图4 .萋尼氏染色镜检结果分级报告标准抗酸杆菌阴性（一）：连续观察300个不同视野未发现抗 酸杆菌。报告抗酸杆菌菌数：18条/300视野。抗酸杆菌阳性（1 +）： 39条/100视野。抗酸杆菌阳性（2+）： 19条抗酸杆菌/10视野。抗酸杆菌阳性（3+）： 19条抗酸杆菌/每视野。抗酸杆菌阳性（4+）： 210条抗酸杆菌/每视野5 .注意事项痰涂片抗酸染色检查要注意预防假

5、阳性和假阴性结果 的产生。假阳性是指将阴性涂片错误判读为阳性，假阴性是 指将阳性涂片错误判读为阴性。属于技术因素的影响要通过 一系列实验室内和实验室间的质量控制不断改善。I假阳性结果的预防措施必须使用新的载玻片进行痰涂片检查。每个标本均使用一个新竹签完成制片涂抹。所有染液均经过过滤。染色时玻片彼此之间保持一定距离，相互彻底分隔开。严禁使用染色缸将玻片放置一起染色。染色时勿使玻片上的染液干燥。滴加镜油时，严禁容器滴口直接接触玻片痰膜。严禁物镜镜头直接接触玻片痰膜。完整、准确的标注痰盒、玻片和实验室登记本的各项 内容。（1。）登记前、后对检验单和标本盒上的标注进行仔细核 对。（ID认真按照要求读片

6、，准确记录和报告结果。II假阴性结果的预防措施确认标本是痰而非唾液。确认每份标本至少有3ml o选择脓样、干酪样、粘液分泌物涂抹制备玻片。制备玻片时标本涂抹均匀，不要太厚或太薄。使用高质量染料、严格按照配方配制染液。严格按照操作程序完成染色过程。判断结果为“阴性”前，必须阅读规定要求的视野数。作为对照，可采用已知结果为阳性的玻片，完成染色 镜检过程。完整、准确地标注痰盒、玻片和实验室登记本。(10)登记前对检验单和标本盒上的标注进行仔细核对。四、实验安排每人取痰标本做抗酸染色，记录结果。五、实验准备抗酸染液2套/教室三脚架、铁片、木夹子、玻片若干进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。

7、抗酸染色的原理编辑分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的 外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色 时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后, 就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭 酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后， 分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。抗酸染色一般步骤编辑1）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火 焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液 蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本 冷却后用水冲洗。2）

8、脱色3%盐酸酒精脱色30秒1分钟；用水冲洗。3）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用 油镜观察。抗酸染色的染液配制编辑1、石炭酸复红碱性复红酒精饱和溶液10mL5%石炭酸90mL2、3%盐酸酒精浓盐酸3mL95%酒精 97mL3、吕氏美兰液美兰酒精饱和液30mL氢氧化钾(1:10000) 100mL篇二：实验二十四抗酸染色-jpkchnadlcn课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验十七结核杆菌检验(m. TuberculosisTest)一、实验目的1 .掌握结核杆菌的菌落特征，镜下形态、染色特性2 .掌握抗酸染色的原理、操作步骤，结果报告二、实验器材与

9、试剂1 .菌种：beg2 .试剂：抗酸染液3 .其他：三脚架、铁片、木夹子等三、实验内容微生物学诊断1 .标本采取根据病灶器官取材,包括痰,尿,脑脊液,粪便等。2 .直接涂片抗酸染色镜检浓缩集菌:无其他杂菌污染的脑脊液、胸腹水等标本，可 直接离心沉淀集菌。有杂菌的标本如痰、尿、粪等标本，先 经4%naoh或3%hcl或6%h2so4处理30分钟，杀死杂菌并使 粘稠性有机物溶解之后,再离心沉淀集菌。3 .抗酸染色4 培养鉴定5 .动物试验（豚鼠）：将集菌后的材料注于豚鼠腹股沟皮 下,3-4周后若局部淋巴结肿大,结核菌素试验阳转，即可进 行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形 态、培

10、养等检查。若6-8周仍不见发病,亦应进行解剖检查。6 .结核菌素试验用途：测定机体对结核杆菌有无变态反应性一免疫性。方法：用旧结核菌素（oT）或纯蛋白衍生物（PPD）注射前臂皮 内，48小时-72小时观察有无红肿硬结。结果：出现红肿硬结直径大于5mm者为阳性，说明机体对结核 杆菌有免疫性;反之,红肿硬结直径小于5mm者为阴性，说明 机体对结核杆菌无免疫性。大于15nmi者为强阳性反应，表明 可能有活动性结核感染,应进一步追查病灶。实际应用：选择卡介苗接种对象和测定卡介苗接种后的免疫效 果。结核菌素试验阴性者应接种或补种卡介苗。在未接种卡介苗的人群中作结核杆菌感染的流行病 学调查，了解人群自然感

