液相色谱仪日常维护及常见故障.pptx

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1、1流动相2脱气机（在线）3泵（单元、二元、四元）4进样器（手动、自动）5色谱柱6检测器(VWD/DAD/FLD/RID)一、液相色谱仪日常维护及注意事项第1页/共73页所用溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所用溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用，也不要用错。每一张滤膜只能用一次，不能重复使用。如果没有在线脱气机，所用溶剂应经过超声脱气。水易滋生藻类，避免直接照射，过滤后的水最好使用不要超过两天。如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂。避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂。在溶剂瓶中的溶

2、剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡1小时，用水冲洗，但不要使用超声处理。1流动相第2页/共73页名称乙酸丙酮乙睛苯丁醇四氯化碳氯仿环己烷环戊烷二氯乙烷二氯甲烷二甲基甲酰胺二甲基亚砜二氧六乙酸乙酯乙醇乙醚庚烷正己烷甲醇甲乙酮1-辛烷戊烷1-丙醇三氯乙烷四氢呋喃甲苯乙酸AcetoneAcetonitrileBenzeneCarbon TetChloroformCyclopentaneButyl AlcoholCyclohexaneDichloroethaneCH Cl 2 2DMFDMSODioxanEthylacetateEthyl AlcoholDi-Ethylethe

3、rHeptaneHexaneMethyl AlcoholMEKI-OctanePentaneI-Propyl AlcoholDi-PropyletherC H 2 2 Cl 4 THFTolueneTrichloroethaneWaterXylene三氯甲烷水二甲苯2-丙醚ImmiscibleMiscible溶剂的相溶性第3页/共73页溶剂信息溶剂信息避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：l卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。l高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。l能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。l含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。l在有机溶剂中的有机酸溶液。l含有强络合剂的溶液。l

4、四氯化碳和异丙醇或THF混合液。第4页/共73页溶剂截止波长溶 剂UV截止波长（nm）乙 睛190水190环 己 烷195己 烷200甲 醇210乙 醇210乙 醚220二氯甲烷220氯 仿240四氯化碳265四氢呋喃280（220）甲 苯285所以在使用紫外检测器时，所用波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。在使用紫外检测器时，所用波长与所用溶剂的截止波长接近（或低于截止波长）时，容易产生噪音干扰，从而影响检测结果。第5页/共73页生色团和最大吸收波长生色团分子式实 例最大吸收波长（nm）羰基（酮）RRC=O丙酮271羰基醛RHC=O乙醛293羧基RCOOH醋酸271酰胺RCONH2

5、乙酰胺208次乙基RCH=CHR乙烯193亚次乙基RC=CR乙炔173睛RC=N乙睛160硝基RNO2硝基甲烷271溶剂、PH、温度等都会影响生色团的最大吸收峰的强度和位置。第6页/共73页溶剂过滤溶剂过滤不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：l使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。l用滤膜过滤溶剂去除微生物。用滤膜过滤溶剂去除微生物。l每两天更换或过滤溶剂。每两天更换或过滤溶剂。l避免溶剂瓶直接日照。避免溶剂瓶直接日照。l向溶剂中加入向溶剂中加入0.0001-0.001M的叠的叠氮化钠。氮化钠。

6、第7页/共73页选择合适的滤膜聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋白质和其相关的样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。注意：1，每张滤膜只能用一次。2，水相和有机相不要搞混。第8页/共73页柱塞清洗附件SealWashHPLC使用缓冲溶液Buffer时，由于缓冲盐溶液存在高压盐析现象，析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封垫，从而造成漏液等故障现象，因而建议选配柱塞清洗附件Se

7、alWash。缓冲盐浓度大于0.01mol时，强烈建议选配在线的柱塞清洗附件SealWash。清洗液配置：90%水+10%异丙醇溶液，流速为2-3滴/min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。清洗液虹吸流出，不能干涸。第9页/共73页目的脱气方法：氦气脱气回流加热脱气真空脱气超声脱气排除溶解在流动相中的氧气和氮气 2 脱气机第10页/共73页阻尼器/压力传感器泵驱动溶剂瓶梯度比例阀主动输入阀AV出口球阀BOV清洗阀Purge Valve柱塞杆Piston3泵第11页/共73页二元泵工作原理二元泵工作原理DamperPurge valveMixerABInlet valveOutlet

