有关基因工程的论文优秀范文参考,基因工程论文.docx
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1、有关基因工程的论文优秀范文参考,基因工程论文基因工程是以分子生物学和微生物学的当代方式方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。本文提供几篇有关基因工程的论文优秀范文,供大家学习。 有关基因工程的论文一: (重组人纤维蛋白原基因在毕赤酵母中的高效表示出 内容摘要目的构建含有人纤维蛋白原基因的毕赤酵母表示出系统,实现胞外高效分泌表示出。方式方法全基因合成人纤维蛋白原3个基因FGA、FGB、FGG,构建表示出载体pGAPZ A-FGB-FGG-FGA-AOX1,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株SMD116
2、8H,抗性挑选获得阳性克隆。发酵液经SDS-PAGE确定蛋白表示出部位,ELISA检测目的蛋白表示出量。表示出产物超滤浓缩后利用AKTA蛋白纯化系统进行分离纯化,Westernblot检测蛋白表示出情况并对纯化产物进行生物学活性测定。结果基因工程菌株摇瓶培养上清液表示出量约15mg/L,生物学活性分析重组蛋白具有凝集活性。结论成功获得了高效分泌表示出重组人纤维蛋白原的毕赤酵母菌株,且分离纯化的蛋白具有生物凝集活性。 本文关键词语重组人纤维蛋白原;毕赤酵母;分泌表示出;分离纯化 当前世界卫生组织确认的凝血因子共13个,大多由肝脏产生,正常情况下,所有凝血因子都处于无活性状态,以无活性酶原形式存在
3、,当某一凝血因子被激活后,可使很多凝血因子按一定的次序先后被激活,逐级放大,直到纤维蛋白构成,血液发生凝固。纤维蛋白原(fibrinogen,Fg),即凝血因子 ,是介入血液凝固的重要凝血因子,血浆中含量高达20004000mg/L1,其分子量340kDa,由完全一样的2个亚基组成共价二聚体,每个亚基含有 (63.5kDa)、 (56kDa)、 (47kDa)3条肽链2,分别由4号染号体(4q28-30)上的3个独立的基因FGA、FGB、FGG编码构成,在肝脏中由独立的核糖体合成其前体蛋白,再经过内质网和高尔基体完成蛋白的组装,各肽链相互通过二硫键互相连接构成Fg单体。2个单体通过3对链间二硫
4、键连接构成对称性二聚体,即Fg。 纤维蛋白原介入凝血经过的机理:当血液中的凝血酶原被激活时,凝血酶作用于纤维蛋白原,切断纤维蛋白原 链N末端区域和 链N末端区域, 链的解离有利于纤维蛋白网络呈线性增长, 链的解离有利于纤维蛋白网络呈侧向增长,最终纤维蛋白单体以错综重叠状态侧向聚合缔结为网络构成的血凝块3。凝血初期非共价键结合可溶性的血凝块,然后在体内凝血因子(谷氨酰胺转移酶,又称纤维蛋白稳定因子)和Ca2+作用下,纤维蛋白单体通过ε-氨基- -谷氨酰基连接,构成不溶性的稳定血凝块4,进而发挥凝血和生理性止血功能。另外,纤维蛋白原还介入体内血小板聚集、纤溶调节、动脉硬化的发生发展
5、、组织损伤及修复等一系列病理和生理经过5-8。 医药级纤维蛋白原提取于人体血液,生产成本高昂且难以避免血源性传染病(如乙肝和艾滋病等)的传播风险,影响其市场应用及推广。随着分子生物学发展,采用基因工程方式方法高效表示出安全、可靠的人纤维蛋白原成为研究热门。2018年,黄星等9将人纤维蛋白原基因在大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表示出,发现人纤维蛋白原3个亚基不能共表示出,即纤维蛋白原的 、 链能用pET系列载体获得表示出,而 链却没有能获得表示出。大肠杆菌等原核生物表示出系统还存在目的蛋白无法正确折叠修饰等空间构造问题,影响纤维蛋白原生物活性。动物细胞表示出系统中,固然能够通过哺乳动物乳腺生物反
6、响器获得特异性表示出具活性的纤维蛋白原,但存在投入成本高、基因打靶的位置效应导致基因整合具随机性、重组蛋白与天然蛋白修饰加工仍存在差异等问题,难以实现规模化生产10-11。酵母表示出系统能够克制大肠杆菌和动物细胞表示出系统的缺乏,通过高密度发酵实现工业化生产,蛋白质翻译后的修饰加工功能愈加完善,蛋白产物更接近天然蛋白质功能。本研究拟通过构建重组人纤维蛋白原酵母表示出载体获得高效分泌表示出的毕赤酵母菌株,分离纯化具生物活性蛋白,为进一步开发有效的药用纤维蛋白原奠定基础。 1、材料与方式方法 1.1、材料 1.1.1、质粒与菌株:质粒pGAPZ A(Invitrogen),含有GAP启动子和Zeo
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