血液分析仪及其临床应用.pptx
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1、血血液液分分析析仪仪(hematology analyzer,HA):临临床床血血液液一一般般检检查查最最常常用用仪仪器。器。50年代,美国库尔特(年代,美国库尔特(W.H.Coulter)发明电子血细胞计数仪并申请专利。)发明电子血细胞计数仪并申请专利。第1页/共63页血液分析仪优势:血液分析仪优势:检测项目多检测项目多速度快速度快精度高精度高易操作易操作第2页/共63页一、检测原理一、检测原理检测功能:检测功能:细胞计数功能细胞计数功能细胞分类功能细胞分类功能检测原理分为检测原理分为2类:类:(一)电阻抗法(一)电阻抗法1.电电阻阻抗抗原原理理(principle of electrica
2、l impedance),又又称称库库尔尔特特原原理理(Coulter principle)第3页/共63页Couler计数原理 孔电流 真空 内电极 外电极 -+血细胞 悬液 标本杯第4页/共63页第5页/共63页2.计数部件结构组成计数部件结构组成等渗电解质溶液等渗电解质溶液细胞悬液细胞悬液小小 孔孔 管管(传传 感感 器器 transducer)宝宝 石石 孔孔(直直 径径 100m,厚厚 度度 约约75m)脉冲数量和大小反映细胞:脉冲数量和大小反映细胞:数量数量体积大小体积大小第6页/共63页3.白细胞计数和分类计数原理白细胞计数和分类计数原理仪器将体积为仪器将体积为35450fL的血
3、细胞,分为的血细胞,分为256个通道(个通道(channel)。)。每个通道:每个通道:1.64fl根根 据据 细细 胞胞 大大 小小,分分 别别 置置 于于 不不 同同 的的 通通 道道 中中,显显 示示 血血 细细 胞胞 体体 积积 分分 布布 直直 方方 图图(Histogram)。)。第7页/共63页经溶血素处理脱水后,血细胞体积大小发生了变化!经溶血素处理脱水后,血细胞体积大小发生了变化!第一群(第一群(3590fl)小细胞区:淋巴细胞(体积最小):一般在)小细胞区:淋巴细胞(体积最小):一般在3590fl。第二群(第二群(90160fl)是单个核细胞区,(中间细胞):)是单个核细胞
4、区,(中间细胞):单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等第第三三群群(160fl以以上上)大大细细胞胞区区:嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞(体体积积最最大大):一一般般在在135-350fl第8页/共63页三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图(直三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图(直方图)方图)35 90 160 300 400 450(fl)%第9页/共63页仪器组成:仪器组成:信号发生器信号发生器 放大器放大器阈值调节阈值调节甄别器甄别器整形器整形器 计数系统计数系统 第10页/共63页2.电阻抗法红细胞
5、检测原理电阻抗法红细胞检测原理 (1)红细胞计数和血细胞比容测定)红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。与白细胞计数相似。(%)100 200 300 400(fl)第11页/共63页(2)(2)血血红红蛋蛋白白测测定定:血血红红蛋蛋白白与与溶溶血血剂剂中中的的特特定定试试剂剂结结合合形形成成一一种种血血红红蛋蛋白白衍衍生物,在生物,在530530550nm550nm下进行比色。下进行比色。ICSHICSH推荐用氰化高铁法(推荐用氰化高铁法(540nm540nm比色)。比色)。非氰化溶血剂,如非氰化溶血剂,如SDS-HbSDS-Hb。(3)(3)红细胞其他参数检测红细胞其他参数检测 第1
6、2页/共63页3.3.电阻抗法血小板检测原理电阻抗法血小板检测原理 血小板计数(血小板计数(platelet,PLTplatelet,PLT):):随红细胞在一个系统中进行检测。随红细胞在一个系统中进行检测。直方图在直方图在2 228fl28fl(不同仪器不一)。(不同仪器不一)。血血小小板板平平均均体体积积(mean mean platelet platelet volume,volume,MPVMPV)。)。10 20 30(fl)10 20 30(fl)%第13页/共63页(二)光散射法血液分析仪检测原理(二)光散射法血液分析仪检测原理 组合应用组合应用电学电学光学光学细胞化学等细胞化学
7、等第14页/共63页细胞流电学和光学检测图(细胞流电学和光学检测图(AcT 5diffAcT 5diff)第15页/共63页光散射法白细胞检测原理类别光散射法白细胞检测原理类别(1 1)激光与细胞化学法)激光与细胞化学法 1 1)过氧化物酶检测通道:)过氧化物酶检测通道:嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞、嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞过过氧氧化化物物酶酶活活性性比单核细胞强比单核细胞强淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。散射图定位:散射图定位:X X轴为吸光率(酶反应强度)、轴为吸光率(酶反应强度)、Y Y轴为光散射(细胞大小)显示检测结果。轴为光散射(细胞大小)显示
8、检测结果。2 2)嗜碱性粒细胞)嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道分叶核检测通道。第16页/共63页(2 2)容容 量量、电电 导导、光光 散散 射射(volumevolume,conductivityconductivity,scatter,VCSscatter,VCS)法:)法:血血细细胞胞未未经经任任何何处处理理,保保持持与与体体内内完完全全相相同同状状态下进行。态下进行。VCSVCS法检测原理法检测原理细胞体积技术(测量细胞大小)细胞体积技术(测量细胞大小)电导性技术(测量细胞内部结构)电导性技术(测量细胞内部结构)光散射(光散射(scatter,Sscatter,S)技术(测量细胞形态、)
