答辩PPT(铁皮石斛多糖).ppt

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1、组培铁皮石斛多糖的提取及其抗氧化性研究(1)姓名：董燕平学号：20090453012专业：食品科学与工程学校：西南林业大学1目录n n组培铁皮石斛多糖简介及国内外研究现状组培铁皮石斛多糖简介及国内外研究现状n n试验目的和意义n n试验方法和内容n n试验结果n n试验结论n n结果讨论n n致谢2 1.组培铁皮石斛多糖简介及国内外研究现状1.11.1组培铁皮石斛多糖简介组培铁皮石斛多糖简介铁皮石斛（铁皮石斛（D.candidumD.candidumWall.exLindl.Wall.exLindl.）是兰科石斛属）是兰科石斛属多年生附生草本植物，生于海拔达多年生附生草本植物，生于海拔达160

2、01600米的山地半阴湿的米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，种子极小、岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，种子极小、无胚乳，在自然条件下，需与某些真菌共生才能萌发无胚乳，在自然条件下，需与某些真菌共生才能萌发,故故很难生产足够的实生苗用于栽培很难生产足够的实生苗用于栽培;而传统的分株、扦插等而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生境，其方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生境，其资源已濒临灭绝，是被国家列为重点保护的药用植物之一。资源已濒临灭绝，是被国家列为重点保护的药用植物之一。铁皮石斛多糖系从铁皮石斛植株里提取出的多糖类物铁皮石斛多糖

3、系从铁皮石斛植株里提取出的多糖类物质，经研究发现，多糖是石斛属植物的主要活性成分，在质，经研究发现，多糖是石斛属植物的主要活性成分，在抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等方面有很好的作用，在治疗抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等方面有很好的作用，在治疗胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效。咽炎等疾病有很好的疗效。3 1.21.2铁皮石斛国内外研究现状铁皮石斛国内外研究现状随着我国经济的快速发展，人们生活水平的不断提高，随着我国经济的快速发展，人们生活水平的不断提高，人们对健康和精神生活的需求和品位也日益提高，越来越人们对健康和

4、精神生活的需求和品位也日益提高，越来越多的人们认识到要用本身健康的东西来健康自己，铁皮石多的人们认识到要用本身健康的东西来健康自己，铁皮石斛是一味功效显著的珍稀药材，具有增强免疫力、消除肿斛是一味功效显著的珍稀药材，具有增强免疫力、消除肿瘤、抑制癌症、润肺清咽等药用价值和保健作用，在国际瘤、抑制癌症、润肺清咽等药用价值和保健作用，在国际国内应用十分广泛。铁皮石斛成品目前主要加工成以下三国内应用十分广泛。铁皮石斛成品目前主要加工成以下三种：（种：（1 1）铁皮枫斗。通过改进传统的做法，使之从外观、）铁皮枫斗。通过改进传统的做法，使之从外观、质量等更符合现代消费者的习惯。质量等更符合现代消费者的习

5、惯。（2 2）研磨成粉末，做成胶囊，以盒装保健食品的方式）研磨成粉末，做成胶囊，以盒装保健食品的方式销售。这个过程并不涉及到药品加工，而申请食品保健还销售。这个过程并不涉及到药品加工，而申请食品保健还是很容易的。中科院植物所都有这样的技术，且很成熟，是很容易的。中科院植物所都有这样的技术，且很成熟，只要买批号后委托加工就可以做出成品。这个保健品服用只要买批号后委托加工就可以做出成品。这个保健品服用后效果表现为：睡眠安稳绵长，无夜梦。白天精神饱满，后效果表现为：睡眠安稳绵长，无夜梦。白天精神饱满，无疲态。胃口变好，无便秘。情绪安定，不易急躁和动怒。无疲态。胃口变好，无便秘。情绪安定，不易急躁和动

6、怒。4（3 3）购买已有技术，做成中成药。小规模临床试验证）购买已有技术，做成中成药。小规模临床试验证明，在化疗及治疗心血管疾病方面，铁皮石斛中成药辅助明，在化疗及治疗心血管疾病方面，铁皮石斛中成药辅助疗效十分显著。以片剂口服方式，可部分替代扩张血管的疗效十分显著。以片剂口服方式，可部分替代扩张血管的西药烟酸注射液。西药烟酸注射液。随着功能开发和应用技术的不断发展，需求量在不随着功能开发和应用技术的不断发展，需求量在不断上升，目前是国内近百种药品和保健品的必需原料，全断上升，目前是国内近百种药品和保健品的必需原料，全国涉及用到石斛类的制药厂和保健品加工企业有国涉及用到石斛类的制药厂和保健品加工

