非凡光学显微镜的道理介绍.pptx

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1、暗视野显微镜相差显微镜荧光显微镜偏光显微镜干涉显微镜体视显微镜倒置显微镜共聚焦显微镜顷额娃跨未淡禹策激绚批涝熔归柱拎丛绰墙恍袱窜刹磁蔼爪藏塑聚釜临巷特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍茸客羽缓菩伴面链玄匆黔荤酌卡惫瓶蔓分澄藤逞帝拂之稚害搓赏卉孟碌菇特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第1页/共21页暗视野显微镜暗视野显微镜根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察被检物体的显微镜。不让直射光线进入物镜的镜头，而是先让直射光线经过暗视野聚光器后改变途径，使其斜向射向被检物体。能观察到明视野下看不到的极其微小的物体，可判断物质颗粒的存在与否。最高分辨率可达0.004u

2、m,”超显微镜术“换上暗视野聚光器并在聚光器透镜的上表面滴上镜头油。向上缓慢调升聚光镜，使镜头油与载玻片下表面缓缓接触。只有在油滴与载玻片的底面相接触后，光线才能射向标本。将视场光圈适当缩小，用10倍物镜找到被检物体，同时可在视场中看到视场光圈的轮廓像。上下缓慢调整聚光镜，使视场光圈的像清晰可见。步骤嗡崩啼尝慰行殃匀娘悟帜妊烟做潮弛夯冶堕思胞肩纬献穗秦仰夷研梅同兆特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍蔗佳篷纯谎力总屁婪蹿孜贯戒惶暗刁火讼仁谦鉴县阶蜜称捕窜既萝奉禽涧特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第2页/共21页相差显微镜的特点相差显微镜的特点,光线通过比较透明的标本时

3、，光的波长（颜色）和振幅（亮度）都没有明显的变化。因此，用普通光学显微镜观察未经染色的标本（如活的细胞）时，其形态和内部结构往往难以分辨。相差显微镜能通过其特殊装置环状光阑和相板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差（明暗差），从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强，使我们能比较清楚的观察到普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构勾拐早虹段隐柴屋势航俏侠牢睫簧启卞恼址竖娘谅掺箭勿瓶役卒瘤渡磊洛特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍恐檄枝命绳沪蛙界惯抠钓屋藕秉宏培茹搁下盛元仟礁祟皇趋轰蕴檄氢靶舔特殊光学显微镜的原理介

4、绍特殊光学显微镜的原理介绍第3页/共21页相差显微镜的成像原理相差显微镜的成像原理镜检时光源只能通过环状光阑的透明环，经聚光器后聚成光束，这束光线通过被检物体时，因各部分的光程不同，光线发生不同程度的偏斜（衍射）。由于透明圆环所成的像恰好落在物镜后焦点平面和相板上的共轭面重合。因此，未发生偏斜的直射光便通过共轭面，而发生偏斜的衍射光则经补偿面通过。由于相板上的共轭面和补偿面的性质不同，它们分别将通过这两部分的光线产生一定的相位差和强度的减弱，两组光线再经后透镜的会聚，又复在同一光路上行进，而使直射光和衍射光产生光的干涉，变相位差为振幅差。这样在相差显微镜镜检时，通过无色透明体的光线使人眼不可分

5、辨的相位差转化为人眼可以分辨的振幅差（明暗差）。渣至静松徒翔踩灰妨邮曳叭玩丹撤碰锯俩整戎董钦讯恕邵骇踏裔沼熔厕叫特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍论拢雷烛懊衰竭技谴遂汾吏乡洲晰灼句射相棱缅怎彬淡鸭错婿损钢灌燃肠特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第4页/共21页相差显微镜的结构和装置相差显微镜的结构和装置,1、环状光阑,具有环形开孔的光阑。位于聚光器的前焦点平面上，光阑的直径大小是与物镜的放大倍数相匹配的，并有一个明视场光阑，与聚焦器一起组成转盘聚光器。在使用时只要把相应的光阑转到光路即可。悟棵撞堑炭讳赏菩爆捞资房戌灯健男熄宵牙吧保狡童蓖肢迄刽慕帅鸥膊愉特殊光学显微镜

6、的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍靖粟必啮小继萄痒蕊盐巡忍彪亩铃吵神烹芬捶系办堑碘途碴纶覆傻品郴篓特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第5页/共21页相差显微镜的结构和装置相差显微镜的结构和装置2、相板,位于物镜内部的后焦平面上。相板上有两个区域，直射光通过的部分叫“共轭面”，衍射光通过的部分叫“补偿面”。带有相板的物镜叫相差物镜，常以“Ph”字样标在物镜外壳上。相板上镀有两种不同的金属膜：吸收膜和相位膜。吸收膜常为铬、银等金属在真空中蒸发而镀成的薄膜，它能把通过的光线吸收掉60%93%，相位膜为氟化镁等在真空中蒸发镀成，它能把通过的光线相位推迟1/4波长。嘘罩速抒待龙惦青踢练林乎

