DB42_T 1786.3-2023 生猪疫病防控技术 第3部分：非洲猪瘟监测样品采集技术规程.docx

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1、DB42/T1786.32023目次前言.III引言.V1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14样品采集处理与检测方法.1采样前准备.1样品的采集.2样品处理、保存与运输.2检测方法.25猪场环境监测样品采集.2采样位置选择原则.2环境监测样品采集方法.2办公及生活区样品采集.2猪舍内环境监测样品采集.3猪舍外环境监测样品采集.3人员监测样品采集.3车辆监测样品采集.46猪群监测样品采集.47处理方案.48档案记录.4附录A（资料性）车辆样品采集部位示意图.6附录B（资料性）种猪群样品采集数量计算公式.7附录C（规范性）群体数量较大时采样数量表.8IDB42/T1786.32023引言

2、非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，是严重危害我国养猪业的烈性传染病。由于目前尚无安全有效的疫苗，对于该病的防控主要以加强生物安全为主。制定非洲猪瘟监测样品采集技术规程，有利于养殖场科学规范监测疫情，尽早采取防控措施，有效预防和控制该病的发生与流行，提升生猪疫病防控技术水平。DB42/T1786拟由以下部分构成，具体如下：第1部分：伪狂犬病监测评估技术规程。目的在于对采用的检测技术，监测群体的规模以及监测频次提出相应的规范要求。第2部分：传

3、染性胸膜肺炎监测评估技术规程。目的在于对猪传染性胸膜肺炎的检测、预防和治疗提出相应的规范要求。第3部分：非洲猪瘟监测样品采集技术规程。目的在于对猪场环境非洲猪瘟监测样品采集区域、采集点、采样频次和猪群非洲猪瘟监测样品组织类型、采集数量、采集频次提出相应的规范要求。本文件为系列文件，目的是针对猪伪狂犬病、猪传染性胸膜肺炎和非洲猪瘟提出对应样品采集、检测、监测技术要求。之后涉及不同病原的检测、监测、防控规定，归为本文件的不同部分。VDB42/T1786.32023生猪疫病防控技术第3部分:非洲猪瘟监测样品采集技术规程1范围本文件规定了非洲猪瘟监测样品采集的术语与定义、样品采集处理与检测方法、猪场环

4、境监测样品采集、猪群监测样品采集、处理方案和档案记录。本文件适用于猪场非洲猪瘟监测样品的采集。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18648非洲猪瘟诊断技术GB19489实验室生物安全通用要求GB/T25169畜禽粪便检测技术GB/T27522畜禽养殖污水采样技术规范NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则SN/T1559-2010非洲猪瘟检疫技术规范3术语和定义下列术语和

5、定义适用于本文件。非洲猪瘟africanswinefever是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪和野猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。来源：SN/T1559-2010，3.1，有修改监测monitoring采用规定的方法，持续对特定群体中疫病的发生、流行、分布及相关因素进行观察和检测的过程。监测样品monitoringsample取自生猪或环境，拟通过检测反映个体、群体或者环境有关状况的材料或物料。4样品采集处理与检测方法采样前准备1采样区域采样点样品份数采样频率药房地面、墙壁、门把手、药品货架、窗户、桌椅每个采样点采集3-5个样品，每个采样区

6、域的样品混合成1份样本进行检测。每周1次库房地面、墙壁、门把手、窗户、垫板、货架、维修工具把手办公室地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅兽医室地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅、仪器设备、工作台、器械、冰箱冰柜门把手宿舍地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅、遥控器、洗手台面、水龙头把手、排水孔门卫房地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅、钥匙DB42/T1786.320234.1.1人员准备采样人员经洗手消毒，穿戴好一次性手套、防护服、口罩、鞋套，携带采样所需物品。4.1.2物品准备棉拭子、装有PBS的离心管、真空采血管、记号笔、剪刀、镊子、75%酒精棉、密封袋、样品箱、冰袋等,可根据实际需要增减采样物品。样品的采集

7、采集猪的扁桃体、口鼻拭子等样品及猪场环境中的粉尘、粪便、尿液、水、土壤等样品。口鼻拭子及组织样品的采集应符合NY/T541中的规定；粪便样品采集应符合GB/T25169中的规定；污水样品采集应符合GB/T27522中的规定；土壤样品用无菌镊子取2-5g装入无菌离心管中，做好标记。采集猪样品时要求一猪一副手套，6小时内完成全部样品采集。样品处理、保存与运输样品处理、保存及运输，应符合NY/T541中的规定。检测方法按GB/T18648中的非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法检测非洲猪瘟病毒核酸。5猪场环境监测样品采集采样位置选择原则工作中高频率接触点、不易清洗点等高风险点。环境监测样品采集方法戴一

8、次性PE手套，将用生理盐水充分浸湿的无菌棉拭子在物体表面涂抹3-5次后，放入装有1-2ml灭菌PBS的离心管中。做好标记后冷藏或冷冻状态下保存或送检。办公及生活区样品采集办公及生活区各场所样品采集按表1规定执行。表1办公及生活区样品采集份数及采样频率采样区域采样点样品份数采样频率主要道路每段单独道路（无交叉路面的为一段），选取3个点采集混合样品每个采样点采集1-2份样品，5个采样点的样品混合成1份。每周1次出猪台地面、墙壁、地磅、栏杆、挡板赶猪通道地面、栏杆、挡板猪舍外墙每栋舍每块水帘缝隙、窗户滑道，各3处无害化处理点地面、墙壁、门把手、窗户粪污每栋的排污口、场区主排污口污水每栋的排污口、场区