7、企业有100100多家。多家。铁皮石斛主要的消费市场在我国的浙江和上海一带，另外铁皮石斛主要的消费市场在我国的浙江和上海一带，另外就是港澳和东南亚地区，北京、广州、成都等地近几年市就是港澳和东南亚地区，北京、广州、成都等地近几年市场发展较快，从我国石斛联盟发布的市场信息来看，铁皮场发展较快，从我国石斛联盟发布的市场信息来看，铁皮石斛的市场和销售都在快速发展。石斛的市场和销售都在快速发展。从相关信息来看，目前世界中草药市场销售额为从相关信息来看，目前世界中草药市场销售额为160160亿美元，而且每年正以亿美元，而且每年正以20302030的速度增长，而我国的中的速度增长，而我国的中草药产业占整个

8、医药市场的草药产业占整个医药市场的4040左右，近五年来以年平均左右，近五年来以年平均2020的高速度递增，铁皮石斛所占中草药产业比例越来越的高速度递增，铁皮石斛所占中草药产业比例越来越高。高。52.试验目的和意义2.12.1试验目的：试验目的：铁皮石斛多糖的提取分离工艺已较为成熟，但铁皮石斛多糖的提取分离工艺已较为成熟，但石斛的品种繁多，应开展对其他种的石斛多糖结石斛的品种繁多，应开展对其他种的石斛多糖结构的提取分离研究。构的提取分离研究。本文通过以组培铁皮石斛为材料，以组培铁本文通过以组培铁皮石斛为材料，以组培铁皮石斛提取出的多糖为主要研究对象，对照组培皮石斛提取出的多糖为主要研究对象，对

9、照组培铁皮石斛苗和维生素铁皮石斛苗和维生素C C进行总还原能力、清除羟基进行总还原能力、清除羟基自由基、清除超氧阴离子和清除自由基、清除超氧阴离子和清除DPPH(1DPPH(1，1-1-二苯二苯基基-2-2-苦基苯肼自由基苦基苯肼自由基)能力进行测定。能力进行测定。通过此试验通过此试验拟阐提取出的铁皮石斛多糖的抗氧化功能特性。拟阐提取出的铁皮石斛多糖的抗氧化功能特性。62.2试验意义：自由基（自由基（freeradicalfreeradical）是一类含有未配对电子）是一类含有未配对电子的基团、分子或原子，主要包括超氧阴离子、羟的基团、分子或原子，主要包括超氧阴离子、羟基自由基等，是人体内的代

10、谢产物，在正常情况基自由基等，是人体内的代谢产物，在正常情况下处于动态平衡，且浓度很低。当这一平衡被打下处于动态平衡，且浓度很低。当这一平衡被打破，就会对机体造成损害引发一系列疾病。破，就会对机体造成损害引发一系列疾病。本试验尝试性的以组培铁皮石斛为对象，研本试验尝试性的以组培铁皮石斛为对象，研究组培铁皮石斛多糖、维生素究组培铁皮石斛多糖、维生素C C和组培铁皮石斛苗和组培铁皮石斛苗清除自由基的能力，清除自由基的能力，为组培铁皮石斛多糖抗氧化为组培铁皮石斛多糖抗氧化性的研究提供基础数据以及组培铁皮石斛多糖的性的研究提供基础数据以及组培铁皮石斛多糖的综合开发利用奠定理论基础。综合开发利用奠定理论

11、基础。73.试验方法和内容3.1组培铁皮石斛多糖的提取3.1.13.1.1组培铁皮石斛多糖提取工艺流程组培铁皮石斛多糖提取工艺流程组培铁皮石斛组培铁皮石斛水回流提取水回流提取浓缩浓缩脱脂脱脂脱蛋白脱蛋白脱色脱色干燥干燥组培铁皮石斛多糖组培铁皮石斛多糖8破碎90，1h，料水比1:2060，0.75Kpa1h氯仿，正丁醇活性炭603.1.23.1.2操作要点操作要点(1)(1)破碎：组培石斛苗要充分的研磨破碎，有利于多破碎：组培石斛苗要充分的研磨破碎，有利于多糖的溶解分离。糖的溶解分离。(2)(2)提取：破碎的石斛组织于提取：破碎的石斛组织于9090、料水比、料水比1:201:20的条的条件下回流

