生化工程下游技术第三章发酵液预处理课件.ppt
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1、 第三章第三章 发酵液预处理发酵液预处理 第一节第一节 发酵液特性发酵液特性 第二节第二节 发酵液特性的改变方法发酵液特性的改变方法 第三节第三节 菌体分离菌体分离 第四节第四节 固液分离工程及设备固液分离工程及设备 过滤设备过滤设备 离心分离设备离心分离设备 发酵液预处理提取生物制品的第一步往往是预处理预处理。预处理的目的是为提取和精制等后继工序的顺利进行创造条件。主要完成三个方面的工作:1)分离发酵液中的菌体和其它悬浮颗粒2)除去部分可溶性杂质3)改变发酵液的物理性质,促进固形物分离速度。分离发酵液中的细胞或其它固体物质,是提分离发酵液中的细胞或其它固体物质,是提分离发酵液中的细胞或其它固
2、体物质,是提分离发酵液中的细胞或其它固体物质,是提取发酵产品的重要步骤。取发酵产品的重要步骤。取发酵产品的重要步骤。取发酵产品的重要步骤。一、发酵液特性:发酵液属悬浮液包括水相和固相发酵液属悬浮液包括水相和固相水相水相:与固液分离相关的水的性质包括水的极性,水的黏与固液分离相关的水的性质包括水的极性,水的黏性和水的表面张力。性和水的表面张力。固相固相:对发酵法中固体颗粒的分离,是基于它们在粒度、密度、溶解度对发酵法中固体颗粒的分离,是基于它们在粒度、密度、溶解度及扩散度等方面的差异而实现的。用过滤、离心分离、沉降等方及扩散度等方面的差异而实现的。用过滤、离心分离、沉降等方法分离的粒度范围,一般
3、为法分离的粒度范围,一般为0.30.310m10m。发酵液特性:1)发酵产物浓度较低发酵产物浓度较低(溶有用作培养基成分的无机盐类和有机物;除产物外,还含有副产物及色素类物质)2)悬浮物颗粒小悬浮物颗粒小,相对密度接近发酵液;3)固体粒子具有可压缩性可压缩性;4)液相粘度大液相粘度大(发酵液浓缩时起泡多,生成粘性物质);5)性质不稳定性质不稳定(发酵产物中不稳定者居多);6)容易被使产物分解的杂菌污染杂菌污染;因此,从发酵液中分离细胞颗粒一般比较困难。因此,从发酵液中分离细胞颗粒一般比较困难。通过预处理可以改善发酵液的流体性能,降低滤饼比阻,提高过滤与分离速率。如固体颗粒的过滤或沉降速度提高固
4、体颗粒的过滤或沉降速度提高1010倍是很常见的,有时甚至可达倍是很常见的,有时甚至可达100100200200倍。倍。第二节发酵液特性的改变方法一、降低液体粘度一、降低液体粘度(加快滤速)(加快滤速)1)加水稀释)加水稀释(对收率及操作时间的影响)(对收率及操作时间的影响)2)加热升温)加热升温(对目的物的影响)(对目的物的影响)最简单、最经济的预处理方法是加热,加热不仅最简单、最经济的预处理方法是加热,加热不仅可以增加料液的操作特性,也可以对其进行灭菌。但可以增加料液的操作特性,也可以对其进行灭菌。但加热变性的方法只适合于对热稳定性的产物。加热变性的方法只适合于对热稳定性的产物。用用加加水水
5、稀稀释释法法虽虽能能降降低低液液体体粘粘度度,但但会会增增加加悬悬浮浮液液的的体体积积,加加大大后后继继过过程程的的处处理理任任务务。而而且且,单单从从过过滤滤操操作作看看,稀稀释释后后过过滤滤速速率率提提高高的的百百分分比比必必须须大大于于加加水水比比才才能能认认为为有有效效,即即若若加加水水一一倍倍,则则稀稀释释后后液液体体的的粘粘度度必必须须开开降降50以以上上才才能能有效提高过滤速率。有效提高过滤速率。升高温度可有效降低液体粘度,提高过滤速升高温度可有效降低液体粘度,提高过滤速率,如率,如12Be麦芽汁麦芽汁40时粘度为时粘度为1.2X103Pas,升高至升高至75其粘度可下降一半,过
6、滤速率可加倍。其粘度可下降一半,过滤速率可加倍。同时,在适当温度和受热时间下可使蛋白质凝聚,同时,在适当温度和受热时间下可使蛋白质凝聚,形成较大颗粒的凝聚物,进一步改善了发酵液的形成较大颗粒的凝聚物,进一步改善了发酵液的过滤特性。过滤特性。二、调整pH通过这种方式调整电离度和电荷性质,有利于形成较大的颗通过这种方式调整电离度和电荷性质,有利于形成较大的颗粒或颗粒的电荷特性,降低某些物质的溶解度或悬浮性能,粒或颗粒的电荷特性,降低某些物质的溶解度或悬浮性能,改改善发酵液的过滤特性。善发酵液的过滤特性。pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质,适当值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性