11、染率。作为婴幼儿（尚未接种过卡介苗者）结核病的辅助诊 断。测定肿瘤患者的细胞免疫功能。培养特性（示教）1 .营养要求高常用的有Lowenstein-Jensen培养基，内 含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制 杂菌生长,便于;分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能 刺激生长。2 .需氧,加6-8%co2可促进生长。3 .生长缓慢:繁殖一代需18小时左右,形成菜花样菌落 需时两周以上。形态染色（示教）1 .形态细长,着色不匀,排列成分枝或索状。2 ,着色抗酸性一抗酸性染色。抗酸染色法（acid-faststain）：1 .原理：结核分枝杆菌含脂质多，不易着色,先用石炭酸复红初 染

12、，染色时间要稍长,且需要加温。一旦细菌染上颜色，由于 脂质的存在，即使强脱色剂也不能使之脱色,其它细菌均脱 色,经碱性美兰复染,所以结核分枝杆菌呈红色,其它呈蓝色.2 .方法：取痰液f涂片（略厚）一干燥一固定一5%石炭酸复红 染色30分钟（冷染）后一用3%的盐酸酒精脱色约厂2分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止一水洗后，用碱性 美蓝复染1分钟一水洗，待干一镜检3 .结果：抗酸杆菌呈红色（+）,其他细菌和背景物质为蓝色（-）， 如下图4 .萋尼氏染色镜检结果分级报告标准抗酸杆菌阴性（一）：连续观察300个不同视野未发现抗 酸杆菌。报告抗酸杆菌菌数：18条/300视野。抗酸杆菌阳性（1 +

13、 ）： 39条/100视野。抗酸杆菌阳性（2+）： 19条抗酸杆菌/10视野。抗酸杆菌阳性（3+）： 19条抗酸杆菌/每视野。抗酸杆菌阳性（4+）： 10条抗酸杆菌/每视野5 .注意事项痰涂片抗酸染色检查要注意预防假阳性和假阴性结果 的产生。假阳性是指将阴性涂片错误判读为阳性，假阴性是 指将阳性涂片错误判读为阴性。属于技术因素的影响要通过 一系列实验室内和实验室间的质量控制不断改善。I假阳性结果的预防措施必须使用新的载玻片进行痰涂片检查。每个标本均使用一个新竹签完成制片涂抹。所有染液均经过过滤。染色时玻片彼此之间保持一定距离，相互彻底分隔开。严禁使用染色缸将玻片放置一起染色。染色时勿使玻片上的

14、染液干燥。滴加镜油时，严禁容器滴口直接接触玻片痰膜。严禁物镜镜头直接接触玻片痰膜。完整、准确的标注痰盒、玻片和实验室登记本的各项 内容。登记前、后对检验单和标本盒上的标注进行仔细核 对。（11）认真按照要求读片,准确记录和报告结果。n假阴性结果的预防措施确认标本是痰而非唾液。确认每份标本至少有3mlo选择脓样、干酪样、粘液分泌物涂抹制备玻片。制备玻片时标本涂抹均匀，不要太厚或太薄。使用高质量染料、严格按照配方配制染液。严格按照操作程序完成染色过程。判断结果为“阴性”前，必须阅读规定要求的视野数。作为对照，可采用已知结果为阳性的玻片，完成染色 镜检过程。完整、准确地标注痰盒、玻片和实验室登记本。

15、登记前对检验单和标本盒上的标注进行仔细核对。四、实验安排每人取痰标本做抗酸染色，记录结果。五、实验准备抗酸染液2套/教室三脚架、铁片、木夹子、玻片若干篇三：实验二十四抗酸染色-湖南省高等学校精品课程 网课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验十七结核杆菌检验(m.TuberculosisTest)一、实验目的L掌握结核杆菌的菌落特征，镜下形态、染色特性2.掌握抗酸染色的原理、操作步骤，结果报告二、实验器材与试剂1 .菌种:beg2 .试剂：抗酸染液3 .其他：三脚架、铁片、木夹子等三、实验内容微生物学诊断1 标本采取根据病灶器官取材,包括痰,尿，脑脊液,粪便等。2 .直接涂片抗酸染色镜检浓缩集菌:无其他杂菌污染的脑脊液、胸腹水等标本，可 直接离心沉淀集菌。有杂菌的标本如痰、尿、粪等标本，先 经4%naoh或3%hcl或6%h2so4处理30分钟，杀死杂菌并使 粘稠性有机物溶解之后,再离心沉淀集菌。3 .抗酸染色4 培养鉴定5 .动物试验（豚鼠）：将集菌后的材料注于豚鼠腹股沟皮 下,3-4周后若局部淋巴结肿大,结核菌素试验阳转，即可进 行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形 态、培养等检查。若6-8周仍不见发病，亦应进行解剖检查。6 .结核菌素试验用途：测定机体对结核杆菌有无变态反应性一免疫性。方法：