12、提取件下回流提取1 1小时，重复三次，合并提取液。小时，重复三次，合并提取液。(3)(3)脱脂：浓缩液中加入脱脂：浓缩液中加入100mL100mL石油醚水浴回流至沸石油醚水浴回流至沸腾，抽真空过滤。腾，抽真空过滤。(4)(4)脱蛋白：以脱蛋白：以50mL50mL多糖浓缩液，多糖浓缩液，15mL15mL氯仿，氯仿，55mLmL正丁醇为标准比例混合振荡，不加热，离心机离心至正丁醇为标准比例混合振荡，不加热，离心机离心至离液面交界处无白色混悬物，也就是蛋白质介于提取液与离液面交界处无白色混悬物，也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可，并分别提取。试剂交界处即可，并分别提取。9(5)(5)干燥：脱色后

13、的多糖液于烘箱中用干燥：脱色后的多糖液于烘箱中用6060热风干燥热风干燥至恒重，保存备用。至恒重，保存备用。3.2组培铁皮石斛多糖含量的测定试验采用蒽酮硫酸法测定组培铁皮石斛多糖含量。试验采用蒽酮硫酸法测定组培铁皮石斛多糖含量。3.2.13.2.1葡萄糖标准曲线的绘制葡萄糖标准曲线的绘制精密称取经精密称取经105105干燥恒重的标准葡萄糖干燥恒重的标准葡萄糖0.05g0.05g（精确到（精确到0.0001g0.0001g），用温蒸馏水溶解，并定容至），用温蒸馏水溶解，并定容至1000mL1000mL。此溶液质量浓度。此溶液质量浓度为为50gmL50gmL-1-1。分别取上述葡萄糖溶液。分别取上

14、述葡萄糖溶液0mL0mL、0.4mL0.4mL、0.6mL0.6mL、0.80.8mLmL、1.0mL1.0mL、1.2mL1.2mL、1.4mL1.4mL、1.6mL1.6mL到到25mL25mL具塞试管中，用蒸馏具塞试管中，用蒸馏水补足到水补足到2mL2mL；在冰水浴中加入；在冰水浴中加入4mL4mL的的2g/mL2g/mL的蒽酮的蒽酮-硫酸溶液，摇硫酸溶液，摇匀，置于沸水中加热煮沸匀，置于沸水中加热煮沸5min5min，取出后用流动水冷却至室温，以零管，取出后用流动水冷却至室温，以零管为空白，于为空白，于625nm625nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，对应吸光处测定吸光度，以葡萄

15、糖浓度为横坐标，对应吸光值为纵坐标建立标准曲线，如下图所示。值为纵坐标建立标准曲线，如下图所示。103.2.23.2.2组培铁皮石斛多糖含量的测定组培铁皮石斛多糖含量的测定分别取组培铁皮石斛多糖储备液分别取组培铁皮石斛多糖储备液(50gmL(50gmL-1-1)和组培铁皮石斛苗和组培铁皮石斛苗储备液储备液(50gmL(50gmL-1-1)1.6mL)1.6mL到到25mL25mL具塞试管中，用蒸馏水补足到具塞试管中，用蒸馏水补足到2mL2mL；在冰水浴中加入在冰水浴中加入4mL4mL的的2g/mL2g/mL的蒽酮的蒽酮-硫酸溶液，摇匀，置于沸水中硫酸溶液，摇匀，置于沸水中加热煮沸加热煮沸5mi

16、n5min，取出后用流动水冷却至室温，以葡萄糖样品中零管为，取出后用流动水冷却至室温，以葡萄糖样品中零管为空白，于空白，于625nm625nm处测定吸光度。由标准曲线求得对应的多糖浓度，以处测定吸光度。由标准曲线求得对应的多糖浓度，以葡萄糖计。葡萄糖计。113.3FRAP3.3FRAP法测定组培铁皮石斛的总抗氧化能力法测定组培铁皮石斛的总抗氧化能力3.3.13.3.1硫酸亚铁标准曲线的绘制硫酸亚铁标准曲线的绘制取不同体积取不同体积5 5140L140L的的1mmol/LFeSO1mmol/LFeSO4 4 溶液，用蒸馏水补足至溶液，用蒸馏水补足至2mL2mL，再加入配制好的，再加入配制好的FR

17、APFRAP工作液工作液3mL3mL，混匀后于，混匀后于3737反应反应30min30min，在在593nm593nm下测定样品液的吸光度值，确定还原力标准曲线。下测定样品液的吸光度值，确定还原力标准曲线。以吸光度（以吸光度（Y Y）对葡萄糖质量浓度（）对葡萄糖质量浓度（X X）回归，得到回归方程）回归，得到回归方程y=y=0.0516x-0.00410.0516x-0.0041，所得葡萄糖标准曲线如下图，所得葡萄糖标准曲线如下图1 1所示。所示。123.3.23.3.2组培铁皮石斛多糖总抗氧化能力的测定组培铁皮石斛多糖总抗氧化能力的测定分别精密移取不同样品质量分别精密移取不同样品质量5050

