食醋中总酸度和氨基酸中氮含量的测定.docx

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1、食用米醋中总酸量和氨基酸氮含量的测定一、目前有关该元素常量测定方法的概述：米醋的主要成分为醋酸，此外还有少量的其他弱酸。要测定其总酸度，我们可以 用NaOH标准溶液滴定，用酚酷作指示剂，从而测得其总酸度。对于氨基酸氮含量的测定，主要有4种方法：(1)我们先是使-NHz与甲醛结合，其碱性消逝，破坏内盐的存在，就可以用碱 来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。由于米醋中氨基酸的含量比较少, 所以测出的结果精确度较低，选择性较差，滴定终点不易把握，结果不够抱负，而且甲醛会对环境造成污染。(2)把氨基酸中的-NHz转化成NH；,因NH；的酸性太弱，不能用NaOH标准溶液 直接测定，所以用甲醛法

2、进行测定NH1甲醛与NH作用生成质子化(CH，NH 和H反应式为：氨基酸氮的测定还可以采用Hantzsh反应原理，用乙酰丙酮一甲醛混合溶液 作为氨基酸的衍生物，采纳吸光度法测定食醋中氨基酸态氮的含量。电位滴定法依据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使竣基显示 出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极(或复合电极)插入被测液中构成电池, 用碱液滴定，依据酸度计指示的pH值推断和掌握滴定终点。二、试验原理：1、关于总酸量的测定醋酸为有机弱酸(Ka=L 8X10-5),与NaOH反应式如下：HAc + NaOH = NaAc + H20反应产物为强碱弱酸盐，滴定突跃在碱性范围内，可选用酚酸等碱

3、性范围变化的 指示剂。食用米醋中的主要成分是醋酸，其总酸度用HAc的含量来表示。2、关于食醋中氨基酸含氮量的测定用甲醛法测氨基酸含氮量氨基酸具有酸、碱两重性质，由于氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。由于这两个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入 甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消逝，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定 -COOH基，以间接方法测定氨基酸的含氮量。用碱完全中和-C00I1基时的PH值为 8.49.2,可用酚酬作为指示剂，NaOH作为滴定剂。氨基酸态氮含量二(NXVX0. 014X100%) /W(N： NaOH标准溶液当量浓渡；V： NaOH标准

4、溶液消耗的总量(ml)； W：样品溶液 相当样品重量(克)；0.014：氮的毫克当量。)用吸光度法测氨基酸含氮量二酮与甲醛的混合试剂与a-氨基酸具有特别灵敏的显色反应。依据 Hantzsch反应原理，认为显色产物为3, 5-二乙酰-2, 6-二甲基-1, 4-二氢化毗 咤默酸衍生物，反应式如下：三、所需仪器、试剂的方案用量及配制方法仪器：1.台秤2.电子天平3.锥形瓶 4.铁架台 5.移液管 6.烧杯 7.碱式滴定管 8.容量瓶9.塑料试剂瓶10.称量瓶 11 ,量筒12.酒精灯 13. 721型光栅分光光度计试齐小1、NaOH溶液 0. Imol/L用烧杯在粗天平上称取4g固体NaOH,加入

5、新奇的或 煮沸的除去CO2的蒸储水，溶解完全后，转入带橡皮的试剂瓶中，加水稀释至1L, 充分摇匀。2、酚醐指示剂 2g/L乙醇溶液3、邻苯二甲酸氢钾(KHCsH。)基准物质在100125C干燥lh后，置于干燥器中备用。4、食用醋酸试样5、中性甲醛溶液18%(1+1)6、氨氮标准溶液：称量105c干燥2h的分析纯硫酸镂0.0472克于100mL容量 瓶中，混匀，用水稀释成lmg/L7、显色剂:15mL37%甲醛和7. 8 mL乙酰丙酮混合，加水至100 mL8、缓冲溶液：pH=4. 7的NaAc-HAc缓冲溶液，取NaAc83g溶于水加冰醋酸60mL 稀释至ILo9、百里酚蓝指示剂四、试验步骤“

6、1、0. 1 mol/LNaOII标准溶液浓度的标定在称量瓶中以差减法称量KHP3份，每份0. 40. 5g,分别倒入23滴酚 猷:指示剂，加入40-50mL蒸储水，待试剂完全溶解后，加入2-3滴酚醐指示剂, 用待标定的NaOH溶液滴定至微红色并保持半分钟即为终点，计算NaOH溶液的浓 度和各次标定结果的相对偏差。食用米醋中总酸量的测定用移液管移取食醋试样20. 00mL于100. 0mL容量瓶中，用蒸储水稀释、定 容，摇匀。用移液管移取食醋稀释液20. 00mL于250疝锥形瓶中，加入25mL蒸 储水，2滴酚醐指示剂，用NaOH标准溶液滴定至溶液由无色变为微红，30s不褪 色即为终点，纪录消