7、质,适当调节调节pH值可改善其过滤特性。此法是发酵工业中发酵液预处理值可改善其过滤特性。此法是发酵工业中发酵液预处理较常用的方法之一。较常用的方法之一。对于氨基酸、蛋白质等两性物质的提取,采用对于氨基酸、蛋白质等两性物质的提取,采用等电点沉淀法。味精生产中,利用等电点(味精生产中,利用等电点(pH3.22)、则沉淀法提取谷氨酸。对、则沉淀法提取谷氨酸。对于蛋白质;由于羧基的电离度比氨基的大于蛋白质;由于羧基的电离度比氨基的大,蛋白质的酸性性质通蛋白质的酸性性质通常强于碱性,因而大多数蛋白质的等电点都在酸性范围内常强于碱性,因而大多数蛋白质的等电点都在酸性范围内(pH4.05.5).利用酸性来调
8、节发酵液利用酸性来调节发酵液pH值使之达到等电点,值使之达到等电点,可除去蛋白质等酸件与两性物质可除去蛋白质等酸件与两性物质.三、凝聚与絮凝三、凝聚与絮凝目前工业上最常用的预处理方法之一目前工业上最常用的预处理方法之一采用采用凝聚和絮凝凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态,使其聚结成较大的颗粒,便于分子物质的分散状态,使其聚结成较大的颗粒,便于提高过滤提高过滤速率速率。此外,还能有效地除去杂蛋白质和固体杂质,提高滤液。此外,还能有效地除去杂蛋白质和固体杂质,提高滤液质量。质量。凝聚凝聚是指在电解质作用下,由于胶粒之间双电层电排斥作
9、是指在电解质作用下,由于胶粒之间双电层电排斥作用降低,电位下降,而使胶体体系不稳定的现象。用降低,电位下降,而使胶体体系不稳定的现象。絮凝絮凝则是指在某些高分子絮凝剂存在下,基于桥架作用使则是指在某些高分子絮凝剂存在下,基于桥架作用使胶粒形成较大絮凝团的过程。胶粒形成较大絮凝团的过程。混凝混凝是指絮凝和凝聚二者兼而有之。是指絮凝和凝聚二者兼而有之。凝聚作用凝聚作用就是向胶体悬浮液中加入某种电解质一就是向胶体悬浮液中加入某种电解质一在电解质中异电离子作用下胶粒的双电层电位降在电解质中异电离子作用下胶粒的双电层电位降低使胶体体系不稳定低使胶体体系不稳定.电解质的凝聚能力可用电解质的凝聚能力可用凝聚
10、值凝聚值来表示,使胶粒发来表示,使胶粒发生凝聚作用的最小电解质浓度(生凝聚作用的最小电解质浓度(mmol/L)称为)称为凝凝聚值聚值。反离子的价数越高,该值就越小,即凝聚能。反离子的价数越高,该值就越小,即凝聚能力越强。力越强。对带负电荷的发酵液胶体粒子凝聚能力强对带负电荷的发酵液胶体粒子凝聚能力强的阳离子次序为:的阳离子次序为:Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+常用的凝聚电解质有硫酸铝、氯化铝、三氯化铁、常用的凝聚电解质有硫酸铝、氯化铝、三氯化铁、硫酸亚铁、石灰等。硫酸亚铁、石灰等。絮凝剂的化学结构的要求:絮凝剂的化学结构的要求:1)必须含有相当多的)必须含有相当多的活性官
11、能团活性官能团,使之能和胶粒表面相结合;,使之能和胶粒表面相结合;2)必须具有)必须具有长链的线性结构长链的线性结构,以便同时与多个胶粒吸附形成较大,以便同时与多个胶粒吸附形成较大的絮团,但相对分子质量不能超过一定限度,以使其具有良好的的絮团,但相对分子质量不能超过一定限度,以使其具有良好的溶解性。溶解性。分类:分类:根据其来源的不同,可分为:根据其来源的不同,可分为:(1)有机高分产聚合物,如)有机高分产聚合物,如聚内烯酰胺类衍生物聚内烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍、聚苯乙烯类衍生物。生物。前者絮凝体粗大,分高效果好,絮凝速度快,用量少(一前者絮凝体粗大,分高效果好,絮凝速度快,用量少(一般以
12、般以mg/l计)适用范围广。它们的主要缺点是存在一定的毒性。计)适用范围广。它们的主要缺点是存在一定的毒性。(2)无机高分子聚合物,如聚合铝盐、聚合铁盐。)无机高分子聚合物,如聚合铝盐、聚合铁盐。(3)天天然然有有机机高高分分子子絮絮凝凝剂剂,如如聚聚糖糖类类胶胶粘粘物物、海海藻藻酸酸钠钠、明明胶胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。絮凝效果与絮凝效果与絮凝剂的加量、絮凝剂的加量、相对分子质量和类型、溶液的相对分子质量和类型、溶液的pH、搅拌转速和时间、搅拌转速和时间等因素有等因素有关。同时,在絮凝过程中,常需关。同时,在絮凝过程中,常需加入一定的助凝剂以增加絮凝效加
