蛋白质生物合成生物化学.pptx

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1、一、概一、概 述述 以以RNARNA中的中的mRNAmRNA为模板，将为模板，将mRNAmRNA的碱基所组成的遗传密码转变为蛋白质分子的碱基所组成的遗传密码转变为蛋白质分子中氨基酸的排列顺序，称为蛋白质的生物合成，也称为翻译（中氨基酸的排列顺序，称为蛋白质的生物合成，也称为翻译（translationtranslation）。）。简言之，就是生物体以简言之，就是生物体以mRNAmRNA为模板合成蛋白质的过程。为模板合成蛋白质的过程。翻译过程中核酸的作用翻译过程中核酸的作用:背景环境分析第1页/共72页背景环境分析第2页/共72页二、蛋白质生物合成体系二、蛋白质生物合成体系基本原料：基本原料：2

2、020种编码氨基酸种编码氨基酸模板：模板：mRNAmRNA适配器：适配器：tRNAtRNA装配机：核蛋白体装配机：核蛋白体主要酶和蛋白质因子：氨基酰主要酶和蛋白质因子：氨基酰-tRNA-tRNA合成酶、转肽酶、起始因子、延长因子、合成酶、转肽酶、起始因子、延长因子、释放因子等释放因子等能源物质：能源物质：ATPATP、GTPGTP无机离子：无机离子：Mg2+Mg2+、K+K+背景环境分析第3页/共72页（一）（一）mRNAmRNA是遗传信息的携带者是遗传信息的携带者mRNAmRNA来源、生物遗传信息储存于来源、生物遗传信息储存于DNADNA mRNA mRNA分子中的碱基排列序列决定了蛋白质分

3、子中的氨基酸排列顺序。分子中的碱基排列序列决定了蛋白质分子中的氨基酸排列顺序。mRNAmRNA中相邻的中相邻的3 3个碱基代表一个氨基酸，三个相邻的碱基称为一组密码（个碱基代表一个氨基酸，三个相邻的碱基称为一组密码（codencoden），或），或称三联体密码。称三联体密码。6464组密码组成遗传密码表：组密码组成遗传密码表：起始密码：起始密码：1 1组（组（AUGAUG），兼作），兼作MetMet的密码的密码终止密码：终止密码：3 3组（组（UAAUAA、UGAUGA、UAGUAG）6161组密码编码组密码编码2020种种-氨基酸氨基酸背景环境分析第4页/共72页遗遗 传传 密密 码码 表表

4、密码的第1位碱基(5端）密 码 的 第 二 位 碱 基 密码的第3位碱基(3端)UCAGUUUU苯丙氨酸 UUC苯丙氨酸 UUA亮氨酸UUG亮氨酸 UCU 丝氨酸 UCC 丝氨酸 UGA 丝氨酸 UCG 丝氨酸 UAU 酪氨酸 UAC 酪氨酸 UAA终止密码UAG终止密码 UGU半胱氨酸 UGC半胱氨酸UGA终止密码UGG 色氨酸 UCAG CCUU 亮氨酸CUC 亮氨酸CUA 亮氨酸 CUG 亮氨酸 CCU 脯氨酸CCC 脯氨酸CCA 脯氨酸CCG 脯氨酸 CAU 组氨酸CAC 组氨酸CAA谷胺酰胺CAG谷胺酰胺 CGU 精氨酸 CGC 精氨酸 CGA 精氨酸 CGG 精氨酸 UCA G A

5、 AUU异亮氨酸AUC异亮氨酸AUA异亮氨酸AUG甲硫氨酸 （兼起始密码）ACU 苏氨酸ACC 苏氨酸ACA 苏氨酸ACG 苏氨酸 AAU天冬酰胺 AAC天冬酰胺AAA赖氨酸AAG 赖氨酸 AGU 丝氨酸AGC 丝氨酸AGA 精氨酸AGG 精氨酸 UCAG G GUU 缬氨酸GUC 缬氨酸GUA 缬氨酸GUG 缬氨酸 GCU 丙氨酸GCC 丙氨酸GCA 丙氨酸GCG 丙氨酸 GAU天冬氨酸GAC天冬氨酸GAA谷氨酸 GAG 谷氨酸 GGU 甘氨酸GGC 甘氨酸GGA 甘氨酸GGG 甘氨酸 UCAG 背景环境分析第5页/共72页mRNA的基本结构的基本结构Start of genetic mes