8、valveWasteInlet valveOutlet valve第12页/共73页泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂的相容性；6，尽可能使用新鲜的水；7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，在0200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。四元泵：四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在下面通道，以避免盐颗粒析出。二元泵：设置压缩因子补偿，以达到最佳比例效果。第13页/共73页样

9、品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小4 进样器第14页/共73页六通阀手动进样阀-六通阀ToWasteSample Loop(Fixed Volume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFrom PumpTo Waste手动进样器第15页/共73页样品要干净、经过过滤。合适的进样体积，比如定量环为20ul，进样体积应为010ul，或者20ul，进样20ul时注射样品量应至少60ul以上。定期清洗进样阀，清洗过程如下：1，将进样阀旋至Inject位置；2，用带

10、有专用头的注射器用纯水约2030ml冲洗进样阀；3，将进样阀旋至Load位置。参考左图。手动进样器第16页/共73页自动进样器Metering device6-port valveSampling unitFrom pumpTo columnTo waste准备位置准备位置调用样品瓶调用样品瓶吸样品吸样品进样和运行位置进样和运行位置标准进样过程 .第17页/共73页自动进样器样品要干净、经过过滤。l洗针：把样品残留降低洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。不要加瓶垫。l多次吸液多次吸液用于进样量大于用于进样量大于

11、100100ulul第18页/共73页预柱和保护柱从泵来的 流动相预柱进样口保护柱分析柱至检测器预柱是针对流动相来保护色谱柱 保护柱是针对样品来保护色谱柱5 色谱柱色谱柱第19页/共73页色谱柱保护色谱柱保护 过滤所有的溶剂和样品过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。柱子在不使用时，两端密封保存柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的注意色谱柱的pHpH值使用范围值使用范围 不要高压冲洗柱子不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合

12、相不要高温下过长时间使用硅胶键合相第20页/共73页色谱柱的再生进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-41.6ml30ml250-43.2ml60ml250-10-20ml400ml请根据下表选择您的再生方法：极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水*非极性固定相（如反相色谱填料RP18，RP8，CN等）的再生：水乙腈氯仿（或异丙醇）乙腈水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水

13、洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。*如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。第21页/共73页6检测器VWD的光源氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命。流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。更换氘灯。第22页/共73页能引起能引起HPLCHPLC发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素:工作环境电源及地线流动相泵进样器保护柱在线过滤器连接管路色谱柱检测器数据处理装置操作二、液相色

14、谱仪故障分析第23页/共73页逻辑判断及处理问题问题 化学品 环境 机器*色谱柱/保护柱*电源 *泵*溶液*地线 *进样器*样品*温度 *检测器*湿度 *数据处理单元*清洁程度第24页/共73页液相色谱仪器出现故障可以从多方面入手1.从部件的运转情况推测，如压力、流速的变化2.从色谱图的异常情况推测，如出峰时间、峰形3.从数据结果中分析第25页/共73页流动相内含有空气-脱气处理检测池内有气泡-冲洗检测池或在检测池出口接一段内径0.009“的管子(此法只适用于耐压检测器!)色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱.系统有漏液之处-检漏并处理电噪声-去除噪声源,信号线屏蔽,检查系统接地状况检测器光源

15、灯能量低-更换光源灯检测池污染-冲洗检测池典型故障分析及实例基线噪声基线噪声第26页/共73页基线周期性噪声基线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡 -流动相脱气 ,泵头排气(注意正确的排气方法)泵进出口阀有问题 -更换阀组件柱塞杆有问题 -更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良 -加装混合器电噪声 -去除噪声源第27页/共73页非周期性噪声非周期性噪声气泡-流动相脱气检测池内有气泡-流动相脱气,检测池后加适当反压系统有漏液之处-检漏并处理溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源第28页/共73页基线漂移基线漂移梯度系统-溶剂A于溶剂B的ABS值相差大-试用另种溶剂或使用基线扣除法

16、色谱柱有其他组份被洗脱出-冲洗,直至基线稳定溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处-检漏并处理环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)-室温,柱温,检测池温度控制反压变化-溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品第29页/共73页基线周期性波动基线周期性波动温度影响-环境温度及检测池温度控制.注意空调机的 影响溶剂混合不良-加装混合器流动相脱气不良-流动相脱气供电电源的影响 泵不良-检修处理 第30页/共73页基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰气泡-溶剂脱气电路接触不良-保证清洁,接线牢固,接点无氧 化光源灯不良-