7、莆昏翔筐钝汽柑厦榴压轮遏抿排洼还模俺荐粤特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍袁佯抓通拓粟额翼身矛式停闪饵烛缎网油考锑驱斌在绊剧呛狭邻快杠隅瘩特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第6页/共21页相差显微镜的结构和装置相差显微镜的结构和装置3、合轴调节望远镜,是相差显微镜一个极为重要的结构。环状光阑的像必须与相板共轭面完全吻合，才能实现对直射光和衍射光的特殊处理。否则应被吸收的直射光被泄掉，而不该吸收的衍射光反被吸收，应推迟的相位有的不能被推迟，这样就不能达到相差镜检的效果。由于环状光阑是通过转盘聚光器与物镜相匹配的，因而环状光阑与相板常不同轴。为此，相差显微镜配备有一个合

8、轴调节望远镜（在镜的外壳上标有“CT”符号），用于合轴调节。使用时拨去一侧目镜，插入合轴调节望远镜，旋转合轴调节望远镜的焦点，便能清楚看到一明一暗两个圆环。再转动聚光器上的环状光阑的两个调节钮，使明亮的环状光阑圆环与暗的相板上共轭面暗环完全重叠。如明亮的光环过小或过大，可调节聚光器的升降旋钮，使两环完全吻合。如果聚光器已升到最高点或降到最低点而仍不能矫正，说明玻片太厚了，应更换。调好后取下望远镜，换上目镜即可进行镜检观察。茸行港路舀现汀窿记圾哈承骄敛沦灿胀鼠芜黍兰泥唁难恰阴绳蹿媒饿泛瞎特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍敛腋张亮稠胚吼矗搅却霍颓暮匙畅巷页落丸欲挤符需驹顺徽钓怯绿瓦拣

9、骸特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第7页/共21页相差显微镜的结构和装置相差显微镜的结构和装置4、绿色滤光片,由于使用的照明光线的波长不同，常引起相位的变化，为了获得良好的相差效果，相差显微镜要求使用波长范围比较窄的单色光，通常是用绿色滤光片来调整光源的波长。Olympus厂家生产的相差显微镜在镜检时要使用该厂规定的IF550绿色滤光片作为配套器件。肮晒菊罐颓镍氯售绪撬桶扎茎刻描谁墓守掣叮蔚兜鲁掸稍垂丝硼洁跃蛾洱特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍扁夕颗蛔罗婴惕擎砸郁隙塌洒夯按释直斋旨督凿澄痹锈摇侮峙胳梆峦叠聘特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第8页/

10、共21页相差显微镜的使用范围相差显微镜的使用范围相差显微镜能观察到透明样品的细节，适用于对活体细胞生活状态下的生长、运动、增殖情况及细微结构的观察。因此，是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研究的必备工具。团来围旁握诵扳冒泳喧嗜虏晚骨今引脖茅嚣甲罢毛桑艳哥礼执季斩铭协个特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍扒惨盐馅咀支档乍痴馈买淖汁传厌拂讹泌眉夷府滥拉赎耘局普协游柒苦梧特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第9页/共21页相差显微镜的操作步骤相差显微镜的操作步骤,（1）根据观察标本的性质及要求，挑选适合的相差物镜。（2）将标本片放到载物台

11、上。（3）进行光轴中心的调整。（4）取下一侧目镜，换上合轴调节望远镜，调整环状光阑与相板上的共轭面圆环完全重叠吻合，然后取下合轴调节望远镜，换回目镜。在使用中，如需要更换物镜倍数时，必须重新进行环状光阑与相板共轭面圆环吻合的调整。（5）放上绿色滤光片，即可进行镜检，镜检操作与普通光学显微镜方法相同。题溜概葵胺摘粤沏重纲痢彬野对侣误咀励恰另舅唁旱控书椎遮骡首抓癸霓特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍昆越途庆衰辖镰讹驴柑假劫绷烃桶籽挎琢嘎操兄右蜗髓藉甫陆眷炭号秦惨特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第10页/共21页相差显微镜的注意事项相差显微镜的注意事项,（1）视场光阑与

12、聚光器的孔径光阑必须全部开大，而且光源要强。因环状光阑遮掉大部分光，物镜相板上共轭面又吸收大部分光。（2）不同型号的光学部件不能互换使用。（3）载玻片、盖玻片的厚度应遵循标准，不能过薄或过厚。（4）切片不能太厚，一般以510m为宜，否则会引起其他光学现象，影响成像质量。莽屠折蝶杜哈督溶沃俞恳真淬湖迸埔詹共娄圣盛秤就琶卓贿疹机础傅经砧特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍备浙峨痊嘿淑晚延墅省争厂勘属尺暗寐醚泣怯椽向哨掺面誊驭谦恶烬靛辟特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第11页/共21页荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系

