种子学(吕世琦)种子超低温贮藏.ppt

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1、 种子超低温贮藏农学133班 第四组小组成员：陈健泳 李梦娜王 宏 王 睿杨新晶 杨天成目录一.发展历程二.概念及原理三.方法及影响因素四.优缺点评价五.现状及前景一.种子贮藏的发展历程如今1922年1949年1956年1976年1990年HEKnowlton将金鱼草花粉冷冻到 180 后，仍获得一定程度的萌发率。这是超低温冷冻保存植物种质的最早报告。Polge 等首次利用二步法完成超低温保存（添加防冻保护剂，慢速降温）日本科学家 A Sakai首次报道耐寒桑树枝经冷冻脱水后超低温保存能存活。MSeibert首次报道麝香石竹茎尖超低温保存成功。Sakai等建立了玻璃化冻存的简单高效的技术体系。

2、超低温保存技术在植物种质资源保存方面逐渐深入，已有近千种植物成功进行了超低温保存。二.概念及原理概念超低温贮藏是指在超低温贮藏是指在80以下的超低温中保存种以下的超低温中保存种质资源的贮藏技术。质资源的贮藏技术。原理在低温下，调节和控制细胞生长代谢的各类酶的作用受到极大在低温下，调节和控制细胞生长代谢的各类酶的作用受到极大抑制，新陈代谢活动基本停止，处于抑制，新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿生机停顿”或或“假死假死”状状态。经过超低温保存后，处于态。经过超低温保存后，处于“假死假死”状态的植物材料能保持正状态的植物材料能保持正常细胞的活性、形态发生潜能和遗传稳定性，从而达到长期保存常细胞的

3、活性、形态发生潜能和遗传稳定性，从而达到长期保存植物材料的目的，理论上可以无限期保存种质资源。植物材料的目的，理论上可以无限期保存种质资源。三.方法及影响因素方法 依据冷冻源不同：1.干冰(79)2.超低温冰箱 3.液氮(196)及液氮蒸气(150180)依据原理不同：1、依据冷冻脱水的原理，结合程序降温的传统保存技术;2、依据植物细胞玻璃化原理，采取快速降温方式的新技术。基本流程基本流程遗传稳定性分析6材料选择与准备1预处理2化冻4降温解冻3存活鉴定51、材料选择与准备 由于材料的特性(植物的基因型、抗冻性及细胞、组织和器官的年龄、生理状态等)会影响超低温保存效果，因此，应根据植物种类，选择

4、适宜进行超低温保存的不同材料类型，寻找适合液氮保存的种子含水量。2、预处理 预处理目的主要是提高分裂相细胞的比例和减少细胞内自由水含量，使材料达到最适于超低温保存的生理状态。预处理的方法有低温锻炼和预培养。3、降温冰冻 降温冰冻方式主要有 4 种：快速降温、慢速降温、两步降温、逐级降温。基本流程基本流程 传统技术存活关键在于降温冷冻环节，而非脱水环节。主要为两步降温法，另外还有慢速降温法和逐级降温法等。传统技技术新新技技术影响因素新技术存活关键在于脱水环节，而非降温冷冻环节。主要有包埋干燥法、玻璃化法和滴冻法这 3 种。4、化冻 因材料类型的不同以及处理方式的差异，其化冻方法也相应不同，主要有

5、常温化冻、快速化冻和慢速化冻 3 种方法。其选择关键是防止化冻过程中细胞内次生结冰和化冻吸水过程中水的渗透冲击对细胞膜体系的破坏。5、存活鉴定 超低温保存后存活鉴定及评价指标与所用的超低温保存技术、材料类型及其再生方式有关，主要有存活率(细胞活力快速染色法、再培养法等)、再生率、萌发率、嫁接成活率、坐果率和结实率等。6、遗传稳定性分析保存后材料不发生遗传变异是种质资源保存的一个关键点。超低温保存中材料经受了一系列逆境胁迫，易诱导超低温保存材料及其再生植株产生变异。因此，必须在利用超低温进行常规大量长期保存植物种质资源前证实超低温保存后材料遗传稳定。基本流程 材料的特性材料的特性是影响超低温保存