6、sageCapEndTail5-端非翻译区端非翻译区 5 3 3-端非翻译区端非翻译区 开放阅读框架开放阅读框架 从从mRNA 5-端端起起始始密密码码子子AUG到到3-端端终终止止密密码码子子之之间间的的核核苷苷酸酸序序列列，称称为为开开放放阅阅读读框框架架(open reading frame,ORF)。背景环境分析第6页/共72页原核生物的多顺反子原核生物的多顺反子真核生物的单顺反子真核生物的单顺反子非编码序列非编码序列核蛋白体结合位点核蛋白体结合位点起始密码子起始密码子终止密码子终止密码子编码序列编码序列PPP5 3 蛋白质蛋白质PPPmG-5 3 蛋白质蛋白质AAA 背景环境分析第7

7、页/共72页遗传密码的特点：遗传密码的特点：1 1连续性（连续性（commalesscommaless）编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码子及密码子的各碱基之间码连续阅读，密码子及密码子的各碱基之间既无间隔也无交叉。既无间隔也无交叉。5.5.A U GA U G G C AG C A G U AG U A C A UC A U U A AU A A 3 3AlaValHisMet终止密码终止密码背景环境分析第8页/共72页基因损伤引起基因损伤引起mRNAmRNA阅读框架内的碱基发生阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变插入或缺失，可能

8、导致框移突变(frameshift(frameshift mutation)mutation)。缬缬 脯脯 苏苏 天冬天冬缬缬 丙丙 酪酪 甘甘缬缬 丙丙 丝丝 精精背景环境分析第9页/共72页2.2.方向性方向性(sideness)(sideness)翻译时遗传密码的阅读方向是翻译时遗传密码的阅读方向是5 533，即，即读码从读码从mRNAmRNA的起始密码子的起始密码子AUGAUG开始，按开始，按5 533的方向逐一阅读，直至终止密码子。的方向逐一阅读，直至终止密码子。NC肽链延伸方向肽链延伸方向53读码方向读码方向背景环境分析第10页/共72页3 3简并性（简并性（degeneracyd

9、egeneracy）在在遗遗传传密密码码表表中中，共共有有6464组组密密码码（4 43 3）。其其中中，3 3组组作作为为翻翻译译的的终终止止密密码码（UAAUAA、UAGUAG和和UGAUGA）；AUGAUG兼兼作作翻翻译译的的起起始始密密码码（AUGAUG是是蛋蛋氨氨酸酸的的密密码码），其其余余6161组组密密码码（包包括括AUGAUG作作为为亮亮氨氨酸酸的的密密码码）共共同同编编码码2020种种-氨氨基基酸酸。因因此此，必必然然有有一一种种氨氨基基酸酸由由多多组组密密码码编编码码的的现现象象，称称为为密密码码的的简简并并性性。实实际际上上，除除色色氨氨酸酸与与蛋蛋氨氨酸酸（由由一一个个

10、密密码码编编码码）外外，其其余余氨氨基基酸酸均均由由两两个个或或两两个个以以上上的的密密码码编编码码（2 26 6个）。个）。背景环境分析第11页/共72页各种氨基酸的密码子数目各种氨基酸的密码子数目背景环境分析第12页/共72页4 4通用性（通用性（universaluniversal）:无无论论原原核核生生物物如如病病毒毒、细细菌菌等等和和真真核核生生物物包包括括人人类类都都共共用用一一套套遗遗传传密密码码即即三三联体密码。只是不同生物对密码子具有偏爱性。联体密码。只是不同生物对密码子具有偏爱性。背景环境分析第13页/共72页（二）（二）tRNAtRNA是搬运氨基酸的工具是搬运氨基酸的工具

11、1.tRNA1.tRNA的结构的结构 背景环境分析第14页/共72页tRNAtRNA分子中与蛋白质合成有关的位点：分子中与蛋白质合成有关的位点：1 1）氨基酸结合位点；）氨基酸结合位点；2 2）氨酰）氨酰-tRNA-tRNA合成酶识别位点；合成酶识别位点；3 3）核糖体识别位点；）核糖体识别位点；4 4）反密码位点：）反密码位点：反反密密码码与与密密码码结结合合时时方方向向相相反反。即即反反密密码码的的第第1 1、2 2、3 3位位碱碱基基分分别别与与密密码码的的第第3 3、2 2、1 1位位碱基配对。碱基配对。背景环境分析第15页/共72页第16页/共72页 反密码与密码配对时，反密码的第反

12、密码与密码配对时，反密码的第2 2、3 3位碱基分位碱基分别与密码的第别与密码的第2 2、1 1位碱基配对时严格遵循碱基配对规位碱基配对时严格遵循碱基配对规则（即则（即A A与与U U、G G与与C C配对），而反密码的第配对），而反密码的第1 1位碱基与位碱基与密码的第密码的第3 3位碱基配对时不严格遵循碱基配对规则，位碱基配对时不严格遵循碱基配对规则，后者成为摆动配对或不稳定配对（后者成为摆动配对或不稳定配对（wobble base wobble base pairpair）。）。第17页/共72页摆动配对情况摆动配对情况 通过摆动配对，使得携带有同种氨基酸的不同通过摆动配对，使得携带有同

