第二章-天然产物有效成分的毒理学安全性与功能性评价-课件.ppt

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1、第二章第二章 天然产物有效成分的天然产物有效成分的毒理学安全性和功能性评价毒理学安全性和功能性评价 毒理学评价毒理学评价 安全性评价安全性评价 功能性评价功能性评价vv毒理学毒理学毒理学毒理学(toxicology)toxicology)是研究化学、物理和生物因素对机体的损害作用、生是研究化学、物理和生物因素对机体的损害作用、生是研究化学、物理和生物因素对机体的损害作用、生是研究化学、物理和生物因素对机体的损害作用、生物学机制（物学机制（物学机制（物学机制（biologic mechanismsbiologic mechanisms）、）、）、）、危险度评价（危险度评价（危险度评价（危险度评价

2、（risk risk assessmentassessment）和危险度管理（和危险度管理（和危险度管理（和危险度管理（risk managementrisk management）的科学。的科学。的科学。的科学。毒理学主要分为三个研究领域，即描述毒理学毒理学主要分为三个研究领域，即描述毒理学毒理学主要分为三个研究领域，即描述毒理学毒理学主要分为三个研究领域，即描述毒理学、机制毒理机制毒理机制毒理机制毒理学和管理毒理学学和管理毒理学学和管理毒理学学和管理毒理学。vv 卫生毒理学卫生毒理学卫生毒理学卫生毒理学(health toxicologyhealth toxicology)是利用毒理学的概

3、念和方法，从预防医学角度，研究人类是利用毒理学的概念和方法，从预防医学角度，研究人类是利用毒理学的概念和方法，从预防医学角度，研究人类是利用毒理学的概念和方法，从预防医学角度，研究人类生活和生产活动中可能接触到的外来化合物对机体的生物学作生活和生产活动中可能接触到的外来化合物对机体的生物学作生活和生产活动中可能接触到的外来化合物对机体的生物学作生活和生产活动中可能接触到的外来化合物对机体的生物学作用，特别是损害作用，亦即毒性作用及其机理的科学。卫生毒用，特别是损害作用，亦即毒性作用及其机理的科学。卫生毒用，特别是损害作用，亦即毒性作用及其机理的科学。卫生毒用，特别是损害作用，亦即毒性作用及其机

4、理的科学。卫生毒理学属于预防医学的范畴，也是毒理学的一个分支学科。理学属于预防医学的范畴，也是毒理学的一个分支学科。理学属于预防医学的范畴，也是毒理学的一个分支学科。理学属于预防医学的范畴，也是毒理学的一个分支学科。一、毒理学安全性评价一、毒理学安全性评价n n外源化学物外源化学物外源化学物外源化学物(xenobiotics)xenobiotics)是在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触是在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触是在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触是在人类生活的外界环境中存在、可能与机体接触并进入机体，在体内呈现一定的生物学作用的一些化学并进入机体，在体内呈现一

5、定的生物学作用的一些化学并进入机体，在体内呈现一定的生物学作用的一些化学并进入机体，在体内呈现一定的生物学作用的一些化学物质，又称为物质，又称为物质，又称为物质，又称为“外源生物活性物质外源生物活性物质外源生物活性物质外源生物活性物质”。n n内源化学物内源化学物内源化学物内源化学物 是指机体内原已存在的和代谢过程中所形成的产物是指机体内原已存在的和代谢过程中所形成的产物是指机体内原已存在的和代谢过程中所形成的产物是指机体内原已存在的和代谢过程中所形成的产物或中间产物。毒理学研究外源化学物对机体的有害作用，或中间产物。毒理学研究外源化学物对机体的有害作用，或中间产物。毒理学研究外源化学物对机体

6、的有害作用，或中间产物。毒理学研究外源化学物对机体的有害作用，而不是有益作用而不是有益作用而不是有益作用而不是有益作用(如营养作用、治疗作用等如营养作用、治疗作用等如营养作用、治疗作用等如营养作用、治疗作用等)。（一）毒理学概述n n毒理学的目的毒理学的目的毒理学的目的毒理学的目的 任何一种化学物质在一定条件下都可能是对任何一种化学物质在一定条件下都可能是对任何一种化学物质在一定条件下都可能是对任何一种化学物质在一定条件下都可能是对机体有害的，毒理学的目的就在于研究外源化机体有害的，毒理学的目的就在于研究外源化机体有害的，毒理学的目的就在于研究外源化机体有害的，毒理学的目的就在于研究外源化学物

7、质的毒性和产生毒性作用的条件，阐明剂学物质的毒性和产生毒性作用的条件，阐明剂学物质的毒性和产生毒性作用的条件，阐明剂学物质的毒性和产生毒性作用的条件，阐明剂量一效应量一效应量一效应量一效应(反应反应反应反应)关系，为制订卫生标准及防治关系，为制订卫生标准及防治关系，为制订卫生标准及防治关系，为制订卫生标准及防治措施提供理论依据。措施提供理论依据。措施提供理论依据。措施提供理论依据。机制毒理学机制毒理学(mechanistic mechanistic toxicologytoxicology)证证证证实实实实与与与与人人人人类类类类直直直直接接接接相相相相关关关关的的的的实实实实验验验验动动动动

