微生物学细菌与病毒的微生物学检查.pptx

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1、病原学检查程序标标本本分离培分离培养养鉴定鉴定怎么办怎么办培养基制备培养基制备细菌培养法细菌培养法三段划线、纯培养三段划线、纯培养无菌技术无菌技术油镜使用、细菌形态学观察油镜使用、细菌形态学观察革兰染色法革兰染色法生化反应观察生化反应观察药敏试验药敏试验血清学诊断血清学诊断核酸检测核酸检测第1页/共50页标本染色镜检血平板 观察可疑菌落染色镜检纯培养甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验耐热核酸酶试验动物试验药敏试验化脓性球菌的分离鉴定程序第2页/共50页第3页/共50页Microbiology Lab第4页/共50页标本的采集与送检原则无菌操作感染部位、病变部位采集标本不同时间采集不同标本尽量在使用抗

2、生素前采集检查特异性抗体，采急性期和恢复期双份血清及时送检第5页/共50页第一节 细菌感染的微生物血检查法第6页/共50页一、细菌学诊断示踪性检测形态学检查 分离培养生化试验 血清学鉴定 致病力和药敏测定动物实验毒力检测药物敏感试验 第7页/共50页形态学检查细菌染色检查法暗视野检查 形态和染色性有明显特征的病原菌第8页/共50页革兰染色结果比较 抗酸染色革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌（葡萄球菌）（大肠埃希菌）结核分枝杆菌结核分枝杆菌 MTuberculosis 第9页/共50页确定细菌性感染最可靠的方法培养特征形态特征 病原菌的分离和鉴定：第10页/共50页 菌落大小形态颜色表面性状透明度溶

3、血性 金黄色葡萄球菌光滑型菌落结核分枝杆菌粗糙型菌落第11页/共50页Flame sterilize wire loop,metal forceps,etc before and after use in a hooded Bunsen burner 第12页/共50页 糖发酵试验糖发酵试验 H2S试验试验枸橼盐利用试验枸橼盐利用试验细菌代谢产物的检测 得到细菌纯培养物后，用糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查，是鉴别细菌的重要方法之一。特别是有些细菌特征基本相同，因此有必要经分离培养后用生化试验进行鉴定。但步骤繁杂耗时。随着现代化技术的发展，细菌检测的技术水

4、平也不断地提高，正在逐步实现快速化、微量化、自动化和标准化。生化反应第13页/共50页血清学鉴定利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌（志贺菌属、沙门菌属）进行群和型的鉴别常用方法是玻片凝集试验第14页/共50页 动物试验第15页/共50页毒力检测n n 半数致死量半数致死量 LD50LD50n n 半数感染量半数感染量 ID50ID50n n Elek Elek平板平板第16页/共50页纸碟法试管法小杯法凹孔法 最低抑菌浓度（MIC）是能够抑制细菌生长的最低药物浓度；最低杀菌浓度（MBC）是指能够杀灭细菌最低药物浓度；MIC和MBC的值越低，表示细菌对该药越敏感 药物敏感试验第17页/共5

5、0页二、病原菌成分检测抗原的检测用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分核酸的检测 核酸杂交PCR第18页/共50页Toxins from E.coli 0157:H7 bacteria and others can cause fatal disease in humans,and they can be food borne 第19页/共50页细菌核酸的检测 基因探针DNA印迹杂交(southern blot)质粒指纹图谱分析PCR第20页/共50页PCR Machine聚合酶链反应聚合酶链反应（PCR）PCR产物的检测第21页/共50页 三、抗体的检测辅助诊断抗体存在于血清或其他体液中

6、第22页/共50页由中国科学院研制的IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)，被国家食品药品监督管理局批准进行试生产第23页/共50页Immunology evaluates a patient immune system by detecting the bodies response(an antibody)to a foreign agent(or antigen).The presence of antigens can be detected too第24页/共50页细菌感染的血清学诊断 血清学试验举 例 凝集试验 肥达反应 补体结合试验钩体病 中和试验 抗O试验第25页/共50页BioT

7、hreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBTA Assay and Reader.Tracking Chain of Custody BTA Assay and Reader.Tracking Chain of Custody 第26页/共50页Autonomous Pathogen Detection System(AP