13、种氨基酸的不同tRNAtRNA分子可分别结合在几种分子可分别结合在几种同义密码上。如反密码为同义密码上。如反密码为IGCIGC的丙氨酰的丙氨酰-tRNA-tRNA，可分别结合到同义密码，可分别结合到同义密码GCUGCU、GCCGCC、GCAGCA上（上（GCUGCU、GCCGCC、GCAGCA均为编码丙氨酸的密码）。摆动配对的存在对于保持生均为编码丙氨酸的密码）。摆动配对的存在对于保持生物物种的稳定具有重要意义。物物种的稳定具有重要意义。反密码的第反密码的第1 1位碱基位碱基G GC CA AU UI I密码的第密码的第3 3位碱基位碱基U U或或C C G GU UA A或或G GA A、U

14、 U或或C C第18页/共72页tRNAtRNA是氨基酸与遗传密码间的适配器是氨基酸与遗传密码间的适配器第19页/共72页2.2.氨酰氨酰-tRNA-tRNA 各种氨基酸和对应的各种氨基酸和对应的tRNAtRNA结合后形成的氨基酰结合后形成的氨基酰-tRNA-tRNA表示为：表示为：氨基酸的三字母缩写氨基酸的三字母缩写-tRNA-tRNA氨基酸的三字母缩写氨基酸的三字母缩写 例如：例如：丙氨酰丙氨酰-tRNA-tRNA：Ala-tRNAAla-tRNAAlaAla精氨酰精氨酰-tRNA-tRNA：Arg-tRNAArg-tRNAArgArg甲硫氨酰甲硫氨酰-tRNA-tRNA：Met-tRNA

15、Met-tRNAMetMet起始者甲硫氨酰起始者甲硫氨酰-tRNA-tRNA：Met-tRNAiMet-tRNAiMetMet延长延长甲硫氨酰甲硫氨酰-tRNA-tRNA：Met-tRNAeMet-tRNAeMetMet第20页/共72页 在在生生物物体体内内，一一种种tRNAtRNA只只能能与与一一种种氨氨基基酸酸结结合合（即即一一种种tRNAtRNA只只能能搬搬运运一一种种氨氨基基酸酸），而而一一种种氨氨基基酸酸可可与与一一种种以以上上的的tRNAtRNA分分子子结结合合，所所以以，tRNAtRNA的的种种类类(80(80种以上）比氨基酸（种以上）比氨基酸（2020种）多。种）多。第21页

16、/共72页(三三)核糖体是蛋白质生物合成的场所核糖体是蛋白质生物合成的场所 核糖体是肽链合成的核糖体是肽链合成的“装配机装配机”。胞质中核糖体种类：胞质中核糖体种类：游离的核糖体游离的核糖体游离的核糖体游离的核糖体-合成细胞固有蛋白合成细胞固有蛋白合成细胞固有蛋白合成细胞固有蛋白 与粗面内质网结合的核糖体与粗面内质网结合的核糖体与粗面内质网结合的核糖体与粗面内质网结合的核糖体 -合成带有信号肽的分泌性蛋白质合成带有信号肽的分泌性蛋白质合成带有信号肽的分泌性蛋白质合成带有信号肽的分泌性蛋白质 核糖体由大、小亚基组成，其组成成份包括核糖体由大、小亚基组成，其组成成份包括rRNArRNA和蛋白质。和

17、蛋白质。第22页/共72页原核生物真核生物核蛋白体小亚基大亚基核蛋白体小亚基大亚基S值70S30S50S80S40S60SrRNA16S-rRNA23S-rRNA5S-rRNA18S-rRNA28S-rRNA5.8S-rRNA5S-rRNA蛋白质rpS 21种rpL 36种rpS 33种rpL 49种 不同细胞核蛋白体的组成不同细胞核蛋白体的组成第23页/共72页 在在核核糖糖体体上上，与与蛋蛋白白质质生生物物合合成成有有关关的的主主要结构有：要结构有：1 1有容纳有容纳mRNAmRNA的部位；的部位；2 2有有结结合合氨氨酰酰-tRNA-tRNA的的部部位位，称称为为氨氨酰酰基基部部位位，简

18、简称称A A位位;有有结结合合肽肽酰酰-tRNA-tRNA的的部部位位，称称为为肽肽酰酰基基部位，简称部位，简称P P位；位；3.3.有结合蛋白质因子的部位；有结合蛋白质因子的部位；4 4有有转转肽肽基基酶酶（transpeptidasetranspeptidase）存存在在，可可催催化肽键的形成；化肽键的形成；5.5.具有延长因子依赖的具有延长因子依赖的GTPGTP酶活性。酶活性。A A位和位和P P位呈紧密相邻，每个部位的宽度正位呈紧密相邻，每个部位的宽度正好相当于好相当于mRNAmRNA上一个遗传密码的宽度。上一个遗传密码的宽度。第24页/共72页第25页/共72页第26页/共72页mR

