血细胞分析仪检测原理与影响因素课件.ppt

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1、血细胞分析仪血细胞分析仪检测原理与影响因素检测原理与影响因素前言n传统的血常规分析法完全采用手工法。传统的血常规分析法完全采用手工法。n2020世纪世纪5050年代，库尔特（年代，库尔特（W.H.CoulterW.H.Coulter）先）先生根据电阻抗原理，又称库尔特原理，生产出生根据电阻抗原理，又称库尔特原理，生产出第一台血细胞计数仪，开创了血细胞分析仪的第一台血细胞计数仪，开创了血细胞分析仪的新纪元，使人工计数实现自动化。新纪元，使人工计数实现自动化。n随着科学技术的发展，血细胞分析仪也日新月随着科学技术的发展，血细胞分析仪也日新月异，目前己普及至县或卫生院。异，目前己普及至县或卫生院。前

2、言n美国美国COULTERCOULTER公司的公司的STKSSTKS、MAXMMAXM系列血细胞分析仪系列血细胞分析仪 -电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法 nBayerBayer公司的公司的Advia120Advia120型和新近推出的型和新近推出的Advia Advia 21202120型血细胞分析仪型血细胞分析仪-激光和细胞化学法激光和细胞化学法 n日本东亚公司的日本东亚公司的NE1500NE1500、SYSMEXSYSMEX公司的公司的SE9000SE9000血血细胞分析仪细胞分析仪-电阻抗和射频电导联合检测法电阻抗和射频电导联合检测法 nABBO

3、TTABBOTT公司的公司的CD3000CD3000，CD3500CD3500血细胞分析仪血细胞分析仪-多多角度激光偏振光散射检测法角度激光偏振光散射检测法 n 常用的血细胞分析仪：常用的血细胞分析仪：血细胞分析仪的主要功能n血细胞计数功能血细胞计数功能 测量WBC、RBC、PLT、MCV、RET等n白细胞分类功能白细胞分类功能 测量NE%、LYM%、MO%、EO%、BA%等n血红蛋白检测功能血红蛋白检测功能 测量HGB血细胞计数的检测原理n电阻抗法n流式细胞术与光散射法检测原理电阻抗法检测原理n血细胞具有血细胞具有相对非导电相对非导电的性质的性质n 悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔

4、悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔 时可引起时可引起电阻电阻及及电压电压的变化，出现的变化，出现脉冲信号脉冲信号n 脉冲的数量脉冲的数量=细胞的数量细胞的数量n 脉冲的大小脉冲的大小=细胞的大小细胞的大小n 该原理又称该原理又称库尔特原理库尔特原理（Coulter Coulter principleprinciple）n 测量测量 RBC,WBC,PLT,MCV,MPVRBC,WBC,PLT,MCV,MPV电阻抗法检测原理电阻抗法影响因素n白细胞白细胞:n 由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转 移癌、自身免疫性疾病

5、、感染及某些原因不明疾病血中含有移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷冷 球蛋白球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病 病人血中存在有病人血中存在有冷纤维蛋白冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，等，均可导致血液中某些物质凝集，致使致使白细胞计数增高白细胞计数增高。此时将稀释标本放在。此时将稀释标本放在3737度水浴度水浴10min10min后后 立即计数可消除此影响立即计数可消除此影响.n 有核红细胞出现使有核红细胞出现使白细胞计数假性增高白细胞计数假性增高；n 低色素性贫血或红细胞内含大量低色素性贫血或红细

6、胞内含大量sHbsHb或或HbCOHbCO，或某些新生儿及某，或某些新生儿及某 些肝病病人些肝病病人红细胞膜脂类异常红细胞膜脂类异常,从而产生抗溶血剂作用，红细胞从而产生抗溶血剂作用，红细胞 溶解不完全；溶解不完全；n 多发性骨髓瘤的多发性骨髓瘤的M M蛋白增多时，蛋白增多时，PHPH低的情况下，低的情况下，M M蛋白可与溶血剂蛋白可与溶血剂 发生反应而使结果偏高；发生反应而使结果偏高；n 各种病理引起的血栓前状态使血小板易于聚集，上机时影响结果各种病理引起的血栓前状态使血小板易于聚集，上机时影响结果电阻抗法影响因素n 红细胞红细胞:n 血小板血小板:红细胞碎片和脂血中与血小板大小相似的乳糜红