8、物物物物中中中中所所所所观观观观察察察察到到到到的的的的损损损损害作用（癌症、出生缺陷等）。害作用（癌症、出生缺陷等）。害作用（癌症、出生缺陷等）。害作用（癌症、出生缺陷等）。验验验验证证证证可可可可能能能能与与与与人人人人类类类类无无无无关关关关的的的的发发发发生生生生于于于于实实实实验验验验动动动动物物物物中中中中的的的的有有有有害害害害效应。效应。效应。效应。设设设设计计计计和和和和生生生生产产产产较较较较为为为为安安安安全全全全的的的的化化化化学学学学物物物物以以以以及及及及合合合合理理理理治治治治疗疗疗疗化化化化学学学学中毒和临床疾病。中毒和临床疾病。中毒和临床疾病。中毒和临床疾病。

9、进进进进一一一一步步步步加加加加深深深深对对对对基基基基础础础础生生生生理理理理学学学学、药药药药理理理理学学学学、细细细细胞胞胞胞生生生生物物物物学学学学和生物化学的了解。和生物化学的了解。和生物化学的了解。和生物化学的了解。管理毒理学管理毒理学(regulatory regulatory toxicologytoxicology)根据描述和机制毒理学的研究资料进行科学决策，根据描述和机制毒理学的研究资料进行科学决策，协助政府部门制定卫生标准、相关法规条例和管协助政府部门制定卫生标准、相关法规条例和管理措施并付诸实施，以确保化学物、药品、食品理措施并付诸实施，以确保化学物、药品、食品等进入市

10、场足够安全，达到保护人民群众身心健等进入市场足够安全，达到保护人民群众身心健康的目的。康的目的。古代与中世纪毒理学古代与中世纪毒理学古代与中世纪毒理学古代与中世纪毒理学 毒理学一词源于希腊文字毒理学一词源于希腊文字毒理学一词源于希腊文字毒理学一词源于希腊文字“toxikontoxikontoxikontoxikon”公公公公元元元元前前前前2735273527352735年年年年，神神神神农农农农编编编编辑辑辑辑完完完完成成成成了了了了40404040卷卷卷卷“本本本本草草草草”典典典典籍籍籍籍 公元前公元前公元前公元前2650265026502650年，黄帝撰写了年，黄帝撰写了年，黄帝撰写了

11、年，黄帝撰写了内经内经内经内经 古古古古埃埃埃埃及及及及、古古古古希希希希腊腊腊腊及及及及古古古古罗罗罗罗马马马马等等等等有有有有关关关关文文文文献献献献中中中中都都都都有有有有关关关关于于于于有有有有毒毒毒毒植植植植物物物物和和和和矿矿矿矿物物物物的的的的描描描描述述述述，积积积积累累累累了了了了关关关关于于于于有有有有毒毒毒毒物物物物质质质质及及及及中中中中毒的知识。毒的知识。毒的知识。毒的知识。（二）（二）毒理学简史毒理学简史现代毒理学现代毒理学现代毒理学现代毒理学 1930193019301930年年年年实实实实验验验验毒毒毒毒理理理理学学学学的的的的第第第第一一一一本本本本杂杂杂杂志

12、志志志ToxicologyToxicologyToxicology创刊，创刊，创刊，创刊，同年在美国成立了同年在美国成立了同年在美国成立了同年在美国成立了NIHNIHNIHNIH 1937193719371937年年年年引引引引起起起起急急急急性性性性肾肾肾肾衰衰衰衰竭竭竭竭和和和和死死死死亡亡亡亡的的的的“磺磺磺磺胺胺胺胺事事事事件件件件”，促使了美国促使了美国促使了美国促使了美国FDAFDAFDAFDA的成立的成立的成立的成立 1955195519551955年年年年，LehmanLehmanLehmanLehman和和和和他他他他的的的的同同同同事事事事共共共共同同同同出出出出版版版版了

13、了了了食食食食品品品品、药药药药品和化品和化品和化品和化妆妆妆妆品中化学物的安全性品中化学物的安全性品中化学物的安全性品中化学物的安全性评评评评价价价价 通通通通过过过过了了了了许许许许多多多多新新新新的的的的法法法法规规规规，创创创创办办办办了了了了许许许许多多多多新新新新的的的的杂杂杂杂志志志志，成立了国成立了国成立了国成立了国际际际际毒理学毒理学毒理学毒理学协协协协会（会（会（会（1965196519651965）上海甲肝暴发 自自 1988 1988 年年 1 1 月月 19 19 日起日起,上海市民中上海市民中突然发生不明原因的发热、呕吐、反食、乏突然发生不明原因的发热、呕吐、反食、