18、300g300g的的3 3种待测样品加入到有刻度试种待测样品加入到有刻度试管中，加蒸馏水至管中，加蒸馏水至2mL2mL，再加入，再加入FRAPFRAP工作液工作液3mL3mL，混匀后于，混匀后于3737反应反应30min30min，取出后立即在，取出后立即在593nm593nm处测定吸光度。以不加样品组为参照，测定样品吸光处测定吸光度。以不加样品组为参照，测定样品吸光度值，每个样品平行测度值，每个样品平行测3 3次，取平均值。根据还原力标准曲线，计算相同吸光次，取平均值。根据还原力标准曲线，计算相同吸光度值的度值的FeSOFeSO4 4当量浓度，记为当量浓度，记为FRAPFRAP值。值。3.4

19、3.4组培铁皮石斛多糖清除羟基自由基的能力组培铁皮石斛多糖清除羟基自由基的能力根据根据FentonFenton反应的方法，建立反应的方法，建立OHOH自由基产生体系模型。自由基产生体系模型。在刻度试管中加入在刻度试管中加入5mL5mL的蒸馏水的蒸馏水,30L,30L的的0.02mol/L0.02mol/L的的FeSOFeSO4 4,100L0.01,100L0.01mol/Lmol/L水杨酸水杨酸,最后加入最后加入25L0.02mol/LH25L0.02mol/LH2 2O O2 2启动反应启动反应,放置放置3737水浴保温反应水浴保温反应30min,30min,之后立即在之后立即在510nm

20、510nm处测定吸光度，作为空白吸光度值。同上，在刻度处测定吸光度，作为空白吸光度值。同上，在刻度试管中分别加入不同系列试管中分别加入不同系列5 560g60g的样品后，的样品后，再加入再加入25L0.02mol/LH25L0.02mol/LH2 2O O2 2启启动反应，水浴恒温动反应，水浴恒温30min,30min,之后测定吸光度值作为加样品后吸光度值。之后测定吸光度值作为加样品后吸光度值。清除率清除率=(A=(A1 1-A-A0 0)/A)/A0 0100%100%式中式中:A:A1 1 为加入待测物后的吸光值为加入待测物后的吸光值;AA0 0 为空白对照的吸光值。为空白对照的吸光值。1

21、33.53.5组培铁皮石斛多糖抑制超氧阴离子自由基的组培铁皮石斛多糖抑制超氧阴离子自由基的能力能力试验中采用邻苯三酚自氧化试验中采用邻苯三酚自氧化分光光度法测定抑制超氧阴离子自分光光度法测定抑制超氧阴离子自由基的能力。由基的能力。加入样品前：将加入样品前：将pH8.2Tris-HClpH8.2Tris-HCl缓冲液和缓冲液和50mmol.L50mmol.L-1-1邻苯三酚在邻苯三酚在2525的恒温水浴锅中保温，取的恒温水浴锅中保温，取5mLpH8.2Tris-HCl5mLpH8.2Tris-HCl缓冲液，加缓冲液，加30L30L50mmol/L50mmol/L邻苯三酚，摇匀，在邻苯三酚，摇匀，

22、在325nm325nm下立即测定。以下立即测定。以pH8.2pH8.2的的Tris-Tris-HClHCl缓冲液为空白，每隔缓冲液为空白，每隔0.5min0.5min测一次吸光值，计算出平均值测一次吸光值，计算出平均值A A0 0。加入样品后：取加入样品后：取5mLpH8.2Tris-HCl5mLpH8.2Tris-HCl缓冲液，加待测样品缓冲液，加待测样品5 56060gg、30L50mmol/L30L50mmol/L邻苯三酚，摇匀，立即同上测定。以邻苯三酚，摇匀，立即同上测定。以pH8.2Tris-pH8.2Tris-HClHCl缓冲液为空白，每隔缓冲液为空白，每隔0.5min0.5min

23、测一次吸光值，计算出平均值测一次吸光值，计算出平均值A A1 1。抑制率抑制率=(A=(A0 0-A-A1 1)/A)/A0 0100%100%式中：式中：A A11为加入待测物后的吸光值为加入待测物后的吸光值;AA0 0 为空白对照的吸光值。为空白对照的吸光值。143.63.6组培铁皮石斛多糖清除组培铁皮石斛多糖清除DPPHDPPH自由基的能力自由基的能力3.6.1DPPH3.6.1DPPH标准曲线的绘制标准曲线的绘制精密称取精密称取DPPH0.0202gDPPH0.0202g，加甲醇溶解定容至，加甲醇溶解定容至50mL50mL，作为储备液。，作为储备液。精密移取上述储备液精密移取上述储备液