7、细胞碎片和脂血中与血小板大小相似的乳糜 微粒等作为血小板计数，导致血小板计数偏高。微粒等作为血小板计数，导致血小板计数偏高。n RBCRBC:在某种病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又在某种病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又 伴严重贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差。伴严重贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差。n MCHMCH:不能探测单个红细胞的结构（不能探测单个红细胞的结构（MCH=MCH=总总HGB/RBCHGB/RBC）n MCVMCV及及MCHCMCHC:红细胞通过小孔时经受一定的形态学变化，红红细胞通过小孔时经受一定的形态学变化，红细细 胞形态与细胞质黏度有关，

8、细胞质黏度受细胞胞形态与细胞质黏度有关，细胞质黏度受细胞HGBHGB含量影响，含量影响，因此因此HGBHGB浓度可影响细胞形态，进而影响浓度可影响细胞形态，进而影响MCVMCV及及MCHCMCHC的准确性的准确性 （MCHC=HGB/HCT)MCHC=HGB/HCT)流式细胞术与光散射法检测原理n 白细胞计数白细胞计数n 红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数n 网织红细胞计数网织红细胞计数n 有核红细胞计数有核红细胞计数流式细胞术与光散射法检测原理n白细胞计数白细胞计数n利用流式细胞术利用流式细胞术,单个细胞单个细胞随着流体动力聚集的随着流体动力聚集的鞘流液通过激光照射的检测区时鞘流液通过激光

9、照射的检测区时,使光束发生使光束发生折折射射、衍射衍射和和散射散射n散射光由光检测器接受后产生散射光由光检测器接受后产生脉冲脉冲n脉冲的大小脉冲的大小与被照与被照细胞的大小细胞的大小成成正比正比n脉冲的数量脉冲的数量代表代表细胞的数量细胞的数量流式细胞术与光散射法检测原理n红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数n在红细胞在红细胞/血小板通道中，血小板通道中，RBC/PLTRBC/PLT试剂与血液混合反应，试剂与血液混合反应，将自然状态下的红细胞将自然状态下的红细胞/血小板变成球形并经戊二醛固定后血小板变成球形并经戊二醛固定后使单个细胞使单个细胞逐个逐个经过检测器经过检测器n低角度前向激光（低角度

10、前向激光（2 23 3）测量单个细胞）测量单个细胞体积体积与与总数总数 n高角度激光（高角度激光（5 51515）测量单个细胞的）测量单个细胞的折射指数折射指数(RI(RI)n根据单个细胞根据单个细胞体积体积和其相应细胞的和其相应细胞的折射指数折射指数，可将，可将红细胞红细胞和和血小板血小板区分开来，并准确得出相应的参数。区分开来，并准确得出相应的参数。n细胞的折射指数细胞的折射指数(RI):(RI):反映细胞内容物的浓度反映细胞内容物的浓度。流式细胞术与光散射法检测原理n红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数 红细胞体积和血红蛋白浓度散射图红细胞体积和血红蛋白浓度散射图n1 1 低角度光散射（

11、低角度光散射（2 2-3-3）n2 2 高角度光散射（高角度光散射（5 5-15-15）n3 3 含有红细胞的含有红细胞的MieMie图图 n4 4 红细胞方法中检测的血小板红细胞方法中检测的血小板流式细胞术与光散射法检测原理n网织红细胞计数网织红细胞计数n网织红细胞分析采用某些网织红细胞分析采用某些染染料（如核酸染料料（如核酸染料Oxazine Oxazine 750750）染色的原理，并将细胞球形化，用激光二维法对）染色的原理，并将细胞球形化，用激光二维法对网织红细胞进行分析测定。网织红细胞进行分析测定。n前向角光散射强度前向角光散射强度=细胞大小细胞大小n荧光强度荧光强度=胞内胞内RNA