9、主排污口洗消点所有通道、墙壁、排污口冷库墙壁、门把手、通道土壤主要道路边、猪舍周边裸露的土壤采样区域采样点样品份数采样频率洗澡间地面、墙壁、门把手、窗户、盥洗台面、水龙头把手、排水孔每个采样点采集3-5个样品，每个采样区域的样品混合成1份样本进行检测。每周1次餐厅地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅化验室操作台面、冰箱门外表面、地面、门把手、座椅、显微镜调焦把手厨房地面、墙壁、门把手、窗户、桌椅、抹布、灶台、托盘反面、餐具柜橱、冰箱冰柜门把手、蔬菜筐外来物资表面饲料、兽药、食材、果蔬、办公用品及外包装每次进场前采样区域采样点样品份数采样频率猪舍栏位每栋选择3处栏位内的地面、墙壁、漏缝板、水帘、粪沟侧

10、壁、栏杆、料盘、料桶每个采样点域采集1-2份样品，5个采样点的样品混合成1份。每周1次舍内过道猪舍内每个过道，选取至少3处猪舍粪道侧壁、粪沟内水样、生产工具(粪铲或扫把)各2处通风系统所有风机叶片，防护网窗口各2处猪舍水源每栋猪舍采集2处DB42/T1786.32023表1办公及生活区样品采集份数及采样频率（续）猪舍内环境监测样品采集猪舍内环境样品采集按表2规定执行。表2猪舍内环境样品采集点、样品采集份数及采样频率猪舍外环境监测样品采集猪舍外环境样品采集按表3规定执行。表3猪舍外环境样品采集点、样品采集份数及采样频率人员监测样品采集3猪群抽样比例（%）样品类型采样频率新引种猪100扁桃体、口鼻

11、拭子每次引种前种公猪100扁桃体、口鼻拭子每月一次后备种猪100扁桃体、口鼻拭子生产母猪样本量按附录B公式计算。总体较大时，95%置信水平条件下，不同预期流行率、不同可接受误差的采样数量参见附录C。口鼻拭子口鼻拭子口鼻拭子保育猪口鼻拭子育成猪口鼻拭子异常猪/病死猪100尾根血拭子、深部咽拭子、口腔液、腹股沟淋巴结随时注：每5头猪样混成一份样品检测。人员分类采样部位及份数采样频率猪场隔离点人员用生理盐水浸湿的无菌棉拭子采集鼻孔、耳蜗、头发、手机、手及指甲缝、鞋底、随身钥匙、钱包、背包等样品，每人的样品混合成1份样本。每次入场前洗消人员、司机每隔3天1次生猪转运人员（司机、赶猪人员、司磅员等）每次

12、入场前其他人员每次入场前场内办公及生产人员每月一次DB42/T1786.32023各类人员样品采集按表4规定执行。表4各类人员样品采集份数及采样频率车辆监测样品采集车辆每次进场前用生理盐水浸湿的棉拭子擦拭车门把手、轮胎、前挡泥板、引擎盖板、底盘、后备箱、方向盘、座椅、内部门把手、脚踏板、车厢（前、中、后处的边角、围栏、缝隙）。每辆车采集的样品份数不少于20份，车内部所有样品混合成1份样本，车前部所有样品混合成1份样本，车后部所有样品混合成1份样本。车辆样品采集部位见附录A。6猪群监测样品采集猪群监测样品采集时不同猪群的抽样比例及采样频率按表5规定执行。表5不同猪群抽样比例及采样频率7处理方案按

13、照本文件采样方案检测样品中如非洲猪瘟病毒核酸出现阳性，则按照国家现行非洲猪瘟疫情处置方案处理。采样中应做好场地、物品、操作人员防护用品等消毒或无害化处理。废弃物处置应符合GB19489和NY/T1948中的规定。阳性样品及检测余样均按GB19489要求做无害化处理。8档案记录4DB42/T1786.32023样品采集过程中，随时做好标记和档案记录。档案记录应包括样品采集时间、地点，样品类型，样品数量，样品编号，样品采集人，样品检测方法，样品检测结果，样品检测人，余样处理方法，余样处理人，审核人等内容。5DB42/T1786.32023AA附录A（资料性）车辆样品采集部位示意图小型车监测样品采集

14、部位参见图1。图A.1小型车监测样品采集部位示意图货车等大型车监测样品采集部位参见图2。图A.2大型车监测样品采集部位示意图6𝑒2(B.1)DB42/T1786.32023BB附录B（资料性）种猪群样品采集数量计算公式群内个体数量大，对抽样数量的影响可忽略不计时，采样数量的公式如下：𝑛=𝑝(1𝑝)𝑧2式中：P预期流行率；z来自标准正态分布1-/2百分位点。对于每一个置信水平，都有一个相应的z值。生物学研究中，常用的置信水平为90%、95%、99%，其对应的z值分别是1.64、1.96、2.58，也可以选择其他不同的置信水平，其对应的z值可通过查表获得。e可接受的最大绝对误差。群内个体数量较少时，在计算出相同条件下无限群抽样数量的基础上，根据目标群内个体数量对所需抽样数量进行校正，校正公式如下：𝑛𝑎=𝑛1+𝑛𝑁(B.2)式中：n无限群的抽样数量；N目标群内的个体数。一般当n与N之比大于等于5%时，即抽样比大于等于5%时，运用上述公式进行校正。7DB42/T1786.32023CC附录C（规范性）群体数量较大时采样数量表置信水平为95%时，总体较大时样品采集数量见图C.1。图C.1置信水平为95%时，群体较大时样品采集数量8