19、NAmRNA与核糖体的结合与核糖体的结合 原核生物核糖体的小亚基的原核生物核糖体的小亚基的rRNArRNA（16S16S）的）的33末端有一富含嘧啶的区段，末端有一富含嘧啶的区段，可与可与mRNAmRNA分子的起始部位的一段富含嘌呤的区段互补结合，使分子的起始部位的一段富含嘌呤的区段互补结合，使mRNAmRNA结合至核糖结合至核糖体上。体上。mRNAmRNA分子中的这段富含嘌呤的区段称为分子中的这段富含嘌呤的区段称为S-DS-D序列（序列（Shine-Dalgarno Shine-Dalgarno sequencesequence）(通常为通常为GGAGGU)GGAGGU)。S-DS-D序列位

20、于序列位于mRNAmRNA的的55端紧接起始信号的上游。端紧接起始信号的上游。第27页/共72页原核生物原核生物mRNAmRNA的的S-DS-D序列及其与序列及其与16SrRNA16SrRNA的结合的结合第28页/共72页三、蛋白质生物合成过程三、蛋白质生物合成过程 蛋白质的生物合成过程包括：蛋白质的生物合成过程包括：氨基酸的活化与转运氨基酸的活化与转运活化氨基酸在核糖体上形成多肽链。后者是蛋白质生物合成的中心环节，又称核活化氨基酸在核糖体上形成多肽链。后者是蛋白质生物合成的中心环节，又称核糖体循环。糖体循环。翻译后加工翻译后加工 第29页/共72页 氨基酸与氨基酸与tRNAtRNA的结合需要

21、氨酰的结合需要氨酰tRNAtRNA合成酶合成酶催化，并需要消耗催化，并需要消耗ATPATP。（一）氨基酸的活化与转运氨基酸的活化与转运氨基酸氨基酸 +tRNA+tRNA氨基酰氨基酰-tRNA-tRNAATPATP AMPAMPPPiPPi氨基酰氨基酰-tRNA-tRNA合成酶合成酶第30页/共72页氨基酸氨基酸 ATP-E ATP-E 氨基酰氨基酰-AMP-E-AMP-E PPiPPi 第一步反应第一步反应第31页/共72页第二步反应第二步反应氨基酰氨基酰-AMP-E-AMP-E tRNAtRNA氨基酰氨基酰-tRNA-tRNA AMP AMP E E第32页/共72页 氨基酰氨基酰-tRNA

22、-tRNA合成酶对底物氨基酸和合成酶对底物氨基酸和tRNAtRNA都有高度特异性。都有高度特异性。绝对专一性：绝对专一性：绝对专一性：绝对专一性：1 1 1 1个个个个A.AA.AA.AA.A对应对应对应对应1 1 1 1个氨基酰个氨基酰个氨基酰个氨基酰tRNAtRNAtRNAtRNA合成酶合成酶合成酶合成酶催化反应：催化反应：催化反应：催化反应：活化活化活化活化A.A-A.A-A.A-A.A-活化活化活化活化“-COOH”-COOH”-COOH”-COOH”，消耗，消耗，消耗，消耗2 2 2 2个个个个ATPATPATPATP，产产产产 物物物物氨酰氨酰氨酰氨酰tRNAtRNAtRNAtRN

23、A酶的两个位点：酶的两个位点：酶的两个位点：酶的两个位点：结合位点结合位点结合位点结合位点-结合正确的结合正确的结合正确的结合正确的A.AA.AA.AA.A，活化，活化，活化，活化 水解位点水解位点水解位点水解位点-保证保证保证保证A.AA.AA.AA.A序列的正确性序列的正确性序列的正确性序列的正确性(校正活性校正活性校正活性校正活性)氨基酰氨基酰-tRNA-tRNA合成酶合成酶第33页/共72页（二）原核生物核糖体循环（二）原核生物核糖体循环 翻翻译译时时，从从mRNAmRNA的的起起始始密密码码子子AUGAUG开开始始，按按5353方方向向逐逐一一读读码码，直直至至终终止止密密码码子子。

24、于于是是，合合成成中中的的肽肽链链从从起起始始甲甲硫硫氨氨酸酸开开始始，从从N-N-端端C-C-端端延延长长，直直至终止密码子前一位密码子所编码的氨基酸。至终止密码子前一位密码子所编码的氨基酸。第34页/共72页（一）（一）起始起始 是指是指mRNAmRNA和起始氨基酰和起始氨基酰-tRNA-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物的分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物的过程。过程。基本过程：基本过程：1.1.核蛋白体大小亚基分离；核蛋白体大小亚基分离；2.mRNA2.mRNA在小亚基定位结合；在小亚基定位结合；3.3.起始氨基酰起始氨基酰-tRNA-tRNA的结合；的结合；4.4.核