14、乏力和黄疸等症状的病例力和黄疸等症状的病例,数日内成倍增长数日内成倍增长,截止到当年的截止到当年的 3 3 月月 18 18 日日,共发生共发生 29230 29230 例。例。南京汤山中毒事件 2002 2002 年年年年 9 9 月月月月 14 14 日日日日,南京汤山发生一起特大投南京汤山发生一起特大投南京汤山发生一起特大投南京汤山发生一起特大投毒案。犯罪分子陈正平将所携带的剧毒鼠药毒案。犯罪分子陈正平将所携带的剧毒鼠药毒案。犯罪分子陈正平将所携带的剧毒鼠药毒案。犯罪分子陈正平将所携带的剧毒鼠药“毒鼠毒鼠毒鼠毒鼠强强强强”投放到投放到投放到投放到“正武正武正武正武”面食店食品原料内面食店

15、食品原料内面食店食品原料内面食店食品原料内,造成造成造成造成 395 395 人因食用有毒食品而中毒人因食用有毒食品而中毒人因食用有毒食品而中毒人因食用有毒食品而中毒,死亡死亡死亡死亡 42 42 人。人。人。人。河北白沟苯中毒事件 2002 年初年初,在河北省高碑店市白沟镇箱在河北省高碑店市白沟镇箱包生包生 产加工企业打工的几名外地务工者产加工企业打工的几名外地务工者,陆陆续出现了中毒症状续出现了中毒症状,并有并有 6 人相继死亡人相继死亡,后经后经卫生部门调查确定为苯中毒事件卫生部门调查确定为苯中毒事件。印度博帕尔灾难印度博帕尔灾难 1984 1984 年年年年 12 12 月月月月 3

16、3 日日日日,美国的跨国公司联合碳化美国的跨国公司联合碳化美国的跨国公司联合碳化美国的跨国公司联合碳化物公司在印度中央联邦首府博帕尔开办的一家农物公司在印度中央联邦首府博帕尔开办的一家农物公司在印度中央联邦首府博帕尔开办的一家农物公司在印度中央联邦首府博帕尔开办的一家农药厂药厂药厂药厂,发生了一起严重的毒气泄漏事故发生了一起严重的毒气泄漏事故发生了一起严重的毒气泄漏事故发生了一起严重的毒气泄漏事故,给当地居给当地居给当地居给当地居民带来巨大民带来巨大民带来巨大民带来巨大 的灾难。据报道的灾难。据报道的灾难。据报道的灾难。据报道,共有共有共有共有36003600多人死于多人死于多人死于多人死于

17、这次事故。这次事故。这次事故。这次事故。德法荷比二恶英事件 1999年年，比比利利时时、荷荷兰兰、法法国国、德德国国相相继继发发生生因因二二恶恶英英污污染染导导致致畜畜禽禽类类产产品品及及乳乳制制品品含含高高浓浓度度二二恶恶英英的的事事件件。二二恶恶英英事事件件使使当当年比利时损失超过年比利时损失超过 10 亿欧元。亿欧元。英国疯牛病 疯疯疯疯牛牛牛牛病病病病在在在在人人人人类类类类中中中中的的的的表表表表现现现现为为为为新新新新型型型型克克克克雅雅雅雅氏氏氏氏症症症症，患患患患者者者者脑脑脑脑部部部部会会会会出出出出现现现现海海海海绵绵绵绵状状状状空空空空洞洞洞洞，导导导导致致致致记记记记忆

18、忆忆忆丧丧丧丧失失失失，身身身身体体体体功能失调，最终神经错乱甚至死亡。功能失调，最终神经错乱甚至死亡。功能失调，最终神经错乱甚至死亡。功能失调，最终神经错乱甚至死亡。19971997年年年年，英英英英国国国国科科科科学学学学家家家家曾曾曾曾经经经经预预预预计计计计，在在在在最最最最糟糟糟糟糕糕糕糕的的的的情情情情况况况况下下下下，可可可可能能能能会会会会有有有有10001000万万万万人人人人最最最最终终终终死死死死于于于于新新新新型型型型克克克克雅雅雅雅氏氏氏氏症症症症。20022002年这一预计数字降为年这一预计数字降为年这一预计数字降为年这一预计数字降为5 5万人。万人。万人。万人。2

19、0002000年年年年7 7月月月月，在在在在英英英英国国国国有有有有超超超超过过过过34 34 000000个个个个牧牧牧牧场场场场的的的的 17 17 万多头牛感染了疯牛病。万多头牛感染了疯牛病。万多头牛感染了疯牛病。万多头牛感染了疯牛病。vv毒毒毒毒理理理理学学学学主主主主要要要要是是是是借借借借助助助助于于于于动动动动物物物物模模模模型型型型模模模模拟拟拟拟引引引引起起起起人人人人体体体体中中中中毒毒毒毒的的的的各各各各种种种种条条条条件件件件，观观观观察察察察实实实实验验验验动动动动物物物物的的的的毒毒毒毒性性性性反反反反应应应应，再再再再外外外外推推推推到到到到人人人人。由由由由于