24、10mL10mL至至100mL100mL容量瓶中，定容得容量瓶中，定容得40.4mgL40.4mgL1 1的的储备液备用。分别精密移取储备液备用。分别精密移取DPPHDPPH储备液储备液0.2mL0.2mL、0.5mL0.5mL、1.0mL1.0mL、1.5mL1.5mL、2.0mL2.0mL、2.5mL2.5mL、3.0mL3.0mL、3.5mL3.5mL、4.0mL4.0mL于于10mL10mL刻度试管中，刻度试管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，以甲醇溶剂作参比，在用甲醇定容至刻度，摇匀，以甲醇溶剂作参比，在515nm515nm处测定各溶处测定各溶液的吸光度。以液的吸光度。以DPPHDPPH的

25、质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。准曲线。配制配制DPPHDPPH标准溶液系列，绘制出标准溶液系列，绘制出DPPHDPPH标准曲线见图标准曲线见图6 6。标准曲。标准曲线线性回归方程为线线性回归方程为y=0.0208x+0.0009y=0.0208x+0.0009，在，在DPPHDPPH质量浓度为质量浓度为2 216mgL16mgL1 1线性关系良好。线性关系良好。153.6.23.6.2组培铁皮石斛多糖清除组培铁皮石斛多糖清除DPPHDPPH自由基的能力自由基的能力分别在分别在1.0mLDPPH1.0mLDPPH储备液中加入不同质量储备液中

26、加入不同质量(200(200800g)800g)样品待样品待测物，用甲醇稀释至总体积为测物，用甲醇稀释至总体积为3.00mL3.00mL，混匀放置，混匀放置40min40min后，用后，用1cm1cm比比色皿于色皿于515nm515nm处测定吸光度，根据处测定吸光度，根据DPPHDPPH标准曲线回归方程计算标准曲线回归方程计算DPPHDPPH质量浓度，按下列公式计算质量浓度，按下列公式计算DPPHDPPH清除率清除率(Y)(Y)。Y=(1-CY=(1-Ct t/C/C0 0)100%)100%式中式中:C:C00为反应体系中为反应体系中DPPHDPPH的起始质量浓度的起始质量浓度(mgL(mg

27、L1 1););CCt t为为40min40min后反应体系中后反应体系中DPPHDPPH的质量浓度的质量浓度(mgL(mgL1 1)。164试验结果4.14.1组培铁皮石斛多糖提取结果：组培铁皮石斛多糖提取结果：组培铁皮石斛苗在捣碎情况下于组培铁皮石斛苗在捣碎情况下于9090、料水比、料水比1:201:20、1 1小时条件小时条件下浸提，重复操作三次，最后得组培铁皮石斛多糖得率为下浸提，重复操作三次，最后得组培铁皮石斛多糖得率为4.254.25。4.24.2多糖含量测定结果：多糖含量测定结果：将组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗用蒽酮将组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗用蒽酮-硫酸法测定多糖硫酸

28、法测定多糖含量，组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗中多糖的纯度分别是：含量，组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗中多糖的纯度分别是：73.1573.15，10.5110.51。由此可见，组培铁皮石斛多糖中可被检测到的多。由此可见，组培铁皮石斛多糖中可被检测到的多糖明显超过组培铁皮石斛苗。糖明显超过组培铁皮石斛苗。174.3FRAP4.3FRAP法测定组培铁皮石斛的法测定组培铁皮石斛的总抗氧化能力总抗氧化能力结果：结果：由下图可知，当样品加入量在由下图可知，当样品加入量在5050300g300g范围时，随着组培铁皮范围时，随着组培铁皮石斛多糖、组培铁皮石斛苗及维生素石斛多糖、组培铁皮石斛苗及维生素C

29、C加入量的增加，其总抗氧化的加入量的增加，其总抗氧化的能力也随之增强。组培铁皮石斛苗的抗氧化能力最弱，组培石斛多糖能力也随之增强。组培铁皮石斛苗的抗氧化能力最弱，组培石斛多糖抗氧化能力相对较强，而维生素抗氧化能力相对较强，而维生素 C C的总抗氧化能力优于组培铁皮石斛的总抗氧化能力优于组培铁皮石斛苗。总体说来组培铁皮石斛多糖的总抗氧化苗。总体说来组培铁皮石斛多糖的总抗氧化 能力明显比组培铁皮石斛能力明显比组培铁皮石斛苗强得多。苗强得多。184.44.4组培铁皮石斛多糖清除组培铁皮石斛多糖清除羟基自由基羟基自由基的能力测定的能力测定结果：结果：依据依据FentonFenton反应体系建立的清除羟