12、RNA浓度浓度n根据荧光强度，可将网织红细胞分成根据荧光强度，可将网织红细胞分成低吸收荧光强度网低吸收荧光强度网织红细胞织红细胞（LFR)、中吸收荧光强度网织红细胞中吸收荧光强度网织红细胞(MFR)和和高吸收荧光强度网织红细胞高吸收荧光强度网织红细胞(HFR)三部分。三部分。n幼稚网织红细胞显示最强的荧光幼稚网织红细胞显示最强的荧光流式细胞术与光散射法检测原理n仪器还可提供仪器还可提供网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数（reticulocyte mature indexreticulocyte mature index，RMIRMI）。）。nRMI=RMI=n网织红细胞计数网织红细胞计数n

13、RMI RMI增高增高与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效 反应有关；反应有关；n RMIRMI降低降低通常提示骨髓衰竭或无效造血。通常提示骨髓衰竭或无效造血。HFR+MFR HFR+MFR LFR LFR流式细胞术与光散射法影响因素n 病人样品中的病人样品中的有核红细胞有核红细胞 (尤其是新生儿样品尤其是新生儿样品)能够使白细能够使白细 胞计数假性升高。胞计数假性升高。n 样品的样品的冷凝集现象冷凝集现象可能引起可能引起红细胞计数假性降低红细胞计数假性降低 n 出现在出现在镰形红细胞贫血镰形红细胞贫血中的一些不可逆的中的一些不可逆的镰形细胞镰形细胞在本系在

14、本系 统中可能不完全呈圆球形，从而导致统中可能不完全呈圆球形，从而导致RDW RDW 升高，因而也低升高，因而也低 估了估了MCVMCV值。镰形细胞可能引起其它红细胞参数的错误。值。镰形细胞可能引起其它红细胞参数的错误。流式细胞术与光散射法影响因素n接受全肠道外营养的接受全肠道外营养的(TPN)(TPN)病人样品，其中包括病人样品，其中包括高脂高脂剂剂，可能出现，可能出现血小板计数假性升高血小板计数假性升高。这些样品能够包。这些样品能够包含含脂滴脂滴，并且这些脂滴会出现在血小板计数区域。，并且这些脂滴会出现在血小板计数区域。n血小板大量聚集时，有时造成血小板假性降低，且无血小板大量聚集时，有时

15、造成血小板假性降低，且无报警提示报警提示白细胞分类的功能n白细胞二分群、三分群计数原理白细胞二分群、三分群计数原理n白细胞五分类计数原理白细胞五分类计数原理n 容量、电导、光散射法容量、电导、光散射法n激光与细胞化学法激光与细胞化学法n电阻抗与射频法电阻抗与射频法n多角度偏振光散射检测原理多角度偏振光散射检测原理白细胞二分群、三分群计数原理白细胞二分群、三分群计数原理n根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，根据脉冲的大时产生的脉冲大小有明显的差异，根据脉冲的大小，血细胞仪对白细胞进行分群。小，血细胞仪对白细胞进行分群。

16、n 经溶血素处理后，红细胞迅速溶解，白细胞胞质经溶血素处理后，红细胞迅速溶解，白细胞胞质 经细胞膜渗出，胞膜紧裹在经细胞膜渗出，胞膜紧裹在细胞核细胞核或或颗粒颗粒周围脱周围脱 水的细胞体积与其自然体积无关，取决于水的细胞体积与其自然体积无关，取决于脱水后脱水后 细胞内有形物质的多少细胞内有形物质的多少。n 仪器将体积为仪器将体积为3535450fL450fL的血细胞分为的血细胞分为256256个通道，个通道，每个通道为每个通道为1.64fL1.64fL，根据，根据细胞大小细胞大小初步确认初步确认细胞群细胞群，并显示出白细胞体积直方图并显示出白细胞体积直方图白细胞二分群、三分群计数原理白细胞二分

17、群、三分群计数原理n根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，根据脉冲的大时产生的脉冲大小有明显的差异，根据脉冲的大小，血细胞仪对白细胞进行分群。小，血细胞仪对白细胞进行分群。淋巴细胞淋巴细胞中性粒细胞中性粒细胞单核细胞，嗜酸粒细胞单核细胞，嗜酸粒细胞嗜碱粒细胞，白血病细胞嗜碱粒细胞，白血病细胞核左移的各阶段幼稚细胞核左移的各阶段幼稚细胞白细胞二分群、三分群计数影响因素白细胞二分群、三分群计数影响因素n电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。在一个群体中，可能