20、于于于动动动动物物物物，特特特特别别别别是是是是哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物和和和和人人人人体体体体在在在在解解解解剖剖剖剖、生生生生理理理理和和和和生生生生化化化化代代代代谢谢谢谢过过过过程程程程方方方方面面面面有有有有很很很很多多多多相相相相似似似似之之之之处处处处，这这这这就就就就是是是是利利利利用用用用动动动动物物物物实实实实验验验验的结果可以外推到人的基础。的结果可以外推到人的基础。的结果可以外推到人的基础。的结果可以外推到人的基础。vv毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织、毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织、毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织、

21、毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织、细胞进行。根据所采用的方法不同，可分为体内试验细胞进行。根据所采用的方法不同，可分为体内试验细胞进行。根据所采用的方法不同，可分为体内试验细胞进行。根据所采用的方法不同，可分为体内试验(in vivo testin vivo testin vivo testin vivo test)和体外试验和体外试验和体外试验和体外试验(in vitro testin vitro testin vitro testin vitro test)。毒理学毒理学毒理学毒理学还利用限定人体试验和流行病学调查直接研究外源化还利用限定人体试验和流行病学调查直接研究外源化还

22、利用限定人体试验和流行病学调查直接研究外源化还利用限定人体试验和流行病学调查直接研究外源化学物对人体和人群健康的影响。学物对人体和人群健康的影响。学物对人体和人群健康的影响。学物对人体和人群健康的影响。（三）（三）毒理学的研究方法毒理学的研究方法 表表表表1-1 1-1 某些化学物的半数致死量（某些化学物的半数致死量（某些化学物的半数致死量（某些化学物的半数致死量（LDLD5050）化学物化学物化学物化学物物物物物 种种种种LDLD5050（mg/kg)mg/kg)乙醇乙醇乙醇乙醇小小小小 鼠鼠鼠鼠10,000 10,000 氯化钠氯化钠氯化钠氯化钠小小小小 鼠鼠鼠鼠 4,000 4,000硫

23、酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁大大大大 鼠鼠鼠鼠 1,500 1,500硫酸吗啡硫酸吗啡硫酸吗啡硫酸吗啡大大大大 鼠鼠鼠鼠 900 900苯巴比托钠盐苯巴比托钠盐苯巴比托钠盐苯巴比托钠盐大大大大 鼠鼠鼠鼠 150 150DDTDDT大大大大 鼠鼠鼠鼠 100 100木印防已苦毒素木印防已苦毒素木印防已苦毒素木印防已苦毒素大大大大 鼠鼠鼠鼠 5 5硫酸士的宁硫酸士的宁硫酸士的宁硫酸士的宁大大大大 鼠鼠鼠鼠 2 2烟碱烟碱烟碱烟碱大大大大 鼠鼠鼠鼠 1 1d-d-筒剑毒碱筒剑毒碱筒剑毒碱筒剑毒碱大大大大 鼠鼠鼠鼠 0.5 0.5河豚毒素河豚毒素河豚毒素河豚毒素大大大大 鼠鼠鼠鼠 0.1 0.1二恶

24、英二恶英二恶英二恶英豚豚豚豚 鼠鼠鼠鼠 0.001 0.001肉毒杆菌毒素肉毒杆菌毒素肉毒杆菌毒素肉毒杆菌毒素大大大大 鼠鼠鼠鼠 0.000,01 0.000,012.2.体外试验体外试验利用游离器官、培养的细胞或细胞器进行利用游离器官、培养的细胞或细胞器进行毒理学研究，多用于外源化学物对机体急毒理学研究，多用于外源化学物对机体急性毒作用的初步筛检、作用机制和代谢转性毒作用的初步筛检、作用机制和代谢转化过程的深入观察研究。体外试验系统缺化过程的深入观察研究。体外试验系统缺乏整体毒物动力学过程，并且难以研究外乏整体毒物动力学过程，并且难以研究外源化学物的慢性毒作用。源化学物的慢性毒作用。(1)(

25、1)游游游游离离离离器器器器官官官官：利利利利用用用用器器器器官官官官灌灌灌灌流流流流技技技技术术术术将将将将特特特特定定定定的的的的液液液液体体体体通通通通过过过过血血血血管管管管流流流流经经经经某某某某一一一一离离离离体体体体的的的的脏脏脏脏器器器器(肝肝肝肝脏脏脏脏、肾肾肾肾脏脏脏脏、肺肺肺肺、脑脑脑脑等等等等)，借借借借此此此此可可可可使使使使离离离离体体体体脏脏脏脏器器器器在在在在一一一一定定定定时时时时间间间间内内内内保保保保持持持持生生生生活活活活状状状状态态态态，与与与与受受受受试试试试化化化化学学学学物物物物接接接接触触触触，观观观观察察察察在在在在该该该该脏脏脏脏器器器器出

