TPPA介绍学习教程.pptx
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1、珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒概况梅毒概况梅梅毒毒是是由由梅梅毒毒螺螺旋旋体体引引起起的的一一种种慢慢性性、系系统统性性性性传传播播疾疾病病。人人体体受受感感染染后后,螺螺旋旋体体很很快快播播散散到到全全身身,几几乎乎可可侵侵犯犯全全身身各各组织与器官,临床表现多种多样,且时显时隐,病程较长组织与器官,临床表现多种多样,且时显时隐,病程较长中中华华人人民民共共和和国国传传染染病病防防治治法法规规定定要要管管理理的的性性病病是是爱爱滋滋病病、淋淋病病和和梅梅毒毒,应应加加以以重重点点防防治治。卫卫生生部部性性病病防防治治管管理
2、理办办法法则则规规定定除除上上述述3 3种种病病以以外外,还还有有生生殖殖器器疱疱疹疹、尖尖锐锐湿湿疣疣、软软下下疳疳、非非淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎(NGUNGU)、性性病病淋淋巴巴肉肉芽芽肿肿均均为为监监测测性疾病性疾病梅梅毒毒早早期期主主要要侵侵犯犯皮皮肤肤及及粘粘膜膜,晚晚期期除除侵侵犯犯皮皮肤肤、粘粘膜膜外外,还还可可侵侵犯犯心心脏脏血血管管系系统统及及中中枢枢神神经经系系统统;另另一一方方面面,梅梅毒毒又又可多年无症状呈潜伏状态可多年无症状呈潜伏状态梅梅毒毒主主要要通通过过性性接接触触传传染染,也也可可因因其其它它方方式式密密切切接接触触或或输输入入患患者者的的血血液液而而传传染染。
3、梅梅毒毒孕孕妇妇可可通通过过胎胎盘盘使使胎胎儿儿在在宫宫内内受受感感染或出生时接触母亲有病损的产道受染染或出生时接触母亲有病损的产道受染 第1页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关,从社会学角度来看,凡人群中梅毒发病率高,意味着人群中性乱现象严重,提供了艾滋病流行的条件;从医学角度来说,患有梅毒的人,因有局部溃疡,可明显增加带有CD4受体信息的目标细胞,故对HIV感染的易感性增加2-10倍。同样,HIV感染者伴有梅毒,其生殖道排出的HIV的量要比仅有HIV感染者排出的量大得多在HIV感染者
4、中,梅毒血清学反应有时会出现难于解释的现象,因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表现为阴性者,建议考虑HIV检查梅毒与HIV感染第2页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory暗视野显微镜检查法:是目前国内主要的梅毒病原学诊断方法。适用于对一期梅毒及二期梅毒早期的检测。取材部位以硬下疳为主,亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊,阴性不能排除梅毒诊断镀银染色法:与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性,可被银溶液染成棕黑色,再通过普通高倍显微镜进行观察直接免疫荧光法(DFA):是目前国外采用较多的方法,其
5、特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记,如标本中存在梅毒螺旋体,则通过抗原抗体特异性结合,在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体梅毒的病原学检测梅毒的病原学检测第3页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory人人类类对对梅梅毒毒无无先先天天免免疫疫性性,尚尚无无疫疫苗苗接接种种进进行行人人工工免免疫疫,仅仅能能在在受受感感染染后后产产生生感感染染性性免免疫疫。已已完完全全治治愈的早期梅毒患者仍可以再感染愈的早期梅毒患者仍可以再感染感感染染梅梅毒毒后后,首首先先产产生生IgM型型抗抗梅梅毒
6、毒螺螺旋旋体体抗抗体体,感感染染2周周后后即即可可测测出出,早早期期梅梅毒毒抗抗梅梅治治疗疗39个个月月后后或或晚晚期期梅梅毒毒治治疗疗2年年后后,大大部部分分病病人人IgM可可转转阴阴性性,再再感感染染时时又又出出现现阳阳性性,故故IgM型型抗抗体体的的存存在在是是活活动动性梅毒的表现性梅毒的表现感感染染梅梅毒毒四四周周左左右右产产生生IgG型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体,即即使使经经足足量量抗抗梅梅治治疗疗,梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原消消失失后后很很长长时时间间,IgG抗抗体体仍仍可可通通过过记记忆忆细细胞胞的的作作用用继继续续产产生生,甚甚至至终生在血清终生在血清中可测出中可测出
7、梅毒的免疫性(一)第4页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒的免疫性(二)另另一一种种具具有有抗抗体体性性质质的的物物质质叫叫反反应应素素(reagin),是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出的的一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生的的抗抗体体。反反应应素素一一般般在在感感染染后后57周周(或或下下疳疳出出现现后后23周周)产产生生。经正规治疗后可逐渐消失经正规治疗后可逐渐消失胎胎儿儿在在宫宫内内感感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体后后,胚胚胎胎晚晚期期(69个个月月)