18、发某种细胞为主（如小细胞区主要是在一个群体中，可能发某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细胞的存在。胞的存在。任何一类任何一类白白细胞的增多，均可使直方图产生相细胞的增多，均可使直方图产生相似变化，似变化，直方图只是提示检查者粗略判断细胞比例变化或直方图只是提示检查者粗略判断细胞比例变化或有无明显的异常细胞出现有无明显的异常细胞出现，进而在显微镜下检查中注意这，进而在显微镜下检查中注意这些变化些变化，实际分类以手工分类为准。，实际分类以手工分类为准。n 外周血出现外周血出现有核红细胞有核红细胞或或巨大血

19、小板巨大血小板，采血时由于技术问，采血时由于技术问 题造成题造成血小板聚集血小板聚集或或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有 抵抗作用抵抗作用，使红细胞溶血不完全，致待测标本中有大量红，使红细胞溶血不完全，致待测标本中有大量红 细胞膜碎片等情况，均可使白细胞直方图在细胞膜碎片等情况，均可使白细胞直方图在50fl50fl以下区域以下区域 出现一个或大或小的小峰。使小细胞区计数出现一个或大或小的小峰。使小细胞区计数假性升高假性升高容量、电导、光散射法检测原理容量、电导、光散射法检测原理n在测试的标本内加溶血剂，使在测试的标本内加溶血剂，使红细胞溶解红细胞溶解n加入抗溶血

20、稳定剂，中和溶血剂的作用，使加入抗溶血稳定剂，中和溶血剂的作用，使白细白细胞表面、胞质及细胞大小胞表面、胞质及细胞大小等特征仍保持与体内时等特征仍保持与体内时相同相同的状态的状态n使用使用鞘流技术鞘流技术，使溶血后液体内白细胞分别，使溶血后液体内白细胞分别单个单个通通过激光检测区接受检测过激光检测区接受检测nVSCVSC技术是技术是全血未经任何处理全血未经任何处理，血细胞保持与体内，血细胞保持与体内形态形态完全相同完全相同状态下得出的检测结果状态下得出的检测结果容量、电导、光散射法检测原理n电阻抗原理：检测电阻抗原理：检测细胞体积细胞体积n电导技术：根据细胞壁能产生高频电流的性能，用高电导技术

21、：根据细胞壁能产生高频电流的性能，用高频电磁探针测量频电磁探针测量细胞内部结构细胞内部结构，通过，通过细胞核和细胞细胞核和细胞质的比例质的比例、细胞内颗粒的大小和密度细胞内颗粒的大小和密度，辨别，辨别体积相体积相同同、但、但性质不同性质不同的两个细胞群体的两个细胞群体,如如LYLY和和BABA n光散射技术：来自激光源的单色光直接扫描计数敏感光散射技术：来自激光源的单色光直接扫描计数敏感区的细胞，根据细胞产生的不同角度散射光（区的细胞，根据细胞产生的不同角度散射光（10107070），提供），提供细胞形态细胞形态、胞核结构胞核结构等光散射信息，等光散射信息，并鉴别细胞颗粒的构型核质量并鉴别细胞

22、颗粒的构型核质量（粗颗粒的光散射比（粗颗粒的光散射比细颗粒的更强）细颗粒的更强），可区别出粒细胞（，可区别出粒细胞（NENE、BABA、EO)EO)的的类型类型容量、电导、光散射法检测原理n根据根据VSCVSC原理，可显示原理，可显示 三种细胞散点图三种细胞散点图nDF1DF1：体积值和散射光值：体积值和散射光值nDF2DF2：体积值和电导值：体积值和电导值nDF3DF3：体积值和电导值，：体积值和电导值，但除去了但除去了EOEO和和NENE部分，部分，只显示只显示嗜碱粒细胞群嗜碱粒细胞群容量、电导、光散射法影响因素n幼稚细胞等白血病细胞使分类异常幼稚细胞等白血病细胞使分类异常n未成熟粒细胞与