26、出出出现现现现有有有有害害害害作作作作用用用用，以以以以及及及及受受受受试试试试化化化化学学学学物物物物在在在在该该该该脏脏脏脏器器器器中中中中的的的的代谢情况。代谢情况。代谢情况。代谢情况。(2)(2)细细细细胞胞胞胞：利利利利用用用用从从从从动动动动物物物物或或或或人人人人的的的的脏脏脏脏器器器器新新新新分分分分离离离离的的的的细细细细胞胞胞胞(原原原原代代代代细细细细胞胞胞胞，primary primary cell)cell)或或或或经经经经传传传传代代代代培培培培养养养养的的的的细细细细胞胞胞胞如如如如细细细细胞胞胞胞株株株株(cell(cell strain)strain)及及及及

27、细细细细胞系胞系胞系胞系(cell line)(cell line)。(3)(3)细细细细胞胞胞胞器器器器(organelle)(organelle)：将将将将细细细细胞胞胞胞制制制制作作作作匀匀匀匀浆浆浆浆，进进进进一一一一步步步步离离离离心心心心分分分分离离离离成成成成为为为为不不不不同同同同的的的的细细细细胞胞胞胞器器器器或或或或组组组组分分分分，例例例例如如如如线线线线粒粒粒粒体体体体、微微微微粒粒粒粒体体体体、核核核核等等等等，用于实验。用于实验。用于实验。用于实验。体体体体内内内内试试试试验验验验和和和和体体体体外外外外试试试试验验验验各各各各有有有有其其其其优优优优点点点点和和和

28、和局局局局限限限限性性性性，应应应应主主主主要要要要根根根根据据据据实实实实验研究的目的要求，采用最适当的方法，并且互相验证。验研究的目的要求，采用最适当的方法，并且互相验证。验研究的目的要求，采用最适当的方法，并且互相验证。验研究的目的要求，采用最适当的方法，并且互相验证。3.3.3.3.人体观察人体观察人体观察人体观察 通过中毒事故的处理或治疗，可以直接获得关通过中毒事故的处理或治疗，可以直接获得关通过中毒事故的处理或治疗，可以直接获得关通过中毒事故的处理或治疗，可以直接获得关于人体的毒理学资料，这是临床毒理学的主要于人体的毒理学资料，这是临床毒理学的主要于人体的毒理学资料，这是临床毒理学

29、的主要于人体的毒理学资料，这是临床毒理学的主要研究内容。有时可设计一些不损害人体健康的研究内容。有时可设计一些不损害人体健康的研究内容。有时可设计一些不损害人体健康的研究内容。有时可设计一些不损害人体健康的受控的实验，但仅限于低浓度、短时间的接触，受控的实验，但仅限于低浓度、短时间的接触，受控的实验，但仅限于低浓度、短时间的接触，受控的实验，但仅限于低浓度、短时间的接触，并且毒作用应有可逆性。并且毒作用应有可逆性。并且毒作用应有可逆性。并且毒作用应有可逆性。毒理学研究方法的优缺点毒理学研究方法的优缺点毒理学研究方法的优缺点毒理学研究方法的优缺点 研究方法研究方法研究方法研究方法流行病学研究流行

30、病学研究流行病学研究流行病学研究 受控的临床研究受控的临床研究受控的临床研究受控的临床研究 毒理学体内试验毒理学体内试验毒理学体内试验毒理学体内试验 毒理学体外试验毒理学体外试验毒理学体外试验毒理学体外试验 优点优点优点优点 真实的暴露条件真实的暴露条件真实的暴露条件真实的暴露条件在在在在各各各各化化化化学学学学物物物物之之之之间间间间发发发发生生生生相互作用相互作用相互作用相互作用测定在人群的作用测定在人群的作用测定在人群的作用测定在人群的作用表示全部的人敏感性表示全部的人敏感性表示全部的人敏感性表示全部的人敏感性 规定的限定暴露条件规定的限定暴露条件规定的限定暴露条件规定的限定暴露条件在人

31、群中测定反应在人群中测定反应在人群中测定反应在人群中测定反应对对对对某某某某组组组组人人人人群群群群(如如如如哮哮哮哮喘喘喘喘)的研究是有力的的研究是有力的的研究是有力的的研究是有力的能测定效应的强度能测定效应的强度能测定效应的强度能测定效应的强度 易于控制暴露条件易于控制暴露条件易于控制暴露条件易于控制暴露条件能测定多种效应能测定多种效应能测定多种效应能测定多种效应能能能能评评评评价价价价宿宿宿宿主主主主持持持持征征征征的的的的作作作作用用用用(如如如如：性性性性别别别别、年年年年龄龄龄龄、遗遗遗遗传传传传特特特特征征征征等等等等和和和和其其其其他他他他调调调调控因素饮食等控因素饮食等控因素