13、入一定的助凝剂以增加絮凝效果。溶液果。溶液pH值的变化常会影响值的变化常会影响离子型絮凝剂中官能团的电离度,离子型絮凝剂中官能团的电离度,从而影响吸附作用的强弱。从而影响吸附作用的强弱。一种淀粉酶发酵液的絮凝剂最一种淀粉酶发酵液的絮凝剂最适添加量为适添加量为70mg/L。絮凝剂的最适添加量往往需絮凝剂的最适添加量往往需通过试验确定,虽然较多的絮通过试验确定,虽然较多的絮凝剂有助于增加桥架的数量,凝剂有助于增加桥架的数量,但过多的添加量反而会引起吸但过多的添加量反而会引起吸附饱和,絮凝剂争夺胶粒而使附饱和,絮凝剂争夺胶粒而使絮凝固的粒径变小,絮凝效果絮凝固的粒径变小,絮凝效果下降。下降。4.发酵
14、液的相对纯化发酵液中,除去某些成分会改善后继工序的分离操作。如发酵液中,除去某些成分会改善后继工序的分离操作。如高价无机离子会影响离子交换,可溶性蛋白会影响吸附,沙粒高价无机离子会影响离子交换,可溶性蛋白会影响吸附,沙粒会破坏膜的活性层等等。会破坏膜的活性层等等。1).高价无机离子的去除高价无机离子的去除需去除的高价无机离子主要有:需去除的高价无机离子主要有:Ca2+、Mg2+、Fe2+等。等。Ca2+与草酸反应,生成草酸钙沉淀,同时,草酸钙可以促与草酸反应,生成草酸钙沉淀,同时,草酸钙可以促进蛋白质的凝固。草酸价格较高,应考虑回收。进蛋白质的凝固。草酸价格较高,应考虑回收。采用三聚磷酸络合镁
15、离子,可以消除采用三聚磷酸络合镁离子,可以消除Mg2+对离子交换树脂对离子交换树脂的影响。的影响。黄血盐与黄血盐与Fe2+反应可以生成普鲁士兰沉淀,从而去除反应可以生成普鲁士兰沉淀,从而去除Fe2+。2).杂蛋白的去除杂蛋白的去除(1)沉淀法)沉淀法蛋白质是两性物质。蛋白质是两性物质。在在酸性酸性条件下,能与一些阴离子生成沉淀,如三氯乙酸、水条件下,能与一些阴离子生成沉淀,如三氯乙酸、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等。杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等。在在碱性碱性条件下,能与一些金属离子形成沉淀,如条件下,能与一些金属离子形成沉淀,如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3
16、+和和Pb2+等。等。(2)变性法(对目的物的影响)变性法(对目的物的影响)蛋白质变性后,溶解度会降低。蛋白质变性后,溶解度会降低。蛋白质变性的方法有:加热法、调蛋白质变性的方法有:加热法、调pH值法、有机溶剂或表值法、有机溶剂或表面活性剂法面活性剂法(3)吸附法)吸附法加入某吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白。加入某吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白。第三节 菌体分离发酵液含有发酵液含有的菌体,通常以采用离心分离或过滤的菌体,通常以采用离心分离或过滤为主,根据发酵液的各种特性即粘度、比重、菌体为主,根据发酵液的各种特性即粘度、比重、菌体量、菌体的沉降性或凝聚性、菌的种类、和以后工量、菌体的沉降性或凝聚性、菌的种
17、类、和以后工序的关系等,而选用最适当的方法和设备。这方面序的关系等,而选用最适当的方法和设备。这方面的设备,正由分批式向连续式,由手动式向自动式的设备,正由分批式向连续式,由手动式向自动式的方向发展。的方向发展。对于对于霉菌霉菌和和酵母酵母的发酵液,一般只用旋转式连的发酵液,一般只用旋转式连续续过滤器过滤器、叶片式加压、叶片式加压过滤过滤器、压滤器等进行菌体器、压滤器等进行菌体分离。分离。菌体滤渣细密,属于难过滤物质,但由于霉菌菌体滤渣细密,属于难过滤物质,但由于霉菌和酵母的菌丝形成适宜的滤渣层,或者象酵母那样和酵母的菌丝形成适宜的滤渣层,或者象酵母那样的菌体有的菌体有3-6微米大小微米大小(
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- 生化 工程 下游 技术 第三 发酵 预处理 课件
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