DNA的粗提取与鉴定公开课.pptx

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1、一、课题重点与难点 课题重点：DNA的粗提取和鉴定原理、方法。课题难点：DNA的粗提取和鉴定原理、方法。二、基础知识分析（一）DNA的提取原理(看书P54)1、DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同第1页/共25页 问题思考与讨论：根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？第2页/共25页当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出如何通过控制NaCl溶液的浓度使DN

2、A在盐溶液中溶解或析出？第3页/共25页DNADNA不溶于酒精溶液，不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对但对DNADNA没有影

3、响没有影响第4页/共25页第5页/共25页试剂：试剂：（二）（二）DNADNA的鉴定的鉴定条件：条件：二苯胺二苯胺沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNA遇二苯胺被染成遇二苯胺被染成蓝色蓝色沸水浴沸水浴现象：现象：第6页/共25页1、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（）A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l2、DNA遇二苯胺会染成（沸水浴）A 硅红色 B 红色 C 紫色 D 蓝色C C D D 3、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是A 加蒸馏水 B 加矿泉水C 加清水 D 加生理盐水A A练一

4、练练一练第7页/共25页4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是A 减小;减小 B 增大;增大C 先减小后增大;增大 D增大;减小 C C第8页/共25页（一）（一）实验材料的选取实验材料的选取（二）（二）破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液（三）（三）除去滤液中的杂质除去滤液中的杂质(纯化纯化)（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定二、实验设计第9页/共25页（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取从下列材料中选取从下列材料中选取2 23 3种种原则：原则：菜花、香蕉、菜花、香蕉、猕猴桃猕猴桃、洋葱、

5、豌豆、菠菜；、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵鱼卵、猪肝猪肝、鸡血鸡血、哺乳动物的红细胞哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的在液体培养基中培养的大肠杆菌大肠杆菌凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织第10页/共25页 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。鱼卵是减数分裂的产物。第11页/共25页（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DN

6、ADNA的滤液的滤液1 1、动物细胞、动物细胞2 2、植物细胞、植物细胞容易破碎容易破碎需要溶解细胞膜需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液过滤后收集滤液想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出从而释放出DNADNA 加

7、入一定的洗涤剂和食盐加入一定的洗涤剂和食盐 充分的充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液搅拌和研磨，过滤后收集研磨液想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂洗涤剂离子去污剂，能溶解细胞膜，利于离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNADNA释放释放食食 盐盐NaClNaCl，利于，利于DNADNA的溶解于研磨液中的溶解于研磨液中第12页/共25页经研磨可经研磨可破碎细胞壁破碎细胞壁，使细胞核内的，使细胞核内的DNADNA释放。若研磨不释放。若研磨不充分，充分，会使提取的会使提取的DNADNA量变少量变少，导致看不到丝状沉淀物、，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定

8、不显示蓝色等。用二苯胺鉴定不显示蓝色等。为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：滤液讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？研磨液中可能含有哪些成分？答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？第13页/共25页1.DNA1.DNA的溶解性的溶解性2.DNA2.DNA对对酶酶、高温高温和和洗涤剂洗涤剂的耐受性的耐受性（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质第14页/共25页

9、讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用方案二：利用蛋白酶蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的分解杂质蛋白，使提取的DNADNA 与蛋白质分开；与蛋白质分开；方案三：利用方案三：利用DNADNA和蛋白质对和蛋白质对高温耐受性高温耐受性的不同，的不同，使蛋白质变性，与使蛋白质变性，与DNADNA分离分离第15页/共25页（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定与滤液与滤液体积相等体积相等的的冷却冷却的的酒精溶液酒精溶液(体积分数体积分数9595)，静置静置2 23min3min，溶液中会出现，溶液中会出现白色白色丝状物丝状物 粗提取粗提取DNADN

10、A用玻璃棒沿一个方向搅拌，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出第16页/共25页第17页/共25页2.DNA2.DNA的鉴定的鉴定 向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl2mol/L NaCl 溶液溶液5ml5ml 其中一支试管中加入其中一支试管中加入DNADNA丝状物丝状物 各加入各加入二苯胺二苯胺试剂试剂4ml4ml 混匀后，置于沸水浴中加热混匀后，置于沸水浴中加热5min5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：观察现象：溶

11、解丝状物的溶液变为溶解丝状物的溶液变为蓝色蓝色第18页/共25页第19页/共25页答：整个实验共“两次蒸馏水，两次析出”6、小结：两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破 第二次：使 DNA黏稠物析出 （1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次析出？两次析出第一次：用0.14 molL 的NaCI溶液含杂质多第二次：用冷却的95的酒精第20页/共25页观察你提取的观察你提取的DNADNA颜色，颜色，如果如果不是白色丝状物不是白色丝状物，说明说明DNADNA中的中的杂质较多杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，说明实验基本成功，如果如果不呈现蓝色不呈现蓝色，可能所提取的可能所提取的

12、DNADNA含量低含量低，或是实验操作中出现错误，或是实验操作中出现错误，需要重新制备需要重新制备五、课题成果评价五、课题成果评价（一）是否提取出了（一）是否提取出了DNADNA四、四、实验提示实验提示P56P56第21页/共25页1 1提取鸡血中提取鸡血中DNADNA时，要除去血液中的上清液，这是因为什么？时，要除去血液中的上清液，这是因为什么？2 2填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质提取鸡血细胞中核物质 溶解核内溶解核内DNADNA：析出析出2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液中的溶液中的DNADNA DNADNA粘稠物

13、的再溶解粘稠物的再溶解 提取杂质较少的提取杂质较少的DNADNA白色乳状丝状物白色乳状丝状物 DNADNA的鉴定的鉴定 思考与讨论：思考与讨论：3.3.为什么用塑料试管比玻璃试管较好？为什么用塑料试管比玻璃试管较好？第22页/共25页方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 幻灯片 18 3.溶解细胞核内的DNA 2 m1L 的NaCI溶液40mL 幻灯片 18 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL 幻灯片 18 A:(1)向试管中加入0.015 molL 的NaCl溶液5mL(2)加入DNA(3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL(2)4 mL 二苯胺试剂 第23页/共25页课堂小结第24页/共25页感谢您的欣赏！第25页/共25页