25、蛋白体大亚基结合。核蛋白体大亚基结合。第35页/共72页第36页/共72页第37页/共72页指指在在mRNAmRNA模模板板的的指指导导下下，氨氨基基酸酸依依次次进进入入核核蛋蛋白白体体并并聚聚合合成成多多肽肽链链的的过过程。程。1.1.进位进位(positioning)/(positioning)/注册注册(registration)(registration)2.2.成肽成肽(peptide bond formation)(peptide bond formation)3.3.转位转位(translocation)(translocation)（二）延长（二）延长肽肽链链延延长长在在核核蛋

26、蛋白白体体上上连连续续循循环环式式进进行行，包括以下三步：包括以下三步：每轮循环使多肽链增加一个氨基酸残基。每轮循环使多肽链增加一个氨基酸残基。第38页/共72页1.1.进位进位 又称注册又称注册(registration)(registration)，是是指一个氨基酰指一个氨基酰-tRNA-tRNA按照按照mRNAmRNA模板的指令进入并结合模板的指令进入并结合到核蛋白体到核蛋白体A A位的过程。位的过程。第39页/共72页 进位需要延长因子进位需要延长因子EF-TuEF-Tu与与EF-TsEF-Ts参与。参与。第40页/共72页第41页/共72页2.2.成肽成肽 成肽是在转肽酶成肽是在转肽

27、酶(peptidase)(peptidase)的催化下，核的催化下，核蛋白体蛋白体P P位上起始氨基酰位上起始氨基酰-tRNA-tRNA的的N-N-甲酰甲硫氨酰甲酰甲硫氨酰基或肽酰基或肽酰-tRNA-tRNA的肽酰基转移到的肽酰基转移到A A位并与位并与A A位上氨位上氨基酰基酰-tRNA-tRNA的的-氨基结合形成肽键的过程。氨基结合形成肽键的过程。第42页/共72页第43页/共72页3.3.移位移位 转位是在转位酶（延长因子转位是在转位酶（延长因子EF-GEF-G）的催）的催化下，核蛋白体向化下，核蛋白体向mRNAmRNA的的3-3-端移动一个密码端移动一个密码子的距离，使子的距离，使mR

28、NAmRNA序列上的下一个密码子进序列上的下一个密码子进入核蛋白体的入核蛋白体的A A位、而占据位、而占据A A位的肽酰位的肽酰-tRNA-tRNA移移入入P P位的过程。位的过程。移位需要延长因子移位需要延长因子EF-GEF-G参与。参与。第44页/共72页第45页/共72页进进位位移移位位成肽成肽肽链合成延长肽链合成延长(核蛋白体循环核蛋白体循环)过程过程第46页/共72页第47页/共72页（三）终止 指核蛋白体指核蛋白体A A位出现位出现mRNAmRNA的终止密码子后，的终止密码子后，多肽链合成停止，肽链从肽酰多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA-tRNA中释出，中释出，mRNAmRNA

29、、核蛋白体大、小亚基等分离的过程。、核蛋白体大、小亚基等分离的过程。终止阶段需要终止阶段需要释放因子释放因子RF-1RF-1、RF-2RF-2和和 RF-3RF-3参与参与。第48页/共72页RF-3RF-3可结合核蛋白体其他部位，有可结合核蛋白体其他部位，有GTPGTP酶活性，能酶活性，能介导介导RF-1RF-1、RF-2RF-2与核蛋白体的相互作用。与核蛋白体的相互作用。n释放因子的功能：释放因子的功能：识别终止密码子识别终止密码子RF-1RF-1特异识别特异识别UAAUAA、UAGUAG；RF-2RF-2特异识别特异识别UAAUAA、UGAUGA。诱导转肽酶转变为酯酶活性诱导转肽酶转变为

30、酯酶活性催化新生肽链与结合在催化新生肽链与结合在P P位的位的tRNAtRNA之间的之间的酯键水解，使肽链从核蛋白体上释放。酯键水解，使肽链从核蛋白体上释放。第49页/共72页原原核核肽肽链链合合成成终终止止过过程程 第50页/共72页合合成成含含1 10 0个个氨氨基基酸酸的的肽肽链链，消消耗耗多多少少A AT TP P？a aa a.活活化化2 21 10 0 =2 20 0 A AT TP P(消消耗耗2 2个个高高能能磷磷酸酸键键，计计2 2 A AT TP P)1 1s st t a aa a.1 1 G GT TP P(直直接接进进入入P P位位)其其余余9 9 a aa a.2