17、检查处理电噪声-去除噪声源第31页/共73页无样品峰无样品峰未进样 泵未工作漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应 第32页/共73页负峰负峰负峰负峰组份的组份的ABSABS值小于溶剂的值小于溶剂的ABSABS值值气泡通过了检测池气泡通过了检测池对对RIRI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的检测器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负峰所有峰都是负峰 -可能是检测器输出与数据单元连线可能是检测器输出与数据单元连线 极性接反极性接反第33页/共73页峰形

18、不好峰形不好峰形不好峰形不好 -如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾,峰分叉峰分叉峰分叉峰分叉,出肩膀出肩膀出肩膀出肩膀在线过滤器在线过滤器(IN LINE FILTER)(IN LINE FILTER)污染污染 (通常会伴随有系统压力升高之现象通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染色谱柱污染系统有不正常的死体积系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确检查管路连接是否正确-内径内径,接头接头保护柱保护柱(GUARD COLUMN)(GUARD COLUMN)污染污染溶剂不好或使用不对溶剂不好或使用不对样品不好样品不好色谱柱坏了色谱柱坏了-*PH 2 PH 8 8 会破坏柱子内的填料会破坏柱子

19、内的填料 *流速变化率太大流速变化率太大-操作上应注意操作上应注意 第34页/共73页两个要点两个要点两个要点两个要点-峰保留时间峰保留时间峰保留时间峰保留时间(RT)(RT)(RT)(RT)重现性重现性重现性重现性,峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性峰面积重现性RTRTRTRT重现性不好重现性不好 -无规律变化无规律变化 :*:*流量不稳流量不稳 -气泡气泡,漏液漏液,泵泵 *温度影响温度影响 有规律的变化有规律的变化,且逐渐趋于稳定且逐渐趋于稳定 :系统未充分平衡系统未充分平衡 RT RT RT RT 重现性好重现性好,但峰面积重现性不好但峰面积重现性不好 -*进样量进样量-选用定量管进

20、样时选用定量管进样时,进样进样 体积应大于体积应大于3 3倍定量管容积倍定量管容积;*样品样品,气泡气泡;*样品在流动相各组份中不能充分样品在流动相各组份中不能充分 溶解溶解(通常伴随有柱压逐渐升高通常伴随有柱压逐渐升高 且经反冲后且经反冲后,柱压会恢复正常之现柱压会恢复正常之现 象象););*基线噪声的影响基线噪声的影响;*积分处理的影响积分处理的影响;系统性能：重复性差系统性能：重复性差第35页/共73页常见故障分析列表：一.从压力变化判断1.压力无现象判断故障排除面版灯不亮电源不通检查电源接头松脱拧紧接头泵头漏液接口太松拧紧泵头螺丝泵密封垫磨损更换密封垫第36页/共73页现象判断故障排除

21、泵不送溶剂泵头有气泡排气泡，溶剂需脱气使用的溶剂黏性太高换低黏性溶剂溶剂贮液器中过滤器脏清洗贮液瓶、过滤器，排空阀打开关闭排空阀控制器设定不正确设置正确流动相不够补足流动相第37页/共73页现象判断故障排除压力值高泵流速设定太高设定正确的流速流动相使用不恰当使用恰当的流动相缓冲结晶盐沉淀冲洗样品与流动相不互溶稀释或改变流动相柱温太低升高温度色谱柱性能下降换柱2.压力高第38页/共73页现象判断故障排除压力值高溶剂贮液器中过滤器脏清洗链接管路阻塞冲洗，必要时更换进样阀阻塞冲洗进样器第39页/共73页现象判断故障排除压力值低泵流速设定太低设定正确的流速色谱柱选择不恰当更换恰当的色谱柱柱温过高降低柱

22、温系统漏液检查漏液位置并维修流动相使用不当改变流动相3.压力低第40页/共73页4.压力不稳现象判断故障排除压力变化重现性好采用梯度所引起的压力是正常泵内有气泡溶剂脱气不适当排气泡，溶剂需脱气压力波动泵密封垫损坏更换密封垫溶剂混合器故障清洗或更换混合器漏液连接口太松拧紧接口管路损坏更换第41页/共73页1.峰前沿现象判断故障排除峰前沿柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度二、从色谱图的异常情况推测第42页/共73页2.峰拖尾现象判断故障排除峰拖尾柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择