7、耗NaOH的体积（平行做3次，相对平均偏差应小于0. 2%）。 依据NaOH标准溶液的浓度和滴定时消耗的体积（V）,可计算出食醋中总酸量。3、甲醛溶液的处理甲醛中常含有微量酸，应事先中和。其方法如下：取原瓶装甲醛上层清液 于烧杯中，加水稀释一倍，加入23滴酚献指示剂，用标准NaOH溶液滴定甲 醛溶液至呈现微红色。4、食用米醋中氨基酸含氮量测定用移液管取L 00ml上述试验中的NaOH标准溶液于100ml的容量瓶中、定容、 待用。用甲醛法测定另取20ml的待测溶液，加入2滴酚醐指示剂，用NaOH滴加到刚好颜色变成粉 红色30秒内颜色不变化，加入甲醛溶液10mL,再加入百里酚蓝指示剂10滴， 用0

8、.001mol/L的NaOH滴定至蓝紫色，30s内不褪色为终点，纪录加入甲醛后消 耗NaOH标准溶液的毫升数。用吸光度法测定汲取曲线的制作和测量波长的选择用吸量管吸取0. 0mL和1. 0mL氨氮标准溶液分别注入两个50mL容量瓶中，各 加入20. 0mL缓冲溶液,加入mL显色剂,水稀释到刻度，混匀。于100C水浴中 加热15min,取出用冷水冷却到室温，移入1cm比色皿，以试剂空白为参比，在 360460nm之间，每隔5nm测一次吸光度，在坐标纸上，以波长入为横坐标， 吸光度A为纵坐标，绘制A与人关系的汲取曲线，从汲取曲线上选择测定N的 相宜波长，一般选用最大汲取波长。标准曲线的制作在7个5

9、0mL的容量瓶中，用移液管分别加入0mL, 0.2 mL, 0.4 mL, 0.6 mL, 0. 8 mL, 1.0 mLlmg/L氨氮溶液，均加入20mL缓冲溶液，20mL显色剂，摇匀， 再用水稀释到刻度，摇匀。于100水浴中加热15min,取出用冷水冷却到室温。 用1cm比色皿，以试剂为参比溶液，在所选择的波长下，测量各溶液的吸光度。 以含N量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。食用米醋中氨基酸含氮量测定用移液管精确吸取适量待测液10mL于50mL容量瓶（或比色皿）中，按标准曲线的制作步骤，加入各种试剂，测量吸光度。从标准曲线上查出和计算 试液中铁的含量（单位为Ug/mL） 五、数据

10、纪录和结果1、邻苯二甲酸氢钾（KHP）的称重（每份约0.40.5g）2、氢氧化钠溶液浓度的标定计算公式:计算公式:ITIkHp/MkhP 义 VnhOH X 10-33、食用米醋中总酸量的测定CnsOH0. 09693计算公式:项目次数123试液体积数20. 0020. 0020. 00VfeOH 终读数(mL)处读数净用量23. 95023. 9524. 00024. 0024. 00024. 00总酸量0. 58040. 58160. 5816总酸量平均值0. 5812肯定偏差-0. 00080. 00040. 0004平均偏差0. 0005相对平均偏差0. 09%4、食用米醋中氨基酸氮含

11、量的测定用甲醛法测定：计算公式：米醋氮含量=1/10 X VNa0Ii X CxaonA用吸光度法测定:1、汲取曲线的制作入nm400405410412414415416418420430440450460吸光0. 170. 180. 180. 180. 180. 180. 190. 180. 180. 170. 130. 110. 09度20689908734302、标准曲线的制作及溶液含铁量的测定吸取待测液体积(mL) ：10. 00mL项目/_编号123456待测液氨氮标准溶 液(lmg/mL)00.20.40. 60. 81.010mL比色测定的 浓度 (ug/mL)00. 0040.