8、已已能能合合成成IgM型型抗抗体体,出出生生后后第第3个个月月开开始始形形成成IgG型型抗抗体体;IgM抗抗体体不不能能通通过过胎胎盘盘,而而IgG抗抗体体能能通通过过胎胎盘盘,如如患患儿儿血血清清中中检检侧侧出出19S-IgM抗抗梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据第5页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory非梅毒螺旋体抗原血清试验:是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素,用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试验,原理基本相同:1、性病研究实验室玻片试验(VDRL):
9、由于试剂需现配 现用,故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法 2、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR):在特制的纸片 上进行,加入一定量特制的炭粉,可使抗原抗体出现 凝集,用肉眼可观察结果。3、甲苯胺红试验(TRUST):在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉 颗粒,使结果更易于观察。4、不加热血清反应素试验(USR)梅毒的血清学试验(一)梅毒的血清学试验(一)第6页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷:1、特异性:由于在多种疾病,如急性病毒性感染、自身免疫 性疾病、结缔
10、组织病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素,所以此类试验有时会出现假阳性反应 2、敏感性:非梅毒螺旋体抗原血清试验有时出现弱阳性或阴性结果,而临床上又像二期梅毒,此时应将此血清稀释后做定量试验,如出现阳性结果,则为抗体过量引起的前带现象。12二期梅毒病人可出现此现象而发生梅毒血清假阴性反应。此外,由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体,晚期梅毒反应素又可能转阴,因此这类试验不适于一、三期梅毒,对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时,存在一定数量的漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点:1、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随疗程逐渐下降,故可以作为疗效观察的指标 2
11、、此类方法价格低廉梅毒的血清学试验(二)梅毒的血清学试验(二)第7页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒螺旋体抗原血清试验:用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体,其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法:1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)2、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)3、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)5、梅毒螺旋体快速诊断试验(TP-RT)梅毒的血清学试验(三)梅毒的血清学试验(三)第8页/共47页珠海丽珠试剂有限公
12、司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)FTA-ABS是所有螺旋体试验中最敏感的方法,特异性也很高,被认为是检测梅毒的“金标准”但是,该方法在技术操作上也是最困难的,试验的操作以及结果的判读都必须加以核实。试验可靠性的关键是标准化的结果判断、高质量的荧光标记抗体以及适当的稀释度。由于实验室操作繁琐以及主观判读经常产生错误结果,因此增加标记荧光标记染料的复染可以减低标准化过程中的错误并增加其可读性及重复性 实验需有优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能得到准确的结果,故常不被临床实验室作为首选方法 梅毒的血清学试
13、验(四)梅毒的血清学试验(四)第9页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)原理:用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原,致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞,此致敏红细胞与人血清 或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合,产生肉眼可观 察的凝集反应优点:该方法比FTA-ABS易操作且稳定性好,它的敏感 性除早期梅毒外与FTA-ABS相似,对大样本进行 批量检测时,TPHA也比FTA-ABS易操作,是国 内实验室常用的梅毒螺旋体确证试验方法不足:由于红细胞具有生物活性,可能产生非特异性凝 集,且保存时间较短,批间差较大
