微生物病原性球菌实验设计.pdf

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1、 脓汁标本中 病原性球菌的判定 实验目的：1、掌握病原性球菌的形态和培育特征。2、熟习病原性球菌的分别和判定程序。实验资料：（1）标本：脓汁 （2）培育基：血琼脂平板、液体培育基 （3）其余：试管、载玻片、酒精灯、接种环等 实验方法 （1）化脓性球菌常用标本：化脓部位脓液或分泌物、痰液、咽镊子、血液、脑脊液、泌尿道分泌液。依据病变部位，无菌收集，并置于无菌容器中。（2）分别程序 1）用无菌接种环取资料少量，拇指推开皿盖。2）在点燃的酒精灯邻近操作。先平行划线拇指端和食指端平皿直径的三分之 一，旋转平皿 90 度，接种环灭菌，此为第一区。用无菌接种环从第一区带出细 菌作为第二区的开始，再连续划线

2、，大概划平皿面积的四分之一，再次灭菌接种 环，再旋转 90 度，此区为第二区。第三区方法同第二区。第三区与第四区之间，接种环不灭菌直接划线划满平皿其余地区。3）在平皿底部用玻璃铅笔注明班级、姓名、日期等信息。置于 37 摄氏度温箱，皿底向上，培育 18 到 24 小时，备用。4）待血琼脂平板第四区上出现菌落，用无菌接种环挑取平皿中菌落在点燃的 酒精灯邻近接种在液体培育基，用于增菌并编号。5)试管上用玻璃铅笔注明班级、姓名、日期等信息。置于 37 摄氏度温箱，皿底向上，培育 18 到 24 小时，备用。（3）判定程序 1）取各液体培育基中的菌液经过涂片干燥固定染色（HE）显微镜察看。依据染色结果

3、分为：紫色的革兰染色阳性菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌 红色的革兰染色阴性菌：淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌 2）对革兰染色阳性菌（葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌）进行溶血实验。依据结果分为：完整透明溶血环：葡萄球菌、链球菌草绿色溶血环：肺炎链球菌 3）对出现完整透明溶血环的细菌做过氧化氢酶实验，依据结果分为：阳性：葡萄球菌 阴性：链球菌 4）对革兰染色阳性菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌）进行分解麦芽糖实验，依据结果分为：不分解麦芽糖：淋病奈瑟菌 分解麦芽糖产酸不产气：脑膜炎奈瑟菌 （4）确诊程序 依据判定程序得出的初步诊疗，再进行确诊 1）葡萄球菌确实诊 血浆凝结酶试验，判定致病性葡萄球菌 耐热核酸

4、酶试验，用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶 甘露醇发酵试验，金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇，该试验为阳性 2）链球菌确实诊 杆菌肽试验敏感试验，出现抑菌环者即可初步判定为 A 群链球菌 胆盐溶菌试验，肺炎链球菌阳性，草绿色链球菌阴性 血清学判定试验，检测链球菌群的特异性抗原，出现凝聚者为阳性 3）肺炎链球菌确实诊 荚膜肿胀试验，体现阳性则为肺炎链球菌 菊糖发酵实验，肺炎链球菌能够发酵菊糖 胆盐溶菌试验，肺炎链球菌阳性 4）淋病奈瑟菌确实诊 革兰染色后镜检若发现中性粒细胞内有革兰阴性双球菌 5）脑膜炎奈瑟菌确实诊 分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸 氧化酶试验阳性 血清凝聚试验阳性 判定图解 阳性：完整溶血：葡萄球菌 葡 萄 球 葡萄球菌 过 氧 化 氢 酶 实 溶 血 完整溶血：验 G+链球菌 实 验 链球菌 阴性：链球菌 肺炎链球菌 草绿色：肺炎链球菌 革 兰 染 色 淋病奈瑟菌 不分解：淋病奈瑟菌 G 分解麦芽糖实验 脑膜炎奈瑟菌 分解产酸：脑膜炎奈瑟菌