31、2 9 9 =1 18 8 G GT TP P(重重复复进进位位、转转肽肽、移移位位的的过过程程)终终止止 1 1 G GT TP P2 20 0+1 1+1 18 8+1 1 =4 40 0 A AT TP P (活活化化以以后后直直接接消消耗耗的的是是G GT TP P)第51页/共72页四、原核生物与真核生物肽链合成过程的主要差别四、原核生物与真核生物肽链合成过程的主要差别原核生物原核生物真核生物真核生物mRNAmRNA一条一条mRNAmRNA编码几种蛋白质（多顺反子）编码几种蛋白质（多顺反子）一条一条mRNAmRNA编码一种蛋白质（单顺反子）编码一种蛋白质（单顺反子）转录后很少加工转录

32、后很少加工转录后进行首尾修饰及剪接转录后进行首尾修饰及剪接转录、翻译和转录、翻译和mRNAmRNA的降解可同时发生的降解可同时发生mRNAmRNA在核内合成，加工后进入胞液，再作在核内合成，加工后进入胞液，再作为模板指导翻译为模板指导翻译核蛋白核蛋白体体30S30S小亚基小亚基50S50S大亚基大亚基 70S70S核蛋白体核蛋白体40S40S小亚基小亚基60S60S大亚基大亚基 80S80S核蛋白体核蛋白体起始阶起始阶段段起始氨基酰起始氨基酰-tRNA-tRNA为为fMet-tRNAfMet-tRNAfMetfMet起始氨基酰起始氨基酰-tRNA-tRNA为为Met-tRNAiMet-tRNA

33、iMetMet核蛋白体小亚基先与核蛋白体小亚基先与mRNAmRNA结合结合,再与再与fMet-fMet-tRNAtRNAfMetfMet结合结合核蛋白体小亚基先与核蛋白体小亚基先与Met-tRNAiMet-tRNAiMetMet结合，结合，再与再与mRNAmRNA结合结合mRNAmRNA中的中的S-DS-D序列与序列与16S rRNA 316S rRNA 3-端的一端的一段序列结合段序列结合mRNAmRNA中的帽子结构与帽子结合蛋白复合物中的帽子结构与帽子结合蛋白复合物结合结合有有3 3种种IFIF参与起始复合物的形成参与起始复合物的形成有至少有至少1010种种eIFeIF参与起始复合物的形成

34、参与起始复合物的形成延长阶延长阶段段延长因子为延长因子为EF-TuEF-Tu、EF-TsEF-Ts和和EF-GEF-G延长因子为延长因子为eEF-1eEF-1、eEF-1eEF-1和和eEF-2eEF-2终止阶终止阶段段释放因子为释放因子为RF-1RF-1、RF-2RF-2和和RF-3RF-3释放因子为释放因子为eRFeRF第52页/共72页五、翻译后的加工五、翻译后的加工新新生生多多肽肽链链不不具具备备蛋蛋白白质质的的生生物物学学活活性性，必必须须经经过过复复杂杂的的加加工工过过程程才才能能转转变变为为具具有有天天然然构构象象的的功功能能蛋蛋白白质质，这这一一加加工工过过程程称称为为翻翻译译

35、后后修修饰饰(posttranslational modification)(posttranslational modification)。翻翻译译后后修修饰饰使使得得蛋蛋白白质质组组成成更更加加多多样样化化，从从而而使蛋白质结构上呈现更大的复杂性。使蛋白质结构上呈现更大的复杂性。第53页/共72页（一）多肽链折叠为天然构象的蛋白质（一）多肽链折叠为天然构象的蛋白质 新生肽链的折叠在肽链合成中、合成后完新生肽链的折叠在肽链合成中、合成后完成，新生肽链成，新生肽链N-N-端在核蛋白体上一出现，肽链端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠即开始。可能随着序列的不断延伸肽链的折叠即开始。可能随着序列的不断

36、延伸肽链逐步折叠，产生正确的二级结构、模序、结构逐步折叠，产生正确的二级结构、模序、结构域到形成完整空间构象。域到形成完整空间构象。一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。基础。第54页/共72页 细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动完成，而需要其他酶和蛋白质辅助。几种有完成，而需要其他酶和蛋白质辅助。几种有促进蛋白质折叠功能的大分子促进蛋白质折叠功能的大分子:1.1.分子伴侣分子伴侣 (molecular chaperon)(molecul

37、ar chaperon)2.2.蛋白质二硫键异构酶蛋白质二硫键异构酶 (protein disulfide(protein disulfide isomerase,PDI)isomerase,PDI)3.3.肽肽-脯氨酰顺反异构酶脯氨酰顺反异构酶 (peptide prolyl-(peptide prolyl-cis-trans isomerase,PPI)cis-trans isomerase,PPI)第55页/共72页（二）一级结构修饰（二）一级结构修饰1.N-1.N-端、端、C-C-端的切除或修饰端的切除或修饰2.2.共价修饰：共价修饰：如羟基化、糖基化、磷酸化、乙酰化、羧基化、甲基化等