30、基自由基能力，其结果如下图反应体系建立的清除羟基自由基能力，其结果如下图所示。所示。由图可知，组培铁皮石斛多糖对羟基自由基清除能力高于其余样由图可知，组培铁皮石斛多糖对羟基自由基清除能力高于其余样品，维生素品，维生素C C对羟基自由基清除能力相对较低，而组培铁皮石斛苗对对羟基自由基清除能力相对较低，而组培铁皮石斛苗对羟基自由基清除能力最低。由此可知，组培铁皮石斛多糖对羟基自由羟基自由基清除能力最低。由此可知，组培铁皮石斛多糖对羟基自由基清除能力较高，而组培铁皮石斛苗对羟基自由基清除能力相对较弱。基清除能力较高，而组培铁皮石斛苗对羟基自由基清除能力相对较弱。194.54.5组培铁皮石斛多糖组培铁

31、皮石斛多糖抑制超氧阴离子抑制超氧阴离子自由基的能力测定自由基的能力测定结果：结果：不同样品抑制超氧阴不同样品抑制超氧阴离子能力如图离子能力如图 所示。所示。由图可知，三种不同物质由图可知，三种不同物质都具有一定的抑制超氧阴都具有一定的抑制超氧阴离子自由基的能力。随着离子自由基的能力。随着样品含量的增加，样品抑样品含量的增加，样品抑制超氧阴离子自由基的能制超氧阴离子自由基的能力不断增强。组培铁皮石斛苗抑制超氧阴离子自由基的能力相对较弱，力不断增强。组培铁皮石斛苗抑制超氧阴离子自由基的能力相对较弱，当样品加量为当样品加量为10g10g时，对超氧阴离子自由基的抑制率仅为时，对超氧阴离子自由基的抑制率

32、仅为3.48%3.48%，加，加样量增大到样量增大到60g60g时，抑制率也仅为时，抑制率也仅为23.47%23.47%；组培铁皮石斛多糖抑制；组培铁皮石斛多糖抑制超氧阴离子自由基能力相对较强，即当样品质量均增加到超氧阴离子自由基能力相对较强，即当样品质量均增加到60g60g时，组时，组培铁皮石斛多糖抑制超氧阴离子自由基能力达到了培铁皮石斛多糖抑制超氧阴离子自由基能力达到了47.08%47.08%，维生素，维生素C C次之，抑制超氧阴离子自由基能力达到了次之，抑制超氧阴离子自由基能力达到了44.19%44.19%。204.64.6组培铁皮石斛多糖清除组培铁皮石斛多糖清除DPPHDPPH自由基自

33、由基能力测定结果：能力测定结果：根据标准曲线，得出三个样品清除根据标准曲线，得出三个样品清除DPPHDPPH自由基能力如图所示。自由基能力如图所示。由图可知，随着反应体系中加入组培铁皮石斛多糖、组培铁皮石由图可知，随着反应体系中加入组培铁皮石斛多糖、组培铁皮石斛苗及维生素斛苗及维生素C C的质量愈大的质量愈大，其清除，其清除DPPHDPPH自由基的能力愈强。对不自由基的能力愈强。对不同样品物质所表现出来的清除同样品物质所表现出来的清除DPPHDPPH自由基的能力有所不同。实验结自由基的能力有所不同。实验结果表明，组培铁皮石斛多糖清除果表明，组培铁皮石斛多糖清除DPPHDPPH自由基的能力相对较

34、强，当石自由基的能力相对较强，当石斛多糖质量为斛多糖质量为700ug700ug时，组培铁皮石斛多糖清除率达到时，组培铁皮石斛多糖清除率达到51.91%51.91%，而其，而其他两个样品对他两个样品对DPPHDPPH的清除率效果均低于组培铁皮石斛多糖。的清除率效果均低于组培铁皮石斛多糖。215.结论与讨论5.15.1结论：结论：(1)(1)通过研究表明，将组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗用蒽通过研究表明，将组培铁皮石斛多糖和组培铁皮石斛苗用蒽酮酮-硫酸法测定多糖含量，石斛多糖和石斛含糖量分别是：硫酸法测定多糖含量，石斛多糖和石斛含糖量分别是：73.1573.15，10.5110.51，组培铁皮石