14、,故实际使用中 也存在一些问题。目前国内使用的商品化 TPHA 试剂盒均未通过国家的批批检梅毒的血清学试验(五)梅毒的血清学试验(五)第10页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory 梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)原理:TPPA的原理与TPHA基本相同,它以人工合成的 惰性明胶颗粒代替TPHA试验的红细胞作为载体,是TPHA的升级产品 优点:1、试剂稳定,批间差小 2、结果判读更为清晰明确 3、敏感性和特异性较TPHA进一步提高 4、通过了国家的批批检梅毒的血清学试验(六)梅毒的血清学试验(六)第11页/共47页珠海丽珠试剂
15、有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒螺旋体酶联免疫试验(TP-ELISA)原理:以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板,再加入待检 血清以及酶标抗原,形成双抗原夹心,同时检测 IgG、IgM抗体。少数试剂采用间接法,检测IgG 优点:1、敏感性和特异性较高 2、价格较低,适合于对大量样品的筛查 3、可实现操作的自动化、客观化 不足:各家ELISA试剂盒采用的抗原和工艺不同,使测 定的敏感性和特异性产生较大的差异,临床实验 室在选用ELISA试剂前应认真进行评估 梅毒的血清学试验(七)梅毒的血清学试验(七)第12页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠
16、试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory梅毒螺旋体快速诊断试验(TP-RT)原理:双抗原夹心免疫层析试验或间接法免疫渗滤试验,多采用胶体金进行标记,同时检测IgG、IgM抗体 (双抗原夹心法)或单测IgG抗体(间接法)优点:1、简便、快速,不需要特殊的仪器 2、适合于单人份操作,可用于较紧急的场合 不足:1、临床评估资料不多,敏感性、特异性尚有待进 一步考查 2、无法实现自动化,结果判断主观 3、测定结果受温度和时间的影响较大 4、未通过国家的批批检 5、价格较高梅毒的血清学试验(八)梅毒的血清学试验(八)第13页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司L
17、ivzon(Group)Reagent Factory关于梅毒血清学试验程序的探讨(一)先以非梅毒螺旋体抗原血清试验(先以非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR、TRUST等)等)进行初筛,再以梅毒螺旋体抗原血清试验(进行初筛,再以梅毒螺旋体抗原血清试验(TPPA、TPHA、ELISA等)进行确认等)进行确认 优点:非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉,使梅优点:非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉,使梅 毒检测的成本可以保持在低水平毒检测的成本可以保持在低水平 缺点:非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差,缺点:非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差,导致临床上易出现漏检的情况导致临床上易出现漏检的情况同时进
18、行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验原血清试验 优点:这是从技术上而言的最佳方案优点:这是从技术上而言的最佳方案 缺点:人力和试剂成本较高缺点:人力和试剂成本较高先进行梅毒螺旋体抗原血清试验,阳性时再进行非梅先进行梅毒螺旋体抗原血清试验,阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试验毒螺旋体抗原血清试验第14页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory关于梅毒血清学试验程序的探讨(二)梅毒螺旋体抗原血清试验(梅毒螺旋体抗原血清试验(TPPA等)等)(-)阴性报告阴性报告(+)非梅毒
19、螺旋体抗原血清试验(非梅毒螺旋体抗原血清试验(RPR等)等)(+)现症梅毒现症梅毒抗梅治疗,疗效观察抗梅治疗,疗效观察(-)询问梅毒既往感染和治疗史询问梅毒既往感染和治疗史(有)(有)既往感染既往感染(无)(无)随访或抗梅治疗随访或抗梅治疗第15页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory关于梅毒血清学试验程序的探讨(三)一些适合使用梅毒螺旋体抗原血清试验一些适合使用梅毒螺旋体抗原血清试验(TPPA等等)进行筛查进行筛查的情况:的情况:皮肤、性病门诊皮肤、性病门诊 输血前检查输血前检查 手术前检查手术前检查 入院检查入院检查 产前
20、检查产前检查 检验检疫检验检疫第16页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory赛乐迪亚(赛乐迪亚(Serodia)TPPA 梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验第17页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Factory明胶颗粒的制备明 胶阿拉伯胶醋 酸染料/色素偏 磷 酸乙 醇水 3.0m表面电荷-0.760 -0.830 明胶颗粒(电镜照片)第18页/共47页珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司Livzon(Group)Reagent Fact
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