38、。如羟基化、糖基化、磷酸化、乙酰化、羧基化、甲基化等。第56页/共72页（三）（三）空间结构的修饰空间结构的修饰1.1.亚基聚合亚基聚合2.2.辅基连接辅基连接第57页/共72页（四）蛋白质的靶向输送（四）蛋白质的靶向输送 蛋白质在核蛋白体上合成后，必须分选出来，定向输送到一个合适的部位才蛋白质在核蛋白体上合成后，必须分选出来，定向输送到一个合适的部位才能行使各自的生物学功能。蛋白质的靶向输送与翻译后修饰过程同步进行。能行使各自的生物学功能。蛋白质的靶向输送与翻译后修饰过程同步进行。所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要是所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要是N N末端特异氨基酸

39、序列，末端特异氨基酸序列，可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这类序列称为信号序列可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这类序列称为信号序列(signal(signal sequence)sequence)。第58页/共72页信号序列的结构特点：信号序列的结构特点：1 1）由）由15-3015-30个氨基酸残基构成；个氨基酸残基构成；2 2）N N端为端为1 1个或几个带正电荷的碱性氨基酸残基，个或几个带正电荷的碱性氨基酸残基，如赖氨酸、精氨酸；如赖氨酸、精氨酸；3 3）中间为疏水中心，主要含疏水的中性氨基酸，）中间为疏水中心，主要含疏水的中性氨基酸，如亮氨酸、异亮氨酸等；如亮氨酸、异亮氨酸等；

40、4 4）C C端由极性相对较大、侧链较短的氨基酸组成端由极性相对较大、侧链较短的氨基酸组成如甘氨酸、丙氨酸等，随后是信号肽酶的裂如甘氨酸、丙氨酸等，随后是信号肽酶的裂解位点。解位点。第59页/共72页第60页/共72页六、蛋白质生物合成的干扰与抑制六、蛋白质生物合成的干扰与抑制蛋白质生物合成是很多天然抗生素和某些毒素蛋白质生物合成是很多天然抗生素和某些毒素的作用靶点。抗生素等就是通过阻断真核、原的作用靶点。抗生素等就是通过阻断真核、原核生物蛋白质翻译体系某组分功能、干扰和抑核生物蛋白质翻译体系某组分功能、干扰和抑制蛋白质生物合成过程而起作用的。制蛋白质生物合成过程而起作用的。可针对蛋白质生物合

41、成必需的关键组分作为研可针对蛋白质生物合成必需的关键组分作为研究新抗菌药物的作用靶点。同时尽量利用真核、究新抗菌药物的作用靶点。同时尽量利用真核、原核生物蛋白质合成体系的任何差异，以设计、原核生物蛋白质合成体系的任何差异，以设计、筛选仅对病原微生物特效而不损害人体的药物。筛选仅对病原微生物特效而不损害人体的药物。第61页/共72页（一）抗生素（一）抗生素抗抗生生素素(antibiotics)(antibiotics)是是一一类类由由某某些些真真菌菌、细细菌菌等等微微生生物物产产生生的的药药物物，有有抑抑制制其其他他微微生生物物生生长长或或杀杀死死其其他他微微生生物物的的能能力力，对对宿宿主主无

42、无毒毒性性的的抗抗生生素素可可用用于于预预防和治疗人、动物和植物的感染性疾病。防和治疗人、动物和植物的感染性疾病。第62页/共72页四四环环素素族族氯霉素氯霉素链霉素和卡那霉素链霉素和卡那霉素嘌呤霉素嘌呤霉素放线菌酮放线菌酮第63页/共72页抗生素抗生素 作用位点作用位点 作用原理作用原理应用应用 伊短菌素伊短菌素 原核、真核核蛋白体原核、真核核蛋白体小亚基小亚基 阻碍翻译起始复合物的形成阻碍翻译起始复合物的形成抗肿瘤药抗肿瘤药四环素、土霉素四环素、土霉素 原核核蛋白体小亚基原核核蛋白体小亚基 抑制氨基酰抑制氨基酰-tRNA-tRNA与小亚基与小亚基结合结合 抗菌药抗菌药链霉素、新霉素、链霉素