35、斛多糖中可被检测到的多糖含量明显超过了等，组培铁皮石斛多糖中可被检测到的多糖含量明显超过了等质量的组培铁皮石斛苗；由此可见，我们将组培铁皮石斛中的多糖进质量的组培铁皮石斛苗；由此可见，我们将组培铁皮石斛中的多糖进行提取纯化，进而应用于食品加工中，具有重要意义。行提取纯化，进而应用于食品加工中，具有重要意义。(2)(2)三种不同样品的浓度愈大，清除羟基自由基的作用愈强，其三种不同样品的浓度愈大，清除羟基自由基的作用愈强，其中组培铁皮石斛多糖对羟基自由基清除能力较高，当加入样品质量达中组培铁皮石斛多糖对羟基自由基清除能力较高，当加入样品质量达到到60g60g时，清除率达到时，清除率达到91.40%

36、91.40%，而维生素，而维生素C C清除能力相对较弱，组培清除能力相对较弱，组培铁皮石斛苗对羟基自由基清除能力相对最差。铁皮石斛苗对羟基自由基清除能力相对最差。(3)(3)随着样品质量的增加，抑制超氧阴离子自由基的能力增强，随着样品质量的增加，抑制超氧阴离子自由基的能力增强，组培铁皮石斛多糖当其质量达到组培铁皮石斛多糖当其质量达到10g10g以上时，抑制率达到以上时，抑制率达到22.12%22.12%以以上，组培铁皮石斛苗抑制超氧阴离子自由基的能力也相对较弱，当其上，组培铁皮石斛苗抑制超氧阴离子自由基的能力也相对较弱，当其质量达到质量达到10g10g时，其对超氧阴离子自由基抑制率仅为时，其对

37、超氧阴离子自由基抑制率仅为3.48%3.48%，维生，维生素素C C抑制超氧阴离子自由基的能力相对好些，达到抑制超氧阴离子自由基的能力相对好些，达到6.08%6.08%。22(4)(4)采用采用DPPHDPPH法对组培铁皮石斛苗、组培铁皮石斛多糖及维生素法对组培铁皮石斛苗、组培铁皮石斛多糖及维生素C C进行了抗氧化活性研究，发现组培铁皮石斛苗、组培铁皮石斛多糖进行了抗氧化活性研究，发现组培铁皮石斛苗、组培铁皮石斛多糖及维生素及维生素C C在低浓度和高浓度时，均有一定的清除在低浓度和高浓度时，均有一定的清除DPPHDPPH自由基的能力，自由基的能力，当质量增大到当质量增大到400g400g时组培

38、铁皮石斛苗清除率高过维生素时组培铁皮石斛苗清除率高过维生素C C，当质量，当质量增大到增大到700g700g时维生素时维生素C C清除率高过组培铁皮石斛苗达清除率高过组培铁皮石斛苗达45.2745.27；铁皮；铁皮石斛多糖清除石斛多糖清除DPPHDPPH自由基的能力一直高于另外两个样品，当质量增自由基的能力一直高于另外两个样品，当质量增大到大到700g700g时清除率达到时清除率达到51.91%51.91%。5.25.2讨论：讨论：(1)(1)在组培铁皮石斛多糖的提取过程中，恒温萃取和真空浓缩都在组培铁皮石斛多糖的提取过程中，恒温萃取和真空浓缩都涉及到温度的控制，在实验过程中应严格控制温度。通

39、过查阅资料得涉及到温度的控制，在实验过程中应严格控制温度。通过查阅资料得知铁皮石斛多糖不耐高温，高温会使多糖氧化分解，从而影响试验数知铁皮石斛多糖不耐高温，高温会使多糖氧化分解，从而影响试验数据结果，所以在多糖提取过程中对温度的控制要格外认真、仔细。据结果，所以在多糖提取过程中对温度的控制要格外认真、仔细。(2)(2)制作硫酸亚铁标准曲线和样品总还原能力测定时使用到制作硫酸亚铁标准曲线和样品总还原能力测定时使用到FRAPFRAP工作液，该工作液要现用现配，否则会产生絮状物，从而影响试验效工作液，该工作液要现用现配，否则会产生絮状物，从而影响试验效果或数据。果或数据。23(3)(3)在测定三个样

40、品抑制超氧阴离子时要准确把握试验过程中试在测定三个样品抑制超氧阴离子时要准确把握试验过程中试剂加入的时间，保证是同一个人操作这个过程，减小因为个人操作不剂加入的时间，保证是同一个人操作这个过程，减小因为个人操作不同带来时间把握上的差异。因为此实验过程中要求配好溶液立即测定，同带来时间把握上的差异。因为此实验过程中要求配好溶液立即测定，每个样品测定三次吸光值，且每隔每个样品测定三次吸光值，且每隔3030秒测一次。因此，在操作时不能秒测一次。因此，在操作时不能等所有样品加好后统一测定，这样得出的试验数据就没有任何意义。等所有样品加好后统一测定，这样得出的试验数据就没有任何意义。(4)(4)通过测定