32、饮食等控因素饮食等)能评价机制能评价机制能评价机制能评价机制 影影影影响响响响因因因因素素素素少少少少，易易易易于于于于控控控控制制制制可可可可进进进进行行行行某某某某些些些些深深深深入入入入的的的的研研研研究究究究(如：机制，代谢如：机制，代谢如：机制，代谢如：机制，代谢)人力物力花费较少人力物力花费较少人力物力花费较少人力物力花费较少 缺点缺点缺点缺点耗资、耗时多耗资、耗时多耗资、耗时多耗资、耗时多(多多多多为为为为回回回回顾顾顾顾性性性性)，无无无无健健健健康保护康保护康保护康保护难难难难以以以以确确确确定定定定暴暴暴暴露露露露，有有有有混混混混杂暴露问题杂暴露问题杂暴露问题杂暴露问题可

33、可可可检检检检测测测测的的的的危危危危险险险险性性性性增增增增加加加加必需达到必需达到必需达到必需达到2 2倍以上倍以上倍以上倍以上测定指标较粗测定指标较粗测定指标较粗测定指标较粗(发病发病发病发病率，死亡率率，死亡率率，死亡率率，死亡率)耗资多耗资多耗资多耗资多较较较较低低低低浓浓浓浓度度度度和和和和较较较较短短短短时时时时间间间间的暴露的暴露的暴露的暴露限限限限于于于于较较较较少少少少量量量量的的的的人人人人群群群群(一般一般一般一般50)50)限限限限于于于于暂暂暂暂时时时时、微微微微小小小小、可可可可逆的效应逆的效应逆的效应逆的效应一一一一般般般般不不不不适适适适于于于于研研研研究究究

34、究最最最最敏敏敏敏感的人群感的人群感的人群感的人群动动动动物物物物暴暴暴暴露露露露与与与与人人人人暴暴暴暴露露露露相相相相关的不确定性关的不确定性关的不确定性关的不确定性受受受受控控控控的的的的饲饲饲饲养养养养条条条条件件件件与与与与人人人人的实际情况不一致的实际情况不一致的实际情况不一致的实际情况不一致暴露的浓度和时间的暴露的浓度和时间的暴露的浓度和时间的暴露的浓度和时间的模式显著地不同于人模式显著地不同于人模式显著地不同于人模式显著地不同于人群的暴露群的暴露群的暴露群的暴露 不不不不能能能能全全全全面面面面反反反反映映映映毒毒毒毒作作作作用用用用，不不不不能能能能作作作作为为为为毒毒毒毒性

35、性性性评评评评价价价价和和和和危危危危险险险险性性性性评评评评价价价价的的的的最最最最后后后后依依依依据据据据难以观察慢性毒作用难以观察慢性毒作用难以观察慢性毒作用难以观察慢性毒作用 （四）安全毒理学评价试验的四个阶段（四）安全毒理学评价试验的四个阶段与试验原则与试验原则1.1.试验的四个阶段试验的四个阶段试验的四个阶段试验的四个阶段n n第一阶段：急性毒性试验，包括经口急性毒性第一阶段：急性毒性试验，包括经口急性毒性第一阶段：急性毒性试验，包括经口急性毒性第一阶段：急性毒性试验，包括经口急性毒性（LD50LD50）和联合急性毒性。）和联合急性毒性。）和联合急性毒性。）和联合急性毒性。n n第

36、二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、短期第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、短期第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、短期第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、短期喂养试验。喂养试验。喂养试验。喂养试验。n n第三阶段：亚慢性毒性试验（第三阶段：亚慢性毒性试验（第三阶段：亚慢性毒性试验（第三阶段：亚慢性毒性试验（9090天喂养试验）、天喂养试验）、天喂养试验）、天喂养试验）、繁殖试验和代谢试验。繁殖试验和代谢试验。繁殖试验和代谢试验。繁殖试验和代谢试验。n n第四阶段：慢性毒性实验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性实验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性实验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性实

37、验（包括致癌试验）第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、第二阶段：遗传毒性试验、传统致畸试验、短期喂养试验短期喂养试验 n n目的：目的：目的：目的：（1 1）遗传毒性试验）遗传毒性试验）遗传毒性试验）遗传毒性试验 对受试物的遗传毒性以及是否具有潜在致癌作用进行筛选。对受试物的遗传毒性以及是否具有潜在致癌作用进行筛选。对受试物的遗传毒性以及是否具有潜在致癌作用进行筛选。对受试物的遗传毒性以及是否具有潜在致癌作用进行筛选。（2 2）传统致畸试验）传统致畸试验）传统致畸试验）传统致畸试验 了解受试物对胎仔是否具有致畸作用。了解受试物对胎仔是否具有致畸作用。了解受试物对胎仔是否具有致畸作用。了解受试

38、物对胎仔是否具有致畸作用。（3 3）短期喂养试验）短期喂养试验）短期喂养试验）短期喂养试验 对只需进行第一、二阶段毒性试验的受试物，在急性毒性对只需进行第一、二阶段毒性试验的受试物，在急性毒性对只需进行第一、二阶段毒性试验的受试物，在急性毒性对只需进行第一、二阶段毒性试验的受试物，在急性毒性试验的基础上，通过短期（试验的基础上，通过短期（试验的基础上，通过短期（试验的基础上，通过短期（30d30d）喂养试验，进一步了解）喂养试验，进一步了解）喂养试验，进一步了解）喂养试验，进一步了解其毒性作用，并可初步估计最大无作用剂量。其毒性作用，并可初步估计最大无作用剂量。其毒性作用，并可初步估计最大无作

