针刺及艾灸对M3受体mRNA表达的调节作用,针灸推拿论文.docx

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1、针刺及艾灸对M3受体mRNA表达的调节作用,针灸推拿论文我们通过药物乌头碱诱发家兔心律失常，利用 RT-PCR 法检测不同组别的家兔心脏 M3受体mRNA 的 表示出变化 ， 讨论针刺及艾灸对 M3受体mRNA 表示出的调节作用， 为针刺和艾灸治疗心律失常提供实验根据。 1、 材料与方式方法 1.1 实验动物 新西兰家兔，雄性，34 月龄，体质量 23 kg，清洁级，上海生旺实验动物养殖有限公司提供，合格证号：SCXK沪2007-0007。 1.2 主要试剂 乌头碱中国药品生物制品检验所，批号：110720-200410；乌来糖国药集团化学试剂有限公司，批号：20060323；总 RNA 提取

2、试剂盒、RT 试剂盒美国 Invitrogen 试剂公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成； PCR 试剂盒中国 Tiangen 公司。 1.3 主 要仪器 PTC -200 PCR 仪 美 国 ABI 公司；RM6240B 多道生理信号采集处理系统成都仪器厂；AllegraTM64R 低 温 高速离心机 美国Beckman 公司；DYY-III2 水平电泳仪 北京六一仪器厂；DU530 紫外分光光度计 美国 Beckman公司；ZF-90 紫外透射仪 上海顾村电光仪器厂；GENE GENIUS 生物成像系统 美国 Syngene公司；BCM-1000 超净工作台 苏州净化设备有限公司。 1

3、.4 方式方法 1.4.1 动物分组 新西兰家兔 40 只，随机分为对照组、药物组、针刺内关穴组、艾炙组 4 组，每组10 只 。 每 组家兔腹腔注射乌来糖 1.1 g kg 麻 醉后，用标准肢体导联连接，连续记录心电。 药物组：耳缘静脉注射乌头碱 25 gkg；对照组：耳缘静脉注射等容量的生理盐水；针刺内关穴组：耳缘静脉注射乌头碱 25 gkg 后，电针内关穴，电针 20 min，频率 3 Hz，变频 10 Hz，强度以家兔能够耐受，保持平静，不引起挣扎为度；艾灸组：耳缘静脉注射乌头碱 25 gkg 后，在内关穴用特制固定器点燃艾条， 在所取范围往返温和熏灸， 艾条与穴位距离以家兔能耐受为度

4、，艾灸时间 20 min。 1.4.2 心 肌组织 M3受体 mRNA 表示出的检测 4组家兔 24 h 后处死， 迅速取下左心室， 剪成 1cm 1 cm。 用总 RNA 提取试剂盒提取总 RNA，利用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳分析其质量， 并用紫外分光光度计测定其纯度和含量。 取 3 g 总RNA 进行逆转录反响， 取 3 L 逆转录反响产物进行 PCR 反响。 引物：M3上游引物：5 -GGTGT-GATGATTGGTCTGGC -3 ， 下 游 引 物 ：5 -TTC-CAACTGTCACTGCTGCT-3 ，扩增片段为 458 bp。 同时设置 actin 为内参，上游引物：5 - CT

5、CAT-GAAGATCCTCACCGA-3 ，下游引物 ：5 -ATCTC-CTTCTGCATCCTGTC -3 ， 扩 增 片 段 为 387 bp。PCR 反响条件为： 预变性 94 3 min， 94 45 s，58 45 s，72 1 min， 循环 30 次后，72末端延伸 10 min。 PCR 产物上样于 1.2% 的琼脂糖凝胶进行电泳，UV 照相和密度扫描。 1.5 统计学处理 数据用 x s 表示，用 SPSS 15.0统计学软件进行处理， 不同组间的数据用单因素方差分析和 LSD 检验，P0.05 为差异具有统计学意义。 2、 结 果 2.1 模型制备 模型组耳缘静脉注射乌

6、头碱 25 g kg，观察心电图的变化，记录心律失常的发生情况。 2.2 电针干涉对家兔心肌 M3受体 mRNA 表示出的影响 表 1。 结果显示，与正常对照组比拟， 药物组 M3受体的 mRNA 表示出明显增加，针刺内关穴后，M3受体的 mRNA 表示出与药物组比拟有明显降低，P0.05。 2.3 艾灸干涉对家兔心肌 M3受体 mRNA 表示出的影响 表 2。 结果显示，与正常对照组比拟， 药物组 M3受体的 mRNA 表示出明显增加，P0.05。 艾灸组与药物组比拟，M3受体的 mRNA表示出有明显降低 P0.05， 但较针刺内关穴组，M3受体的 mRNA 表示出有所升高，差异不显著。 3

7、、 讨 论 3.1 心律失常的病因复杂，可由多种因素引起心肌电生理的异常。 乌头碱能直接兴奋心肌， 激活Na+通道，促进 Na+内流，对 L 型 Ca2+通道也有明显的通透作用，加速细胞膜的去极化，提高心房传导组织和房室束-浦肯野系统等快反响细胞的自律性，这是乌头碱致心律失常的主要机制。 心脏在交感神经和副交感神经的精细控制下完成正常的生理功能，心脏迷走神经通过刺激 M 型乙酰胆碱受体，调节心脏收缩力、兴奋性和传导。 近些年发现，M3受体不仅具有负性肌力和负性频率的作用，还能够介导一种新的钾电流，并且在充血性心力衰竭、 缺血性心律失常等疾病的发生发展中发挥着重要作用。 当前，越来越多的证据表示

8、清楚，心脏M3受体是一种新型的抗心律失常药物靶点。 研究表示清楚 M3受体在病理状态下和生理状态下的功能性表示出是不同的。 Shi H 等分别在充血性心力衰竭犬的心房肌细胞和健康犬的心房肌细胞上，通过 Western blotting 比拟 M3受体的密度，全细胞膜片钳技术比拟 M3受体冲动的延迟整流钾电流IKM3的电流密度，发现 M3受体密度和 IKM3的电流密度在充血性心力衰竭犬的心房肌细胞上明显增加。 由此可见，心肌 M3受体在病理状态下，功能性表示出明显增加。 宋娟等研究也发现乌头碱诱发心律失常后， 大鼠心肌 M3受体 mRNA 的表示出加强。 本实验通过乌头碱诱发新西兰家兔心律失常后

9、， 通过半定量 RT-PCR 法检测 心脏 M3受体mRNA 的表示出变化，结果也发现心肌 M3受体 mR-NA 的表示出加强。 3.2 内关穴是手厥阴心包经的络穴，又是八脉交会穴，通阴维脉；心包经和手少阳三焦经相表里，故针刺内关能够通三焦，调诸脏。 心居上焦，亦受其调节。 所以，针刺或艾灸内关穴对心律失常有调整作用。 与临床常用的抗心律失常药相比，针刺和艾灸具有使用安全、费用低廉、副作用小的优点。 本实验结果表示清楚针刺内关穴组的 M3受体 mRNA表示出较药物组低，艾灸组的 M3受体 mRNA 表示出也较药物组低， 证实了针刺或艾灸内关穴能够在一定的程度上降低 M3受体的表示出，提示针刺或艾灸内关穴治疗心律失常与 M3受体的介入有关。 以下为参考文献： 1 王 丽娟 ，吕爱红. 救 治急性乌头碱中毒讨论及体会 J. 医 药论坛杂志，2018，3223：141-142. 2 栾 海蓉 ， 李海林 ， 何志鹏 ， 等 . M3受体冲动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响J. 医学综述，2020，1815：2496-2498.