41、三种不同样品清除自由基能力的结果表明：不同样通过测定三种不同样品清除自由基能力的结果表明：不同样品物质在清除自由基时，部分低浓度清除自由基能力相对较低的样品品物质在清除自由基时，部分低浓度清除自由基能力相对较低的样品物质，随着浓度的依次增大，其对自由基的清除率会高于原本低浓度物质，随着浓度的依次增大，其对自由基的清除率会高于原本低浓度时相对较高的样品物质。这可能是和不同样品物质在不同浓度下对自时相对较高的样品物质。这可能是和不同样品物质在不同浓度下对自由基清除能力强弱有关。由基清除能力强弱有关。24(5)(5)总体说来，本试验通过对组培铁皮石斛的多糖含量进行测定总体说来，本试验通过对组培铁皮石

42、斛的多糖含量进行测定以及其抗氧化性能进行尝试性的研究，对比成熟铁皮石斛其多糖含量以及其抗氧化性能进行尝试性的研究，对比成熟铁皮石斛其多糖含量达到达到4.254.25，纯度达，纯度达73.1573.15，均接近成熟铁皮石斛；在抗氧化性能，均接近成熟铁皮石斛；在抗氧化性能方面，组培铁皮石斛多糖有良好的抗氧化作用，均优于对照品组培铁方面，组培铁皮石斛多糖有良好的抗氧化作用，均优于对照品组培铁皮石斛苗和维生素皮石斛苗和维生素C C。而且组培铁皮石斛的生长周期比成熟铁皮石斛短，而且组培铁皮石斛的生长周期比成熟铁皮石斛短，成熟铁皮石成熟铁皮石斛生长周期平均在斛生长周期平均在16-2416-24个月；广东惠

43、农苗木发展有限公司研发的个月；广东惠农苗木发展有限公司研发的“惠农惠农1 1、2 2号号”营养液在母苗初期营养、培育、及壮苗嫁接、生根苗分营养液在母苗初期营养、培育、及壮苗嫁接、生根苗分化、种苗栽培等方面取得了革命性的突破，将组培铁皮石斛从母苗到化、种苗栽培等方面取得了革命性的突破，将组培铁皮石斛从母苗到种植种苗培育期缩短为种植种苗培育期缩短为3 3个月，种植种苗成活率高、药用价值和经济个月，种植种苗成活率高、药用价值和经济效益显著。效益显著。相比之下，组培铁皮石斛从多糖含量和抗氧化性能以及生长周期相比之下，组培铁皮石斛从多糖含量和抗氧化性能以及生长周期等方面综合考虑，具有明显的开发利用优势。

44、等方面综合考虑，具有明显的开发利用优势。25致谢本论文是在导师刘云的悉心指导下完成的，感谢刘云老师在试验本论文是在导师刘云的悉心指导下完成的，感谢刘云老师在试验中给我精心的指导和极大的帮助，使我的毕业课题能够顺利完成，试中给我精心的指导和极大的帮助，使我的毕业课题能够顺利完成，试验中教会了我严谨和务实的试验风格，不仅试验过程中需要这种风格，验中教会了我严谨和务实的试验风格，不仅试验过程中需要这种风格，生活中同样也需要严谨和务实；生活中同样也需要严谨和务实；还要感谢我的指导老师阚欢教授，在课题试验过程中为我答疑解还要感谢我的指导老师阚欢教授，在课题试验过程中为我答疑解惑，给予我的鼓励和关怀，让我不断产生动力，相信这种动力对今后惑，给予我的鼓励和关怀，让我不断产生动力，相信这种动力对今后我的人生也是一种莫大的鼓舞；我的人生也是一种莫大的鼓舞；还要感谢我的搭档曾君同学，在试验过程中能充分理解我，并能还要感谢我的搭档曾君同学，在试验过程中能充分理解我，并能及时纠正我的错误，致使我们顺利完成了试验课题；最后还要感谢班及时纠正我的错误，致使我们顺利完成了试验课题；最后还要感谢班上的同学、朋友给予我的支持和帮助。上的同学、朋友给予我的支持和帮助。谢谢，谢谢您们！谢谢，谢谢您们！26请各位专家、同学给以批评指正，谢谢！27