8、DS)The Autonomous Pathogen Detection System is capable of continuous,automated,24-hour monitoring for pathogens,with results reported every 30 minutes 第27页/共50页HANAA in Hand About the size of a brick,the HANAA biodetection system can be held in one hand and weighs less than a kilogram.The system was

9、 designed for emergency response groups,such as firefighters and police,who are often first on the scene at sites where bioterrorism may have occurred.Each handheld system can test four samples at onceeither the same test on four different samples or four different tests on the same sample.HANAA can

10、 provide results in less than 30 minutes,compared with the hours to days that regular laboratory tests typically take.第28页/共50页Bio Sensors Bio Sensors This technique is essentially an ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)method,however with an extremely sensitive all-electronic detection system.第

11、29页/共50页Tiny computer chip can detect toxinsThe lab on a chip,its developers say,could have potential applications in law enforcement,environmental pollution detection,military medical care,or for anyone who needs a cheap and portable method of identifying the presence of specific toxins or DNA with

12、out the benefit of a laboratory.This device could be developed into something medics use in the field to get answers in a matter of minutes rather than hours.Research on the fluorescence microscopy detection system,which provides a cheap and portable method for identifying specific toxins or DNA,was

13、 funded by the National Science Foundation.UC BERKELEY PHOTO 第30页/共50页第二节 病毒感染的微生物学检测法 第31页/共50页 一、一、形态学检查形态学检查 电子显微镜 光学显微镜 内基小体（Negri body），可辅助诊断狂犬病 扫描电镜 透射电镜第32页/共50页第33页/共50页 狂犬病病毒 天花病毒 冠状病毒 SARS冠状病毒冠状病毒第34页/共50页二、病毒分离培养的方法二、病毒分离培养的方法采集标本抑制杂菌（青、链霉素）（青、链霉素）n病毒分离u易感动物-出现病状u鸡胚 -病变或死亡u细胞培养-细胞病变病毒鉴定（血

14、清学方法）（血清学方法）第35页/共50页动物接种 鸡胚培养组织培养 第36页/共50页细胞培养原代细胞二倍体细胞传代细胞第37页/共50页细胞培养技术细胞培养技术第38页/共50页第39页/共50页第40页/共50页三、病毒在细胞内增殖的鉴定指标细胞病变效应（cytopathic effect，CPE）红细胞吸附（hemadsorption）红细胞凝集（hemagglutination）病毒干扰作用（viral interference）中和试验（neutralization test，NT）正常细胞病变细胞第41页/共50页病毒的定量TCID50病毒感染性和毒力的指标是50%组织细胞感染量

15、（50%tissue culture infectious dose）PFU空斑形成试验（plaque formation）用于病毒浓度的精确定量 第42页/共50页空斑形成试验空斑形成试验第43页/共50页 红细胞吸附 hemadsorption 病毒在细胞内增殖，病毒或其血凝素会出现于感染细胞膜上，使感染细胞能与红细胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标 Hemadsorption of Hemadsorption of monkey red blood cellsmonkey red blood cells第44页/共50页 红细胞凝集 hemagglutination 一种检测含血凝

16、素病毒的方法第45页/共50页四、病毒成分的检测病毒核酸的检测 核酸杂交技术核酸扩增技术基因芯片（gene chip）n病毒抗原的检测uu荧光标记技术、荧光标记技术、ELISAELISA或放射免疫标记技术或放射免疫标记技术 第46页/共50页 将已知的抗病毒血清先与病毒悬液混合在一起，在一定温度条件下作用一定时间后，接种于敏感细胞进行培养，观察病毒致细胞病变作用或红细胞吸附现象是否消失。这是比较可靠的病毒诊断方法 中和试验中和试验 neutralization test，NT五、病毒抗体的检测第47页/共50页中和作用血凝血凝抑制第48页/共50页ELISA法法 n 特异性高、敏感性强、操作方便，广泛用于细菌、病毒和其他病原体的临床化验室检测，特别在病毒感染性疾病的诊断中 n蛋白印迹技术蛋白印迹技术 Western blot uu目前目前WHOWHO规定该试验作为规定该试验作为HIVHIV感染的确认试验感染的确认试验 第49页/共50页感谢您的观看！第50页/共50页