聚丙烯酰胺凝胶电泳牛血清蛋白.pptx
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1、二、实验仪器1.电泳仪2.电泳槽3.注射器4.长针头5.吸管6.培养皿第1页/共10页三、实验试剂1.三羟甲基氨基甲烷(简称Tris)2.贮备液的配制:按下表配制A、B、C、D、E、F各贮备液,然后冷藏于4条件下,以防变质。3.染色液:0.05%氨基黑10B溶于7%醋酸溶液,或者用灵敏度高5倍考马斯亮蓝R250溶液染色。4.脱色液:7%醋酸溶液。5.电极缓冲液(pH8.3甘氨酸-Tris缓冲液):甘氨酸28.8g,Tris0.6g加水定容至1000ml.6.示踪剂:0.01%溴酚蓝溶液。第2页/共10页序号序号ABCDEF1mol/L盐盐酸酸TrisTEMEDACrBis(NH4)2S2O3蔗
2、糖蔗糖加水并稀加水并稀释至释至PH48ml36.6g0.23ml100ml8.948ml5.98g0.46ml100ml6.728g0.735g100ml10g2.5g100ml40g100ml0.14g100ml第3页/共10页四、实验步骤1.制胶:取一支长10cm左右的玻璃管,在一端套上乳胶帽。1)7%聚丙烯酰胺凝胶(PH8.9,分离胶):将试剂按A:C:H2O:F=5ml:10ml:5ml:15ml比例混合于一烧杯中.用滴管将分离胶加入玻璃管至3/4高度,表面再加少量水覆盖,在烘箱中2535下聚合,当有界面出现时,表明已经聚合,吸取分离胶表面的水分。第4页/共10页2)2.5%聚丙烯酰胺
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