23、核左移细胞常引未成熟粒细胞与核左移细胞常引起起MO%MO%假性假性升高升高激光与细胞化学法检测原理激光与细胞化学法检测原理n血样和过氧化物酶试血样和过氧化物酶试剂混合后，溶解剂混合后，溶解RBCRBC试剂试剂 1试剂试剂 2,3细细 胞胞EONeutMonoBasoRBCLymphAB.C被固定的胞内PEROX酶酶反应沉积部位A：外周血各种血细胞B：RBC被溶解，WBC胞浆渗出，PEROX酶被固定。C：底物显色并沉积在酶反应部位。过氧化物酶通道反应示意图n过氧化物酶通道过氧化物酶通道n白细胞与过氧化物酶白细胞与过氧化物酶试剂反应试剂反应,染色深浅染色深浅 与与细胞过氧化物酶活细胞过氧化物酶活性

24、性成成正比正比n过氧化酶活性：过氧化酶活性：EONEMOEONEMO LYM LYM与与BABA无活性无活性激光与细胞化学法检测原理n根据胞浆中根据胞浆中过氧化物酶染色深浅过氧化物酶染色深浅和激光法测量的和激光法测量的细胞细胞大小大小不同，将白细胞分成嗜酸性粒细胞、单核细胞、不同，将白细胞分成嗜酸性粒细胞、单核细胞、中性粒细胞、大而未染色细胞、淋巴和嗜碱细胞中性粒细胞、大而未染色细胞、淋巴和嗜碱细胞n淋巴淋巴和和嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞由于大小相似而不能分开。由于大小相似而不能分开。过氧化物酶通道白细胞分类原理反应示意图1 红细胞碎片2 有核红细胞3 聚集的血小板4 淋巴与嗜碱性细胞5 大的不

25、染色细胞6 单核细胞7 中性粒细胞8 嗜酸性粒细胞激光与细胞化学法检测原理n嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/分叶核通道分叶核通道嗜碱性粒细胞/分叶核通道反应示意图n 血样和嗜碱反应试剂混合后，血样和嗜碱反应试剂混合后，由由 于试剂中苯二甲酸和表面活性剂于试剂中苯二甲酸和表面活性剂 的作用，红细胞和血小板溶解，的作用，红细胞和血小板溶解，除除嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞外，其他白细胞外，其他白细胞 膜破裂而失去胞浆膜破裂而失去胞浆n根据细胞核的形状和复杂性，将根据细胞核的形状和复杂性，将白细胞分成白细胞分成单个核单个核和和多形核细胞多形核细胞，并可对中性粒细胞分叶程度进行并可对中性粒细胞分叶程度进行分析。

26、分析。n嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞保持完整，体积较保持完整，体积较大，很容易从小细胞群中识别开大，很容易从小细胞群中识别开来。来。激光与细胞化学法检测原理n当嗜碱性粒细胞与其它被溶解了细胞膜的细胞核流入激光二维当嗜碱性粒细胞与其它被溶解了细胞膜的细胞核流入激光二维检测系统，检测系统，根据前向角和散射角检测的结果，根据前向角和散射角检测的结果，产生了二维细胞产生了二维细胞图，进而将白细胞进一步进行分类。结合根据过氧化物酶通道图，进而将白细胞进一步进行分类。结合根据过氧化物酶通道的结果，将白细胞进行完整的分类。的结果，将白细胞进行完整的分类。1 噪音 2 母细核 3 单个核白细胞（单核细胞和淋巴细胞

27、）4 嗜碱性粒细胞 5 可疑嗜碱性粒细胞 6 饱和度 7 多核白细胞（嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞）嗜碱粒细胞/分叶核通道白细胞分类原理图激光与细胞化学法影响因素n病理情况下，嗜酸粒细胞分类受标本白细胞病理情况下，嗜酸粒细胞分类受标本白细胞形态异常影响假性升高形态异常影响假性升高n幼稚细胞等白血病细胞使分类异常幼稚细胞等白血病细胞使分类异常电阻抗与射频法检测原理n嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统：血液进入仪器后，经分血器：血液进入仪器后，经分血器使血液与使血液与嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂混合，由于混合，由于其其特殊的特殊的PHPH，使除嗜酸性粒细胞以外的所有