39、用剂量。其毒性作用，并可初步估计最大无作用剂量。试验内容：试验内容：（1）细菌致突变试验：鼠伤寒沙门氏菌）细菌致突变试验：鼠伤寒沙门氏菌/哺哺乳动物微粒体酶试验（乳动物微粒体酶试验（Ames试验）为首选试验）为首选项目，必要时可另选和加选其他试验。项目，必要时可另选和加选其他试验。（2）小鼠骨髓微核率测定或骨髓细胞染色体）小鼠骨髓微核率测定或骨髓细胞染色体畸变分析畸变分析（3）小鼠精子畸形分析和睾丸染色体畸变分）小鼠精子畸形分析和睾丸染色体畸变分析。析。第三阶段：亚慢性毒性试验（第三阶段：亚慢性毒性试验（90天喂养试验）天喂养试验）、繁殖试验和代谢试验。、繁殖试验和代谢试验。n n目的：观察受

40、试物以不同剂量水平经较长期喂养后对动物目的：观察受试物以不同剂量水平经较长期喂养后对动物目的：观察受试物以不同剂量水平经较长期喂养后对动物目的：观察受试物以不同剂量水平经较长期喂养后对动物的毒性作用性质和靶器官，并初步确定最大作用剂量；了的毒性作用性质和靶器官，并初步确定最大作用剂量；了的毒性作用性质和靶器官，并初步确定最大作用剂量；了的毒性作用性质和靶器官，并初步确定最大作用剂量；了解受试物对动物繁殖及对仔代的致畸作用，为慢性毒性和解受试物对动物繁殖及对仔代的致畸作用，为慢性毒性和解受试物对动物繁殖及对仔代的致畸作用，为慢性毒性和解受试物对动物繁殖及对仔代的致畸作用，为慢性毒性和致癌试验的剂

41、量选择提供依据。致癌试验的剂量选择提供依据。致癌试验的剂量选择提供依据。致癌试验的剂量选择提供依据。n n试验内容：试验内容：试验内容：试验内容：90d 90d喂养试验喂养试验喂养试验喂养试验 繁殖试验：繁殖试验：繁殖试验：繁殖试验：代谢试验：了解受试物在体内的吸收、分布和排泄速度以代谢试验：了解受试物在体内的吸收、分布和排泄速度以代谢试验：了解受试物在体内的吸收、分布和排泄速度以代谢试验：了解受试物在体内的吸收、分布和排泄速度以及蓄积性，寻找可能的靶器官；为选择慢性毒性试验的合及蓄积性，寻找可能的靶器官；为选择慢性毒性试验的合及蓄积性，寻找可能的靶器官；为选择慢性毒性试验的合及蓄积性，寻找可

42、能的靶器官；为选择慢性毒性试验的合适动物种系提供依据；了解有无毒性代谢产物的形成。适动物种系提供依据；了解有无毒性代谢产物的形成。适动物种系提供依据；了解有无毒性代谢产物的形成。适动物种系提供依据；了解有无毒性代谢产物的形成。第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）n n目的：了解经长期接触受试物后出现的毒目的：了解经长期接触受试物后出现的毒性作用，尤其是进行性或不可逆的毒性作性作用，尤其是进行性或不可逆的毒性作用以及致癌作用；最后确定最大无作用剂用以及致癌作用；最后确定最大无作用剂

43、量，为受试物能否应用于食品的最终评价量，为受试物能否应用于食品的最终评价提供依据。提供依据。（五）食品毒理学试验结果的判定（五）食品毒理学试验结果的判定1.1.急性毒性试验急性毒性试验急性毒性试验急性毒性试验 如如如如LD50LD50剂量小于人的可能摄入量的剂量小于人的可能摄入量的剂量小于人的可能摄入量的剂量小于人的可能摄入量的1010倍，则放弃倍，则放弃倍，则放弃倍，则放弃该受试物用于食品，不再继续其他毒理学试验。该受试物用于食品，不再继续其他毒理学试验。该受试物用于食品，不再继续其他毒理学试验。该受试物用于食品，不再继续其他毒理学试验。如大于如大于如大于如大于1010倍者，可进入下一阶段毒

44、理学试验。凡倍者，可进入下一阶段毒理学试验。凡倍者，可进入下一阶段毒理学试验。凡倍者，可进入下一阶段毒理学试验。凡LD50LD50在人的可能摄入量的在人的可能摄入量的在人的可能摄入量的在人的可能摄入量的1010倍左右时，应进行重倍左右时，应进行重倍左右时，应进行重倍左右时，应进行重复试验，或用另一种方法进行验证。复试验，或用另一种方法进行验证。复试验，或用另一种方法进行验证。复试验，或用另一种方法进行验证。2.遗传毒性试验遗传毒性试验 n n根据受试物的化学结构、理化性质以及对遗传物质作根据受试物的化学结构、理化性质以及对遗传物质作根据受试物的化学结构、理化性质以及对遗传物质作根据受试物的化学

