纯化水R2A培养基适用性验证报告.pdf

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1、.R2A 培养基适用性验证报告 1.目的 因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105 非无菌产品 微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。2.范围 适用于本公司纯化水的微生物限度检查。3依据 中华人民共和国药典（2015年版）4.职责权限 姓名 部门 分工职责 组长：组织确认或验证工作，批准方案和报告 负责编制方案、实施、总结报告及微生物检测 负责设备样品提供,配合实施方案的工作 负责微生物检测 5.验证方法 5.1R2A培养基的适用性检查 5.1.1R2A培养基应进行培养基的适用性检查。

2、5.1.2菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5 代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。5.1.3菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml(相当于10.100cfu/0.1ml)菌悬液。5.1.4适用性检查 取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置3035培养不少于5天，计数；5.1.5结果判定 被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.52范围内

3、，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。5.1.6实验前的准备 5.1.6.1仪器设备 设备名称 设备编号 设备 状态 压力蒸汽灭菌器 10-11-53 未检定 己检定在有效期内 激光尘埃粒子计数器 Y09-3016 未检定 己检定在有效期内 温湿度计 JWS-A3 未检定 己检定在有效期内 微压差表 B10093624 未检定 己检定在有效期内 微压差表 B10090070 未检定 己检定在有效期内 细菌培养箱 SPX-100B-Z 未检定 己检定在有效期内 霉菌培养箱 MLX-150-1 未检定 己检定在有效期内 确认人:日期:5.1.6.2操作环境 微

4、生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空 气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。5.1.6.3 器具 无菌培养皿：（直径 90mm）1ml 注射器.5.2计数方法的验证 5.2.1当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母

5、菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。菌种及菌液制备 同计数培养基的适用性检查 5.2.2验证方法 验证试验至少应进行3 次独立的平行试验，并分别计算各试验 菌每次试验的回收率。（1）试验组 薄膜过滤法计数时，取1ml纯化水，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入10100cfu 试验菌，过滤，滤膜置于R2A琼脂培养基上。（2）菌液组 将相当于10100cfu/ml菌悬液置于100ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液过滤。（3）供试品对照组 取1ml纯化水供试液置于100ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，过滤，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。5.2.3

6、结果判断 在3 次独立的平行试验中，试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.52范围内。5.2.4.试验样品 5.2.4.1 纯化水 5.2.4.2 稀释液和试剂：PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 5.2.4.3 器具 无菌培养皿：（直径 90mm）一次性注射器.5.2.4.4 验证用微生物名称及其编号 菌株名称 编号 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10 104 枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63 501 5.2.4.5 培养基 名称 生产商 培养基批号 有效期 琼脂培养基 S（R2A 琼脂）青岛尼赛欣合生物技术有限公司 20151009 20181008 5.2.

7、5 验证试验操作 5.2.5.1 试验菌的制备和稀释 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入 1.1ml 稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成 1ml(相当于 10100cfu/0.1ml)菌悬液.再用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将其稀释制成 10100cfu/ml 的菌悬液。5.2.5.2 将试验分为 3 组 A 样品试验组 取纯化水 1ml，置于装有 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml 的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇 1 分钟。每张滤膜抽滤 100ml 的供试液,用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml 冲洗滤膜,最后加入

8、10100cfu试验菌,每株试验菌平行制备 2 个平皿,按膜过滤法测定其菌数。B 菌液组 将 10-100cfu/ml 菌悬液置于装有 100ml PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇 1 分钟。每张滤膜抽滤 100ml 的供试液通过一张滤膜,平行制备两个.以测定所加的菌数。C 供试品对照组 取纯化水 1ml，置于装有 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲.液 100ml 的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇 1 分钟。每张滤膜抽滤 100ml 的供试液,用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml 冲洗滤膜，平行制备 2 个平皿,按膜过滤法计数测定供试品的本

9、底菌数。5.2.5.3 培养枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌在 3035下培养不少于 5 天，将点计菌落数。并将结果记录于附件。.5.2.6 试验结果 试验组的菌的回收率 接入菌种 菌落计数（cfu/皿）回收率 试验组 供试品对照组 菌液组 铜绿假单胞菌 平均值 枯草芽孢杆菌 平均值 表中：回收率=（试验组的平均菌落数供试品对照组的平均菌落数的值）菌液组的平均菌落数100%。检测人:复核人:复核日期:.5.3验证结论 5.3.1计数性培养基适用性检查结论:试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.52范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判定R2A琼脂培养基的适

10、用性检查符合规定。可用于本公司纯化水微生物限度检查实验。5.3.2校正因子(修正系数)校正因子=1/回收率 .批号:产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称 产品试验组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 菌液组的微生物生长检查记录 菌种名称 菌液组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 供试品对照组的微生物生长检查记录 供试品 供试品对照组计数结果（cfu/皿）平均值 1 2 测试人/测试日期：复核人/复核日期：.批号:产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称 产品试验组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 菌液组的微生物生长检查记录 菌种名称 菌液组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 供试品对照组的微生物生长检查记录 供试品 供试品对照组计数结果（cfu/皿）平均值 1 2 测试人/测试日期：复核人/复核日期：.批号:产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称 产品试验组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 菌液组的微生物生长检查记录 菌种名称 菌液组计数结果（cfu/皿）平均值 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 供试品对照组的微生物生长检查记录 供试品 供试品对照组计数结果（cfu/皿）平均值 1 2 测试人/测试日期：复核人/复核日期：