28、细胞溶解，使除嗜酸性粒细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有或萎缩，含有完整的嗜酸性粒细胞完整的嗜酸性粒细胞的液体通过小孔时，的液体通过小孔时，使计数电路产生脉冲而被计数。使计数电路产生脉冲而被计数。n 嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统：计数原理与嗜酸性粒细胞相：计数原理与嗜酸性粒细胞相 同，由于碱性溶血剂只能保留与血液中嗜碱性的粒细同，由于碱性溶血剂只能保留与血液中嗜碱性的粒细 胞，因此根据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数。胞，因此根据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数。n 上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外，还需上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外，还需特定特定 的作用温度和时间的作用

29、温度和时间。电阻抗与射频法检测原理n淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）的检测系统：的检测系统：n 这个系统采用这个系统采用电阻抗电阻抗与与射频射频联合检测的方式联合检测的方式n 本法使用的溶血剂的作用较轻，细胞形态改变不大。本法使用的溶血剂的作用较轻，细胞形态改变不大。n 在小孔的内外电极上存有直流（在小孔的内外电极上存有直流（DCDC）和高频（）和高频（RFRF）两个）两个 放射器，因此细胞进入小孔时产生放射器，因此细胞进入小孔时产生两个两个不同的脉冲信号不同的脉冲信号n 脉冲的高低分别代表细胞的大小和核内颗粒的密度，脉冲的高低分别代表细胞的

30、大小和核内颗粒的密度，n 以以DCDC信号为横坐标，信号为横坐标，RFRF为纵坐标，就可根据为纵坐标，就可根据2 2个信号把个信号把 同一个细胞定位于同一个细胞定位于二维的细胞散射图二维的细胞散射图上。上。n 由于由于LYMLYM、MOMO及粒细胞及粒细胞的的细胞大小细胞大小、细胞质含量，胞质内细胞质含量，胞质内 颗粒的大小与密度、细胞核的形态与密度颗粒的大小与密度、细胞核的形态与密度不同，不同，DCDC及及RFRF 的脉冲信号有较大的差异，定位在各自散射的区域，通的脉冲信号有较大的差异，定位在各自散射的区域，通 过扫描技术得出各类细胞比例过扫描技术得出各类细胞比例电阻抗与射频法检测原理n幼稚

31、细胞检测系统：幼稚细胞检测系统：n此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象，在细胞悬液加入硫化此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象，在细胞悬液加入硫化氨基酸后，由于氨基酸后，由于细胞上脂质占位不同细胞上脂质占位不同，故结合在幼稚细胞，故结合在幼稚细胞的硫化氨基酸较成熟的细胞多，的硫化氨基酸较成熟的细胞多，且对溶血剂有抵抗作用且对溶血剂有抵抗作用。n当加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，如果悬液中存在幼稚当加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，如果悬液中存在幼稚细胞，其形态不受破坏，因此可通过电阻抗的方法检测出细胞，其形态不受破坏，因此可通过电阻抗的方法检测出来。来。多角度偏振光散射检测原理n一定体积的全血标本用鞘液按适当比

32、例稀释。一定体积的全血标本用鞘液按适当比例稀释。n 其白细胞内部结构近似于自然状态，因其白细胞内部结构近似于自然状态，因嗜碱性粒细胞颗粒嗜碱性粒细胞颗粒 具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。n 红细胞内部的渗透透压高于鞘液的渗透压而发生改变，红细胞内部的渗透透压高于鞘液的渗透压而发生改变，红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来，而鞘液内的水份红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来，而鞘液内的水份 进入红细胞中，细胞膜的结构仍然完整，但进入红细胞中，细胞膜的结构仍然完整，但此时的红细胞此时的红细胞 折光指数与鞘液的相同，故红细胞不干扰白细胞

33、检测。折光指数与鞘液的相同，故红细胞不干扰白细胞检测。n 在鞘液的作用下，样本被集中为一个直径为在鞘液的作用下，样本被集中为一个直径为30m30m的小股的小股 液流，该液流将稀释细胞液流，该液流将稀释细胞单个排列单个排列，因是单个通过激光束，因是单个通过激光束，故故在各个方向都有其散射光在各个方向都有其散射光。多角度偏振光散射检测原理n可以从四个角度测定散射光的密度：可以从四个角度测定散射光的密度：n 0 0：前角光散射（：前角光散射（1 13 3）粗略地测定）粗略地测定细胞大小细胞大小；n 10 10：狭角光散射（：狭角光散射（7 71111）测）测细胞结构及其复杂性细胞结构及其复杂性 的相