45、结构、理化性质以及对遗传物质作用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和生殖细胞的原则。生殖细胞的原则。生殖细胞的原则。生殖细胞的原则。鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验）试验）小鼠骨髓微核率测定小鼠骨髓微核率测定骨髓细胞染色体畸变分析骨髓细胞染色体畸变分析小鼠精子畸形分析小鼠精子畸形分析睾丸染色体畸变分析试验睾丸染色体畸变分析试验选择四项试验结果判断原则：结果判断原则：n n其中三项试验为阳性：则表示

46、该受试物很可能具有遗传毒性作用和致其中三项试验为阳性：则表示该受试物很可能具有遗传毒性作用和致其中三项试验为阳性：则表示该受试物很可能具有遗传毒性作用和致其中三项试验为阳性：则表示该受试物很可能具有遗传毒性作用和致癌作用，一般应放弃该受试物应用于食品；毋需进行其他项目的毒理癌作用，一般应放弃该受试物应用于食品；毋需进行其他项目的毒理癌作用，一般应放弃该受试物应用于食品；毋需进行其他项目的毒理癌作用，一般应放弃该受试物应用于食品；毋需进行其他项目的毒理学试验。学试验。学试验。学试验。n n其中两项试验为阳性：而且短期喂养试验显示该受试物具有显著的毒其中两项试验为阳性：而且短期喂养试验显示该受试物

47、具有显著的毒其中两项试验为阳性：而且短期喂养试验显示该受试物具有显著的毒其中两项试验为阳性：而且短期喂养试验显示该受试物具有显著的毒性作用，一般应放弃该受试物用于食品；如短期喂养试验显示有可疑性作用，一般应放弃该受试物用于食品；如短期喂养试验显示有可疑性作用，一般应放弃该受试物用于食品；如短期喂养试验显示有可疑性作用，一般应放弃该受试物用于食品；如短期喂养试验显示有可疑的毒性作用，则经初步评价后，根据受试物的重要性和可能摄入量等，的毒性作用，则经初步评价后，根据受试物的重要性和可能摄入量等，的毒性作用，则经初步评价后，根据受试物的重要性和可能摄入量等，的毒性作用，则经初步评价后，根据受试物的重

48、要性和可能摄入量等，综合权衡利弊再作出决定。综合权衡利弊再作出决定。综合权衡利弊再作出决定。综合权衡利弊再作出决定。n n其中一项试验为阳性，则再选择其中一项试验为阳性，则再选择其中一项试验为阳性，则再选择其中一项试验为阳性，则再选择V79/HGPRTV79/HGPRT基因突变试验、显性致基因突变试验、显性致基因突变试验、显性致基因突变试验、显性致死试验、果蝇伴性隐性致死试验，程序外死试验、果蝇伴性隐性致死试验，程序外死试验、果蝇伴性隐性致死试验，程序外死试验、果蝇伴性隐性致死试验，程序外DNADNA修复合成（修复合成（修复合成（修复合成（UDSUDS）试）试）试）试验中的两项遗传毒性试验。如

49、再选的两项试验均为阳性，则无论短期验中的两项遗传毒性试验。如再选的两项试验均为阳性，则无论短期验中的两项遗传毒性试验。如再选的两项试验均为阳性，则无论短期验中的两项遗传毒性试验。如再选的两项试验均为阳性，则无论短期喂养试验和传统致畸试验是否显示有毒性与致畸作用，均应放弃该受喂养试验和传统致畸试验是否显示有毒性与致畸作用，均应放弃该受喂养试验和传统致畸试验是否显示有毒性与致畸作用，均应放弃该受喂养试验和传统致畸试验是否显示有毒性与致畸作用，均应放弃该受试物用于食品；如有一项为阳性，而在短期喂养试验和传统致畸试验试物用于食品；如有一项为阳性，而在短期喂养试验和传统致畸试验试物用于食品；如有一项为阳

50、性，而在短期喂养试验和传统致畸试验试物用于食品；如有一项为阳性，而在短期喂养试验和传统致畸试验中未见有明显毒性与致畸作用，则可进入第三阶段毒性试验。如四项中未见有明显毒性与致畸作用，则可进入第三阶段毒性试验。如四项中未见有明显毒性与致畸作用，则可进入第三阶段毒性试验。如四项中未见有明显毒性与致畸作用，则可进入第三阶段毒性试验。如四项试验均为阴性，则可进入第三阶段毒性试验。试验均为阴性，则可进入第三阶段毒性试验。试验均为阴性，则可进入第三阶段毒性试验。试验均为阴性，则可进入第三阶段毒性试验。3.短期喂养试验短期喂养试验 n n在只要求进行两阶段毒性试验时，若短期在只要求进行两阶段毒性试验时，若短