Hela细胞的传代培养.pptx

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1、教学目标教学目标细胞传代培养的操作 第1页/共17页细胞传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。第2页/共17页培养细胞一代生长过程培养细胞一代生长过程第3页/共17页实验前准备实验前准备 1 1、材料：HeLa HeLa细胞 2 2、试剂：0.250.25胰蛋白酶、16401640培养基（含1010 小牛血清）、PBSPBS 第4页/共17页实验前准备实验前准备超净工作台CO2培养箱倒置显微镜3.3.仪器设备第5页/共17页离心机恒

2、温水浴锅3.3.仪器设备实验前准备实验前准备第6页/共17页培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.3.仪器设备实验前准备实验前准备第7页/共17页（1）细胞培养用的器材和试剂灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。4.4.实验前准备工作实验前准备实验前准备细胞生存环境：无菌、无毒第8页/共17页细胞传代操作细胞传代操作 1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液第9页/共17页细胞传代操作细胞传代操作

3、2、胰蛋白酶消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液第10页/共17页细胞传代操作细胞传代操作3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。消化前细胞消化后细胞（适度状态）吸除消化液第11页/共17页细胞传代操作细胞传代操作 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。吹打成细胞悬液吹打成细胞悬液第12页/共17页分装细胞传代操作细胞传代操作5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。第13页/共17页实验操作注意事项实验操作注意事项1.用电安全 3.及时规范记录 第14页/共17页HeLa细胞传代培养实验原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。第15页/共17页ThankyouThankyou第16页/共17页感谢您的观看！第17页/共17页