34、对特征的相对特征；n 90 90：9090消偏振光散射（消偏振光散射（7070110110），基于颗粒可以），基于颗粒可以 将垂直角度的偏振激光消偏振的特性，将将垂直角度的偏振激光消偏振的特性，将嗜酸细胞嗜酸细胞从中性从中性 粒细胞和其它细胞中分离出来。粒细胞和其它细胞中分离出来。n 90 90：垂直光散射（：垂直光散射（7070110110）主要）主要对细胞内部颗粒和对细胞内部颗粒和 细胞成分进行测量细胞成分进行测量。n 可以从这四个角度同时对单个白细胞进行测量，将白细胞可以从这四个角度同时对单个白细胞进行测量，将白细胞 分为分为EOEO、NENE、BABA、LYMLYM和和MONO5MON

35、O5种。种。血红蛋白检测原理血红蛋白检测原理稀释血液稀释血液+溶血剂溶血剂溶血剂中溶血剂中某些成分某些成分+血红蛋白衍生物血红蛋白衍生物形成形成比色（比色（：530530550nm)550nm)RBCRBC溶解释溶解释放放HGBHGBn 吸光度变化与稀释液吸光度变化与稀释液HGB含量成正比含量成正比nICSH推荐使用氰化高铁法推荐使用氰化高铁法nHICN最大吸收峰在最大吸收峰在540nmn各型号血细胞分析仪必须各型号血细胞分析仪必须以以HICN值为标准进行校正值为标准进行校正n非氰化溶血剂非氰化溶血剂:SLS,十二烷基月桂酰硫酸钠十二烷基月桂酰硫酸钠HGBHGB测试系统测试系统血红蛋白检测影响

36、因素血红蛋白检测影响因素n高白细胞计数高白细胞计数的样品的样品(60 x 10(60 x 109 9细胞细胞/L)/L)、或、或有有血小板凝块血小板凝块、或、或新生儿样品新生儿样品可能干扰血红蛋可能干扰血红蛋白的检测。白的检测。n过度脂血过度脂血、乳糜微粒，高胆红素乳糜微粒，高胆红素或或血红蛋白过血红蛋白过高高的样品可能干扰样品的检测结果、使采所得的样品可能干扰样品的检测结果、使采所得的结果升高，而的结果升高，而MCHCMCHC也升高。也升高。小结小结血细胞仪的比较血细胞仪的比较n五分类的血细胞仪从技术上较前上了一个更高的五分类的血细胞仪从技术上较前上了一个更高的平台，特别是平台，特别是血小板

37、计数更加可靠血小板计数更加可靠，五分类比三，五分类比三分群又增加一些新的参数，五分类必将取代三分分群又增加一些新的参数，五分类必将取代三分群的仪器，这是必然趋势。群的仪器，这是必然趋势。n三分类其实是将细胞按照体积大小进行了三分类其实是将细胞按照体积大小进行了简单的简单的分群处理分群处理，实际上是，实际上是不科学不科学的，因此国内专家和的，因此国内专家和学者建议将此分类统一称呼为分群（学者建议将此分类统一称呼为分群（groupgroup），即），即三分群型血细胞分析仪。实际细胞分类需做细胞三分群型血细胞分析仪。实际细胞分类需做细胞染色镜检。染色镜检。小结小结血细胞仪的比较血细胞仪的比较n目前目

38、前BAYERBAYERADVIAADVIA120120是是唯一唯一可对可对红细胞的体红细胞的体积和色素含量积和色素含量进行分析的仪器。进行分析的仪器。nBAYERBAYERADVIAADVIA120120同时直接检测同时直接检测单个红细胞的单个红细胞的HGBHGB，可以同氰化高铁法通道检测的血红蛋白浓度，可以同氰化高铁法通道检测的血红蛋白浓度相比较，减少因高白细胞数或脂血等因素造成的相比较，减少因高白细胞数或脂血等因素造成的影响影响n在白细胞分类方面，在白细胞分类方面，激光与细胞化学法激光与细胞化学法与与容量、容量、电导、光散射法电导、光散射法相比，有较强的筛选能力，但在相比，有较强的筛选能力