9、技术(测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒)。细胞核和细胞颗粒)。第17页/共63页 体积体积 电导电导 光散射光散射第18页/共63页VCSVCS可显示可显示3 3种细胞散点图种细胞散点图DF1DF1(体积值和散射光值)(体积值和散射光值)DF2DF2(体积值和电导值)(体积值和电导值)DF3DF3(体积值和电导值):只显示(体积值和电导值):只显示basophil basophil 第19页/共63页细胞流电学和光学散点图(细胞流电学和光学散点图(AcT 5diffAcT 5diff)第20页/共63页VCSVCS血液分析仪正常白细胞散点图实例血液分析仪正常白细胞散点图实例第21页/共63页(3
10、 3)电电阻阻抗抗与与射射频频法法(能能透透入入细细胞胞内内,测测量量核的大小及颗粒的多少):核的大小及颗粒的多少):嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统 5 5种种白白细细胞胞分分类类检检测测系系统统:直直流流电电(direct direct currentcurrent,DCDC)为为横横坐坐标标,以以射射频频(radio radio frequency frequency,RFRF)为纵坐标。)为纵坐标。幼稚细胞检测系统:幼稚细胞检测系统:幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。加加入入硫硫化化氨氨基基酸酸,与与幼幼稚稚细细胞胞
11、的的结结合合量量多多于于较较成熟的细胞成熟的细胞幼幼稚稚细细胞胞对对溶溶血血剂剂有有抵抵抗抗作作用用,从从而而提提供供幼幼稚稚髓髓 细细 胞胞 信信 息息(immature immature myeloid myeloid informationinformation,IMIIMI)。)。第22页/共63页(4 4)多多 角角 度度 偏偏 振振 光光 散散 射射(multi-angle multi-angle polarized polarized scatter scatter separation separation of of white white cell,MAPSScell,MA
12、PSS)法)法00:前前角角光光散散射射(1133),可可粗粗略略测测定细胞大小。定细胞大小。1010:狭狭角角光光散散射射(771111),可可测测定定细胞内部结构相对特征。细胞内部结构相对特征。9090:垂垂直直光光散散射射(7070110110),测测定定细胞核分叶情况。细胞核分叶情况。9090:消消偏偏振振光光散散射射(7070110110),区区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。分嗜酸性粒细胞与其他细胞。第23页/共63页2.2.光散射法红细胞检测原理光散射法红细胞检测原理 低角度低角度(2(23)3):测量红细胞体积:测量红细胞体积高角度高角度(5(515)15):测定红细胞血红蛋白浓度:
13、测定红细胞血红蛋白浓度得得到到MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC测测定定值值,计计算算出出RDWRDW、红红细细胞胞血血红红蛋蛋白白分分布布宽宽度度(red red blood blood cell cell hemoglobin hemoglobin distribution widthdistribution width,HDWHDW)第24页/共63页3.3.光散射法血小板检测原理光散射法血小板检测原理 MieMie理理论论(Mie Mie theory theory of of light light scatter scatter for for homogeneous h
14、omogeneous spheresspheres):当球形化的血小板一个一个通过激光照射区时:当球形化的血小板一个一个通过激光照射区时:第25页/共63页高角度(高角度(551515):检测细胞折射指数():检测细胞折射指数(reactive indexreactive index,RIRI););低角度(低角度(2233):测量细胞大小。):测量细胞大小。大大血血小小板板与与各各种种碎碎片片如如果果体体积积相相似似,但但由由于于内内容容物物不不同同,RIRI相相差差较较大大,故故能能鉴别。鉴别。第26页/共63页5.5.网织红细胞计数(网织红细胞计数(reticulocytereticul
15、ocyte,RETRET)原理)原理 2020世纪世纪9090年代起,有多种检测原理相似网织红细胞分析仪。年代起,有多种检测原理相似网织红细胞分析仪。(1 1)血液分析仪检测原理:)血液分析仪检测原理:用新亚甲蓝染色使红细胞用新亚甲蓝染色使红细胞RNARNA着色或用荧光染料对着色或用荧光染料对RNARNA进行染色。进行染色。第27页/共63页检测参数:检测参数:网织红细胞绝对值(网织红细胞绝对值(RET#RET#)网织红细胞百分数(网织红细胞百分数(RET%RET%)网织红细胞平均体积(网织红细胞平均体积(MCVrMCVr)网织红细胞成熟指数(网织红细胞成熟指数(RMIRMI)网织红细胞分布宽
16、度(网织红细胞分布宽度(reticulocyte distribution width,RDWrreticulocyte distribution width,RDWr)第28页/共63页 新亚甲蓝网织红细胞染色新亚甲蓝网织红细胞染色第29页/共63页第30页/共63页光散射法网织红细胞检测散点图光散射法网织红细胞检测散点图 第31页/共63页二、检测参数二、检测参数(一)检测参数(一)检测参数 中高档仪器检测参数:中高档仪器检测参数:2020项左右或超过项左右或超过4040多项多项第32页/共63页(二)检测结果及表达形式(二)检测结果及表达形式表表 常见血液分析报告用语及英文缩写词常见血液
17、分析报告用语及英文缩写词第33页/共63页三、细胞直方图三、细胞直方图横坐标为血细胞体积大小横坐标为血细胞体积大小纵坐标为不同体积细胞的相对频率。纵坐标为不同体积细胞的相对频率。(一)白细胞直方图(一)白细胞直方图正常白细胞直方图正常白细胞直方图出出现现异异常常直直方方图图时时,常常伴伴警警报报信信号号,如如“H H(highhigh,高高)”或或“L L(lowlow,低低)”。第34页/共63页(二)红细胞直方图(二)红细胞直方图正常红细胞分布:正常红细胞分布:5050200fl 200fl 峰左移峰左移峰右移峰右移双峰双峰(三)血小板直方图(三)血小板直方图正常血小板直方图呈左偏态分布:
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- 血液 分析 及其 临床 应用
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