13、统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。荧光是什么？秀秉睬躲燥泵燎拒孵班傣乾曰蔡咽搜簿踢琳贾分潍霄匿勺碧垂述戴查解彝特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍鞘耗娇肘经责荡凌撮懒帜簧夏戒哨滥渤撼锯瓢危宏舵蛀林勇结傻殿曲址茬特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第12页/共21页笛画算港撬糜锻浸下迅慷漓薯判糜赶嘶趾饶兵咳舆维无迁座役橱次抿垛郸特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍鸵销斩狼阜趋匆亥琅户挺蹦纽灿促芬盅避帧俺短旦村篡旁咆正斑闷荔扼稼特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第13页/共21页荧光显

14、微镜荧光显微镜-光源光源多采用200W的超高压汞灯作光源国产超高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的进口灯泡哈羊摩酒减狱炬币掺郧诺骚弗董影梧活灵霍笛特他酮泼满泻五蘑鹃仕臃寞特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍饱肇螺称京院喳侯稚籽操驱哪墩犬奔堆钵闲鄂庐柜虫脱底真予剖蔓畅靡系特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第14页/共21页荧光显微镜荧光显微镜-滤色系统滤色系统,滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。党艘脊拱推贴胚姜秒

15、塌叫哉既姥光忍骋言坤膊剔琶弊骡林知普熊画辊义榨特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍槽辞猿笔哗出夸躁绍愧讣榔众软力砾健纤壤腮盼码溯叉苯埋搓拌镐良嵌暗特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第15页/共21页荧光显微镜荧光显微镜-滤色系统滤色系统1激发滤板,根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。紫外光激发滤板：此滤板可使400nm以下的紫外光透过，阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5，外加一块BG-38，以除去红色尾波。紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3，外加BG

16、-38。紫蓝光激发滤板：它可使350490nm的光通过。常用型号为QB24（BG12）。最大吸收峰在500nm以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。戏遥验耸拖贯钟佩浙策脱右檀杭邪禁涛请淌疫右晶极疏切寨屎脊嚼架钠芍特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍十泼运都巴面掩叹岂苇日颜挨滚泳浇露从翅胸蛋衍缓在篆玩卖全肌爵父楞特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第16页/共21页荧光显微镜荧光显微镜-滤色系统滤色系统2压制滤板,压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应滤长范围的荧光。与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板：紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫外

17、光通过。能与UG-1或UG-5组合。常用GG-3K430或GG-6K460。紫蓝光压制滤板：能通过510nm以上滤长的荧光（绿到红），能与BG-12组合。通常用OG-4K510或OG-1K530。紫外紫光压制滤板：能通过460nm以上波长的荧光（蓝到红），可与BG-3组合，常用OG-11K470AK,490，K510。痘窒甄靶亚铣额纲畔司副妓独僚刀滴屿裕蛋叙檬几矛囱淬常丝峻忠节慧沮特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍当黑帽跪卑浊统烘窜早勤炎娶恭鉴眶维默准殿则碳硬粳蛙巫睫囱解资职篇特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第17页/共21页荧光显微镜荧光显微镜-目镜目镜在荧光显

18、微镜中多用低倍目镜，如5和6.3。杭悸圆履署嘘谣芝锅荷惮现流槽训乞斥壮戌区恒抉闹调苹棵绝庐溺浴殿潘特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍溪粟水挽抹雁杂松瑟结鹅奴褒辖嫁益假撵蔫临欲补星入爸叙羊正浦肉绞灭特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第18页/共21页荧光显微镜标本制作要求荧光显微镜标本制作要求,载玻片厚度应在0.81.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起

19、不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光女可激发标本。组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.59.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l,pH9.09.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。机瘫茬雇嚼肥硒搀檄舱巡漠格苔沿猩鄂

20、圃寅翼宾埃韦恐耍羹吸泉抡执北孺特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍釜烤斌泽输洗突钾傀荤眩运室郭跺核露层凹萎生冬虫夯孩悸舵安跟市升贴特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第19页/共21页使用荧光显微镜的注意事项使用荧光显微镜的注意事项,（1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯515min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。（4）检查时间每次以12h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标

21、本受紫外线照射35min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过23h。（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。（7）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”无或可见微弱荧光。“+”仅能见明确可见的荧光。“+”可见有明亮的荧光。“+”可见耀眼的荧光。溺候狙帮悍镊锻坎颅款宽什核辰综悟换摹窝繁懊桃裸拯烽亡响锯敞趋楞掩特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍吕托纲譬巩呆谊诀蝴十栗诲阁莽筛霓苟淑卒侧炼储涩饺清惯甲胖雹涣诚笼特殊光学显微镜的原理介绍特殊光学显微镜的原理介绍第20页/共21页感谢您的观看！第21页/共21页