39、，但在EO%分类分类方面，方面，BAYERBAYERADVIAADVIA120120逊色于逊色于Coulter 小结小结-血细胞分析仪的发展近况和展望血细胞分析仪的发展近况和展望 n血常规检验多参数化血常规检验多参数化：近年来许多仪器都在增加新的：近年来许多仪器都在增加新的参数以满足临床在诊断和鉴别诊断方面的需求，但很参数以满足临床在诊断和鉴别诊断方面的需求，但很多的新参数目前仍不能应用于临床，仅限定在实验室多的新参数目前仍不能应用于临床，仅限定在实验室中，或供研究使用。中，或供研究使用。n多功能合成扩展多功能合成扩展：如增加网织红细胞，幼稚细胞，有：如增加网织红细胞，幼稚细胞，有核红细胞，脑

40、脊液细胞等的分析功能核红细胞，脑脊液细胞等的分析功能n检测速度的提高检测速度的提高：BAYERBAYERADVIAADVIA21202120等仪器可以等仪器可以达到每小时达到每小时120120个标本个标本 n方法的改进和进展方法的改进和进展：多方法联合使用检测：多方法联合使用检测n应用的方便性应用的方便性n产品的系列化产品的系列化n流水线化流水线化 小结小结-使用血细胞仪的注意事项使用血细胞仪的注意事项n首先做好操作人员上岗前的培训，提高专业技术人员首先做好操作人员上岗前的培训，提高专业技术人员的素质。的素质。要了解异常报警的含义，掌握处理办法；熟要了解异常报警的含义，掌握处理办法；熟悉使用过

41、程中的注意事项以及小故障的排除等。悉使用过程中的注意事项以及小故障的排除等。n仪器的安装条件仪器的安装条件n仪器的验收仪器的验收n仪器的校准仪器的校准n标本的采集和运送：标本、容器、抗凝剂、血液储存标本的采集和运送：标本、容器、抗凝剂、血液储存n校准物和质控物校准物和质控物n仪器参考值的设置仪器参考值的设置n分析前的质量控制分析前的质量控制小结小结-使用血细胞仪的注意事项使用血细胞仪的注意事项n保留标本备查保留标本备查n重视室内质控重视室内质控n加强质控小组的责任加强质控小组的责任n分析实验结果各参数间关系分析实验结果各参数间关系n加强与临床的联系加强与临床的联系n积极参加室间质量控制积极参加

42、室间质量控制n分析后的质量控制分析后的质量控制小结小结-使用血细胞仪的注意事项使用血细胞仪的注意事项n迄今为止，世界上无论多先进的血细胞分析仪，进行的迄今为止，世界上无论多先进的血细胞分析仪，进行的白细胞分类都只是一种白细胞分类都只是一种过筛手段过筛手段，并，并不能完全取代人工不能完全取代人工镜检分类。镜检分类。n仪器一些固有的产生误差的因素还没有彻底解决，某些仪器一些固有的产生误差的因素还没有彻底解决，某些影响仪器计数准确性的个别因素还存在，或某些仪器具影响仪器计数准确性的个别因素还存在，或某些仪器具有设计上的缺陷和应用上的局限性，因此无论是细胞计有设计上的缺陷和应用上的局限性，因此无论是细胞计数还是多种参数的分析结果仍然会有问题发生。数还是多种参数的分析结果仍然会有问题发生。n不要总是相信仪器，要认真对待每个实验样品和结果，不要总是相信仪器，要认真对待每个实验样品和结果，分析判断这个结果，检验工作者要对分析判断这个结果，检验工作者要对仪器的性能仪器的性能，质量质量控制控制，局限性局限性，常出现的故障常出现的故障，特别对，特别对三分群的直方图三分群的直方图和和五分类的散点图五分类的散点图有深刻的了解，善于发现问题和解决有深刻的了解，善于发现问题和解决问题。问题。