藻类毒性试验-水环境保护课件.ppt

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1、第三章藻类毒性试验第七章藻类毒性试验基本内容基本内容(一一)试验方法：试验方法：静止试验：完全不换水静止试验：完全不换水半静止试验：至少每半静止试验：至少每24h24h换水一次，换水一次，对不稳定易挥发的样品每对不稳定易挥发的样品每h h或或六六h h换换水一次更好。水一次更好。藻类急性毒性试验定为藻类急性毒性试验定为96h(4d)96h(4d)一一仪器7 7、分分析析天天秤秤，灵灵敏敏度度0.10.1mgmg,称称重重100100mgmg 8 8、灭菌锅、灭菌锅(15(15磅磅(1.1(1.1kg/cmkg/cm2 2)以上以上,121121以上以上)9 9、恒温干燥箱恒温干燥箱10 10、

2、摇床、摇床100100110110次分次分（二）玻璃容器及容器的清洗（二）玻璃容器及容器的清洗1 1、三角瓶三角瓶（100100、250250、或、或500500mlml）2 2、5050mlml比色管比色管3 3、量筒量筒（1010、100100、250250、10001000mlml）4 4、移移液液管管（0.5,0.5,1.0,1.0,2.0,2.0,5.0,5.0,10,10010,100mlml）5 5、离心管离心管6 6、试剂瓶试剂瓶 容器的清洗容器的清洗 1 1、玻璃器皿用洗剂刷洗玻璃器皿用洗剂刷洗2 2、用自来水冲洗、用自来水冲洗5 5次次3 3、水水滤滤干干后后置置10%10

3、%的的盐盐酸酸溶溶液液中中浸浸泡泡过过夜夜4 4、再用自来水反复冲洗干净、再用自来水反复冲洗干净5 5、然后用蒸馏水洗、然后用蒸馏水洗 3 3次次(三三)培养基制备培养基制备水生4号培养基硫酸铵硫酸铵(NH4)2SO4 0.20g过磷酸钙过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+(CaSO4H2O)0.030g 硫酸镁硫酸镁MgSO47H2O 0.080g 碳酸氢钠碳酸氢钠NaHCO 0.100g氯化钾氯化钾KCL 0.023三化铁三化铁FeCl3 0.150ml土壤浸出液土壤浸出液 0.5ml蒸馏水蒸馏水 1000ml1 1、按按每每种种营营养养，分分别别配配成成10001000倍倍贮贮备液。备液

4、。2 2、每每种种贮贮备备液液各各取取1 1mLmL加加到到蒸蒸馏馏水水中，中，最终体积为最终体积为1 1升。升。3 3、必必须须注注意意，每每加加一一种种贮贮备备液液后后应应充充分分摇摇匀匀后后，再再加加入入另另一一种种贮贮备备液。液。配配 制制 步步 骤骤现现 用用 培培 养养 基基 NH4NO 0.2g KH2PO4 0.1g CaCL2 0.1g MgSO4 0.1g FeCL3 痕量 A5 1mg 水 1L1 1、上述藻种可以从备有藻种的有关、上述藻种可以从备有藻种的有关单位索取单位索取;2 2、也可以从邻近的水体采取、也可以从邻近的水体采取;3 3、必须先经分离与纯化、必须先经分离

5、与纯化;4 4、获得纯种，用于毒性试验、获得纯种，用于毒性试验.备注备注：二二 试验处理试验处理三三 毒性预备试验毒性预备试验目的在于探明毒物对藻类的半数有效浓度(EC50)的范围;为正式试验打基础;其处理浓度的间距可大一些，以尽可能卡住EC50值。预 试 验 浓度浓度 活动的大型活动的大型溞溞 90 0 35 0 10 0 3.5 0 1 0 0.35 5 0.035 5 0.01 5 因此进行正式试验的浓度范围应为因此进行正式试验的浓度范围应为0.35-1%.0.35-1%.预 试 验 结 果T是试验结果时，每种浓度中活动的大型溞总数。P是试验结果时，每种浓度中不大活动大型溞的百分数。浓度

6、浓度%1234TP0 055552000.35553417150.48224312400.6231127650.8016214801.00000190 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 90 8070605040 30 20 10 .24h(EC500.55%)对对数数浓浓度度死亡率死亡率 大型大型溞溞的半数有效浓度的半数有效浓度24hEC50的测定的测定四 预备试验1试验浓度按等对数间距设置;2一般至少要5个毒物浓度和个对照;3如果能做7个毒物浓度，对试验更为有利;4预备试验的方法与培养条件均同正式试验.内容：内容：五五 正式试验正式试验(二)样

7、品的制备 根据预备试验的结果:1、按等对数间距取5至7个毒物浓度;2、其中一个能引起生长率下降50%的浓度;3、并在此浓度上下至少各设两个浓度;4、另外加一个对照，各浓度组均设三个平行样。(三)藻种的制备与移种量1、取同步生长的藻类培养液离心;2、弃去上清液;3、用适量体积的浓度为15mgL的碳酸氢钠溶液将沉淀细胞再悬浮并再离心;4、用同样浓度的碳酸氢钠溶液悬浮细胞，配成 所需的初始细胞浓度.不同藻种的初始细胞密度计算 例如：假定月芽藻液细胞密度为5105个细胞/ml，培养液体积为10ml，那么加0.2ml藻液即可得到1103个细胞/ml的初始浓度。（四）藻类培养条件1 蓝（硅）藻，在242，

8、白色荧光灯光照下培养，光强2000米烛光（或2152米烛光）10%；2 绿藻在同样温度4000米烛光（或4304米烛光）10%的条件下培养，培养容器可置摇床上振荡（110次/分）;（四）藻类培养条件人工通以含CO2 3%的空气或定时摇动，以便空气交换，光暗比为14:10或12:12。（五）藻类生长测定 一般为24或48h取样一次;在96h，取样测定毒物对藻类影响的EC50值，并与对照比，生长率下降50%的毒物浓度。确定藻类生长的指标:1 光密度：用分光光度计或比色仪在波长600750nm处直接测定藻类的吸光率。2 细胞数 （）用用血血球球计计数数板板或或浮浮游游植植物物计计数数框框直直接接显显

9、微微镜镜计计数数或或用用电电子子颗粒计数器计数，颗粒计数器计数，（）如如果果是是丝丝状状藻藻类类，则则先先用用超超速速搅搅拌拌器器或或超超声声处处理理使使丝丝状状藻藻体破碎后，再用显微镜计数体破碎后，再用显微镜计数,（）同同一一样样品品计计数数两两次次，计计数数结结果果之之差差如如果果15%15%，则则需需计计数数第三次。第三次。3 叶绿素含量在萃取（90%的丙酮）之后，常用分光光度法在波长663和645nm处测定其吸光率，按下式计算叶绿素含量。全叶绿素（mg/L）20.2A645+8.02A6633 叶绿素含量叶绿素a(mg/l)=12.7A 663-2.69A645叶绿素b(mg/l)=22.9A645-4.68A663式中：A=吸光率。4测定藻类细胞干重将藻类离心或沉淀、过滤后，用坩埚烘干，称重为藻类细胞的干重。5 藻类生物量藻类细胞数和光密度应用简便，重复性好，是藻类毒性试验中最主要的测试指标。6 试验数据的统计与结果分析(1)对试验进行数理统计，确定试验的可靠性;(2)结果的数据应是三个平行样的平均值;6 试验数据的统计与结果分析(3)统计方法多选用卡方测验和直线回归;(4)无论哪种方法，显著性界限要求在0.05以上，即p0.05。谢 谢!