12、 0080.0120.0160. 020吸光度A00. 0370. 0840. 1060. 1630. 1900. 099定 容 体 积(mL) ： 50mL在曲线上查得米醋含量：0.010 ug/mL计算原试液中氮的含量：0.050 ug/mL六、问题与争论1、为什么称取邻苯二甲酸氢钾基准物要在0.4-0. 6g范围内？能否少于0.4g或 多于0.6g?为什么？由于一般分析天平的误差为0. 0002g,为了使测量的相对误差在0.1%以下，式 样的质量就不行以太小，从相对误差的计算中就可以得到试样的质量必需在0. 2g以上，所以称取得质量在0. 4g以上可以保证用分析天平的误差在允许的范 围之

13、内，又由于在滴定分析中，滴定管读书常有0.01的误差，在一次滴定中, 需要读数两次，因此，可能造成0. 02的误差，所以，为了使测量时的相对误 差小于0.1%,消耗滴定剂的用量必需在20. 00ml以上，以减小相对误差，所以 称取邻苯二甲酸氢钾基准物质的质量在0. 4-0. 6g以内，可以保证本次试验中滴 定邻苯二甲酸氢钾所用的氢氧化钠标准溶液的体积即在20. 00以上，又不至于太 多，便利操作。2、加入百里酚蓝指示剂的量可以随便定吗？假如不行以，多少才比较合适？加入百里酚蓝指示剂的量不同，对滴定终点的观看是有影响的，在上述试验过程 当中当滴入百里酚蓝的量为2-3滴的时候，滴定终点的颜色是粉红

14、色的，而且不明显，随着滴数的增加，滴定终点的颜色渐渐明显，当加了 12滴左右的时候, 滴定终点变成蓝紫色，比较简单观看。3、试验中测量出来的酸的量可否用PHac (g.L)表示？不行以，由于米醋中不仅含有醋酸，还存在其他的酸，因此测出来的酸包含有其 他各种形式的酸，所以要用每升溶液中含有氢离子的量来表示。4、酚醐指示剂由物色变成微红色时，溶液的pH为多少？变红的溶液在空气中放 置会变成无色的缘由是什么？酚酸指示剂由物色变成微红色时，溶液的pH为8左右。变红的溶液在空气中放 置会变成无色的缘由是溶液也会汲取空气中的的二氧化碳等酸性气体，使溶液的 PH下降到8以下，所以溶液又会变成无色。5、试验中

15、的甲醛的用量是否可以随便加入？是否越多越好？不是的，当加入的量太少时，-NH2无法充分反应，这时候测出来的值会偏小。 而甲醛是致癌物质，无论是吸入蒸汽还是摄入液体都会引起中毒，对眼、皮肤和 呼吸器官有剧烈的刺激，所以不能用过多的甲醛。6、参比溶液有什么作用？本试验中的用什么做参比？用参比溶液来调整仪器的零点，可消退由于汲取池壁及溶剂对入射光的反射和汲 取带来的误差，并消退干扰的影响，本试验用空白试剂，即0.Ond的氨氮溶液作 为参比溶液。7、用吸光光度法测定的时候，温度是否对反应速度有影响？有影响，本反应随着温度的上升，反应速度加快，当把溶液放在100的水浴中 加热15min,即显色完全，吸光

16、度达到最高恒定值，当我们把溶液放在室温下，要等一天才能显色完全，可见温度对显色是有影响的。8、显色剂的量是否可以任意加入？不是的，本试验显色剂加入过少，则显色不明显，但假如显色剂的量过多，又会 使显色过深，试剂难以辨别。而且在本试验中，假如加入过多显色剂，待测液的 颜色会比任何一瓶标准试剂都深。9、用吸光光度法和甲醛法测出来的值为什么会有那么大差别？用吸光光度法有 什么好处？由于米醋中氮含量特别少，用甲醛法测定的时候由于用氢氧化钠标准溶液滴定邻 苯二甲酸氢钾基准物质的时候有误差，而且滴定含氮量用的氢氧化钠浓度很低， 滴定的过程中可能会与空气中的二氧化碳反应，又增大了误差，所以甲醛法的误 差比较

17、大，测得的值不太精确。相对来说，吸光光度法就有较高的精确度和精密度，而且本法的操作简便，快速，灵敏，选择性好，更适用于米醋中氨基酸氮含量的测定。八、主要参考资料1、武汉高校、中山高校、吉林高校，分析化学试验第四版,高等教育出版社, 20012、朱嘉云，有机分析，化学工业出版社北京,20043、王芬，半微量分析化学试验，中国农业出版社北京,20034、6、wangluowuxian/blog/item/24929f250212406034a80ff4. html7、. 116. 33. 204/fxhx/shiyan/Report6. swf8、北京高校化学系分析化学教研室，基础分析化学试验，北京高校出版社，19939、王建雅，分析专业试验，大连理工高校出版社，2005