43、、新霉素、巴龙霉素巴龙霉素 原核核蛋白体小亚基原核核蛋白体小亚基 改变构象引起读码错误、抑改变构象引起读码错误、抑制起始制起始抗菌药抗菌药氯霉素、林可霉氯霉素、林可霉素、红霉素素、红霉素 原核核蛋白体大亚基原核核蛋白体大亚基抑制转肽酶、阻断肽链延长抑制转肽酶、阻断肽链延长抗菌药抗菌药嘌呤霉素嘌呤霉素 原核、真核核蛋白体原核、真核核蛋白体 使肽酰基转移到它的氨基上使肽酰基转移到它的氨基上后脱落后脱落抗肿瘤药抗肿瘤药放线菌酮放线菌酮 真核核蛋白体大亚基真核核蛋白体大亚基 抑制转肽酶、阻断肽链延长抑制转肽酶、阻断肽链延长医学研究医学研究 夫西地酸、细球夫西地酸、细球菌素菌素EF-G EF-G 抑制抑

44、制EF-GEF-G、阻止转位、阻止转位抗菌药抗菌药壮观霉素壮观霉素原核核蛋白体小亚基原核核蛋白体小亚基 阻止转位阻止转位抗菌药抗菌药常用抗生素抑制蛋白质生物合成的原理与应用常用抗生素抑制蛋白质生物合成的原理与应用第64页/共72页（二）干扰蛋白质生物合成的生物活性物（二）干扰蛋白质生物合成的生物活性物质质白白喉喉毒毒素素是是真真核核细细胞胞蛋蛋白白质质合合成成的的抑抑制制剂剂，它它作作为为一一种种修修饰饰酶酶，可可使使eIF-2eIF-2发发生生ADPADP糖糖基基化化共共价价修修饰饰，生生成成eIF-2eIF-2腺腺苷苷二二磷磷酸酸核核糖糖衍衍生生物物，使使eIF-2eIF-2失活。失活。1

45、 1白喉毒素白喉毒素(diphtheria toxin)(diphtheria toxin)第65页/共72页第66页/共72页2.干扰素干扰素干干扰扰素素(interferon,(interferon,IFN)IFN)是是真真核核细细胞胞被被病病毒毒感感染染后后分分泌泌的的一一类类具具有有抗抗病病毒毒作用的蛋白质，可抑制病毒的繁殖。作用的蛋白质，可抑制病毒的繁殖。干干扰扰素素分分为为-（白白细细胞胞）型型、-（成成纤纤维维细细胞胞）型型和和-（淋淋巴巴细细胞胞）型型三三大类，每类各有亚型，分别具有其特异作用大类，每类各有亚型，分别具有其特异作用。第67页/共72页n干扰素抑制病毒的作用机制有

46、两方面：干扰素抑制病毒的作用机制有两方面：一一是是干干扰扰素素在在某某些些病病毒毒双双链链RNARNA存存在在时时，能能诱诱导导特特异异的的蛋蛋白白激激酶酶活活化化，该该活活化化的的蛋蛋白白激激酶酶使使eIF-2eIF-2磷酸化而失活，从而抑制病毒蛋白质合成；磷酸化而失活，从而抑制病毒蛋白质合成；二二是是干干扰扰素素能能与与双双链链RNARNA共共同同活活化化特特殊殊的的2-2-55寡寡聚聚腺腺苷苷酸酸（2-5A2-5A）合合成成酶酶，催催化化ATPATP聚聚合合，生生成成单单核核苷苷酸酸间间以以2-52-5磷磷酸酸二二酯酯键键连连接接 的的 2-5A2-5A，经经 2-5A2-5A活活 化化

47、 核核 酸酸 内内 切切 酶酶RNase RNase L L，后后者者可可降降解解病病毒毒mRNAmRNA，从从而而阻阻断断病病毒毒蛋白质合成。蛋白质合成。第68页/共72页n干扰素的作用机制干扰素的作用机制:干扰素诱导的蛋白激酶干扰素诱导的蛋白激酶dsRNA1.1.干扰素诱导干扰素诱导eIFeIF2 2磷酸化而失活磷酸化而失活ATPeIF2ADPeIF2-P（失活）Pi磷酸酶磷酸酶第69页/共72页2.2.干扰素诱导病毒干扰素诱导病毒RNARNA降解降解dsRNA干扰素干扰素AAPAPPPP2 5 2 5 5 2-5 AAPPPATP2-5A2-5A合成酶合成酶降解降解mRNAmRNARNaseLRNaseL活化活化第70页/共72页本章主要内容本章主要内容翻译的概念，蛋白质生物合成体系的组成及作用。遗传密码的概念、特点、起始密码子与终止密码子。核蛋白体在蛋白质合成中的作用，核蛋白体上A、P及其作用，转肽酶及其作用tRNA在蛋白质生物合成中的作用，tRNA与蛋白质生物合成有关的关键部位（氨基酸接受臂、反密码子）。氨基酸活化的概念、氨酰-tRNA合成酶及其作用。原核生物S-D序列、进位、成肽、转位的概念，信号肽概念、作用及结构特性。第71页/共72页感谢您的观看！第72页/共72页