免疫组织化学(一)课件.ppt

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1、免疫组织化学免疫组织化学实验技术实验技术免疫组织化学的定义免疫组织化学的定义免疫组织化学（免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术是应用免疫学基本原理）技术是应用免疫学基本原理抗原抗原抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物质定性和定位的组织化学技术。质定性和定位的组织化学技术。定性与定位定性与定位免疫组织化学的分类免疫组织化学的分类 免疫荧光法免疫荧光法 免疫酶法免疫酶法 免疫胶体金法等免疫胶体金法等实验所用标本实验所用标本组织标本石蜡切片冰冻切片病理切片组织芯片石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态石蜡切片是制作

2、组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究存档，供回顾性研究实验所用抗体实验所用抗体单克隆抗体：一个单克隆抗体：一个B B淋巴细胞克隆分泌的抗体，淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体：将纯化后的抗原直接免疫动物多克隆抗体：将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。l酶联

3、免疫组织化学酶联免疫组织化学 三步法三步法 二步法二步法l荧光标记免疫组织化学荧光标记免疫组织化学常用染色方法常用染色方法SP法SPSP法检测法检测ERalphaERalpha在绵羊输出管中的分布在绵羊输出管中的分布酶标二步法免疫荧光（免疫荧光（FITCFITC）检测垂体中）检测垂体中LHLH免疫荧光法（免疫荧光法（TRITCTRITC）检测）检测PRLPRL组织切片脱蜡水化组织切片脱蜡水化 二甲苯，二甲苯，10min10min 2 2 无水乙醇，无水乙醇，5min5min 90%90%乙醇，乙醇，5min5min 80%80%乙醇，乙醇，5min5min 70%70%乙醇，乙醇，5min5m

4、in 蒸馏水，蒸馏水，5min5min 1.1.脱蜡和水化脱蜡和水化免疫组织化学步骤免疫组织化学步骤抗原修复抗原修复 l高压修复高压修复l 微波修复微波修复l 胰酶修复胰酶修复免疫显色免疫显色 PBSPBS洗洗,3,3 3min3min；3%H3%H2 2O O2 2，室温，室温5 5分钟；分钟；PBSPBS洗洗,3,3 3min3min 10%10%正常山羊血清封闭液正常山羊血清封闭液,室温室温1010分钟分钟 滴加一抗，滴加一抗，44于湿盒中孵育过夜。于湿盒中孵育过夜。免疫显色免疫显色 PBSPBS洗洗,3,3 3min3min；二抗孵育二抗孵育 PBSPBS洗洗,3,3 3min3min

5、 三抗孵育三抗孵育 PBSPBS洗洗,3,3 3min3min DABDAB染色，苏木素复染染色，苏木素复染脱水封片脱水封片 70%70%乙醇，乙醇，5min5min 80%80%乙醇，乙醇，5min5min 90%90%乙醇，乙醇，5min5min 无水乙醇，无水乙醇，5min5min 二甲苯，二甲苯，10min10min 2 2 取出切片，滴加取出切片，滴加30 L30 L中性树胶，用盖玻片封中性树胶，用盖玻片封片晾干后观察结果，进行分析统计。片晾干后观察结果，进行分析统计。组织化学结果图片组织化学结果图片Journal IFArticlesCell and Tissue Research

6、(德国德国)2.670 171Histochemistry and Cell Biology(德国德国)2.594 112Journal of Histochemistry&Cytochemistry(美国美国)2.513 172Histology and Histopathology(西西班牙班牙)1.931 135Applied Immunohistochemistry&Molecular Morphology(美国美国)1.402 63Cells Tissues Organs(瑞士瑞士)1.319 58Acta Histochemica(荷荷兰)0.895 42European Jour

7、nal of Histochemistry(意大利意大利)0.845 51Folia Histochemica et Cytobiologica(波波兰)0.672 38Acta Histochemica et Cytochemica(日本日本)0.460 36SCI收录的组织化学相关杂志相关抗体及组化相关产品公司相关抗体及组化相关产品公司lDAKOlNovocastralSeroteclZymedlSanta CruzlChemiconlR&DlNeomarker免疫组织化学相关英文缩写词汇免疫组织化学相关英文缩写词汇lIHC，immunohistochemistry，免疫组织化学，免疫组织

8、化学lICC，immunocytochemistry，免疫细胞化学，免疫细胞化学lAP，Alkaline phosphatase 碱性磷酸酶碱性磷酸酶lHRP，horseradish peroxidase，辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶lPAP，peroxidase anti-peroxidase，过氧化物酶抗过，过氧化物酶抗过氧化物酶复合物氧化物酶复合物lDAB，3，3-diaminobenzidine，二氨基联苯胺，二氨基联苯胺lTMB，3，3，5，5-tetrametylbenzidine，四甲基联，四甲基联苯胺苯胺lNBT，Nitroblue tetrazolium，四唑氮蓝，四唑氮蓝

9、lBCIP，5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate，5-溴溴-4-氯氯-3-吲哚磷酸盐吲哚磷酸盐lABC，avidin-biotinylated horseradish peroxidase complex，ABC复合物复合物lFITC，fluorescein isothiocyanate，异硫氰，异硫氰酸荧光素（在荧光显微镜下呈黄绿色荧光）酸荧光素（在荧光显微镜下呈黄绿色荧光）lTRITC，tetrametrylrhodarnine isothiocyante四甲基异硫氰酸罗丹明（在荧四甲基异硫氰酸罗丹明（在荧光显微镜下呈橙红色荧光）光显微镜下呈橙红色荧光）免疫组织化学相关英文词汇及缩写免疫组织化学相关英文词汇及缩写谢谢大家！谢谢大家！