6、存活率和再生率的基本因素。植物材料对低温的耐受能力与植物的种属、基因型以及器官、组织和细胞的生理状态有密切关系。不同基因型的植物材料用同一种超低温方法保存后结果也不一样。材材料料特特性性处理理影响因素 超低温保存各步的超低温保存各步的处理理是影响超低温保存存活率和再生率的重要因素，每一步处理都会直接影响超低温保存效果。如低温锻炼温度及时间、预培养中蔗糖或渗透性化合物浓度及处理时间、装载液装载时间、冷冻保护剂类型及处理时间、再生培养基不同激素种类和比例以及光照处理等。1)稳定 植物材料在-80的低温下，调节和控制细胞生长代谢的各类酶的作用受到极大抑制，新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿”或“假

7、死”状态，此时植物材料能保持正常细胞的活性、形态发生潜能和遗传稳定性；2)安全 超低温保存将尽可能避免组织、细胞继代培养及自然界中积累性突变等的发生；3)长久 1903 年获得诺贝尔化学奖的瑞典物理化学家 Arrhenius 研究温度对化学反应速度的影响结果表明，低温能抑制生物体的生化活动，根据 Arrhenius 关系式可推算出生物材料在液氮(196)下可保存几个世纪；四.优缺点优点4)有效 Ozkavukcu 等报道超低温保存 50 年的牛精子复温后的生活力和功能没有发生变化；超低温保存 28 年的豌豆和草莓茎尖生活力没有下降；超低温保存 20 年的苹果休眠芽嫁接后仍能成活；5)经济 超低

8、温长期保存种质资源具有省时、省地、省空间和无病虫害侵染等优点，用于超低温保存的设备简单，不需大量的基建投资，只是前期建库时的仪器设备投入花费要大一点，以后的维持费用较低，只需定期补充液氮而已，省却了监测和繁殖更新费用，节省空间和人力。四.优缺点优点1)预冷冻和解冻过程会对种子产生一些伤害；l 对抗氧化体系的影响l 超低温保存对膜脂的影响l 超低温保存对蛋白的影响2)能使用超低温贮藏的材料有限，几乎仅限于珍稀植物的顽拗型种子。四.优缺点缺点五.现状及前景存在问题目前，超低温保存技术己经成功地应用于上百种植物，保存的材料包括植物悬浮细胞、愈伤组织、原生质体、体细胞胚、花粉、茎尖和分生组织等。但是，

9、这项技术发展得还不成熟这项技术发展得还不成熟。其次目前的研究多侧重于证实某种植物的超低温可贮性，以及保存技术的试验，对冻存机理的研究尚不深入对冻存机理的研究尚不深入。超低温保存大规模实际应用存在一些问题大规模实际应用存在一些问题，还没有形成普遍适用于各种植物的超低温保存技术体系，从而限制了大规模实际应用。五.现状及前景解决措施应该加强以下3个方面的工作:1)对成功进行了超低温保存研究报道的作物，首先要进行技术本土化的建立、优化及实际应用保存试验，然后对其操作流程进行标准化。2)加强未成功进行超低温保存研究报道作物的超低温保存技术体系的开发研究，尤其是我国特有种。3)加强超低温保存有关机理研究，

10、促进超低温保存技术的发展。五.现状及前景前景展望 虽然进行规模化超低温保存的物种数量仍有限，但超低温保存植物种质资源具有广阔的发展前景，尤其在保护珍稀濒危植物方面将具有更大的应用价值。超低温保存己被认为是无性繁殖植物和顽拗性种子植物种质资源保存的理想方式，将在粮食和农业植物遗传资源安全保存方面发挥关键作用，为中国农业可持续发展提供坚实的物质基础。王婷婷,杨建宇,张文明,郑文寅,高灿红,姚大年.液氮超低温贮藏对玉米种子活力的影响 J ,种子 2014(12)陈晓玲,张金梅,辛霞,黄斌,卢新雄.植物种质资源超低温保存现状及其研究进展 J.植物资源学报,2013,14(3):414-427文彬 植物种质资源超低温保存概述 J .植物分类与资源学报,2011,33(3):311-329张玉凤,董经纬,蒋菊生,黄绵佳.种子贮藏的研究进展.安徽农业科学,2007,35(19):5855-5856参考文献 THANKS!小组分工：小组分工：陈健泳 11113321 前景展望李梦娜 J2015301 超低温贮藏的优缺点王 宏 J2015204 方法及影响因素、PPT制作王 睿 11113303 发展历程杨新晶 J2015203 概念及原理、PPT汇报杨天成 11113317 发展现状