23、恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相第43页/共73页3.峰变宽现象判断故障排除峰变宽柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相流动相流速太低调节流速第44页/共73页现象判断故障排除峰变宽缓冲液浓度太低增加浓度系统没到达平衡使系统到达平衡进样器问题检查进样器环境温度变化使用柱温箱漏夜检查漏夜的位置并维修出现两个或多个未被完全分离的物质的峰选择其它色谱条件以改善分离效果检测器时间常数太大使用较小的时间常数第45页/共73页4.峰分叉现象判断故障排除峰分叉柱性能下降更换色普柱保护柱失效换柱芯

24、色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度样品溶剂不溶流动相改变溶剂或采用流动相溶解样品第46页/共73页5.无峰现象判断故障排除无峰检测器参数设置错误设置正确的检测器参数样品降解检查样品配制过程，更换样品自动进样器故障检查进样器无样品加样品检测器与数据处理装置链接故障检查并正确链接第47页/共73页6.负峰现象判断故障排除出现所有负峰连接数据处理系统信号线接反正确连接记录仪或检测器信号极性相反改变极性设置出现一个或几个负峰离子对分离体系对峰的影响在流动相中溶解样品使用的流动相吸收高使用流动相稀释样品自动进样器注射进空气清洗自动进样器第4

25、8页/共73页7.鬼峰现象判断故障排除色谱图出现鬼峰样品前处理时产生降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品前一次进样的洗脱物增加分析时间或梯度洗脱、提高流速、如问题仍存在，两次进样间用强溶剂冲洗色谱柱注射器脏清洗注射器、冲洗进样口第49页/共73页现象判断故障排除色谱图出现鬼峰流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂柱被污染清洗柱或更换柱六通阀污染清洗六通阀检测器污染清晰检测器管路污染冲洗流动相中含有稳定剂或稳定剂变化使用无防腐溶剂第50页/共73页8.保留时间变化现象判断故障排除保留时间不重复系统不问或未达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温波

26、动大使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱被污染冲洗柱或更换柱溶剂配比不合适调节溶剂配比进样体积太大或样品浓度太高减小进样体积第51页/共73页9.保留时间不断变化现象判断故障排除保留时间不断变化流速变化重新设定流速,检查泵 是否正常工作系统没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡柱被污染冲洗柱或更换柱流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂系统泄漏检查并进行维修第52页/共73页现象判断故障排除保留时间不断变化流动相脱气不够充分清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂 室温变化使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱恒温箱设置有误设置

27、正确的温度第53页/共73页10.基线漂移现象判断故障排除基线漂移系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温不稳使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂流动相脱气不充分脱气重新平衡系统第54页/共73页现象判断故障排除基线漂移流动相配比不当或流速变化更改配比或流速柱被污染冲洗柱或更换柱固定相流失为说明问题存在，用一段连接管路代替色谱柱，通流动相检测基线检测池被污染或有气体用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池第55页/共73页现象判断故障排除基线漂移测定的波长选择有误使用分光光度计说明背景吸收，如背景值高，说

28、明流动相含有紫外吸收化合物导致基线漂移。使用的流动相应在紫外截止波长以外，或更换溶剂系统泄漏检查并进行维修样品中有强保留的物质用强度合适的溶剂清洗色谱柱第56页/共73页现象判断故障排除无规则基线噪音系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡系统泄漏检查并进行维修流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂柱被污染冲洗柱或更换柱色谱柱填料流失或阻塞更换色谱柱11.无规则基线噪音第57页/共73页现象判断故障排除无规则基线噪音流动相混合不均或混合器工作不正常维修或更换混合器检测池被污染或用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池系统内有气泡用强极性的溶剂清洗系统检测

29、器内有气泡清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器检测器灯能量不足更换灯第58页/共73页12.规则基线噪音现象判断故障排除规则基线噪音流动相、检测器或泵内有气泡流动相脱气，冲洗系统除去检测器或泵内的空气室温不稳稳定环境温度。使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相回收使用除非特殊需要不使用回收溶剂流动相混合不完全使流动相混合均匀或使用低黏度的溶剂第59页/共73页现象判断故障排除规则基线噪音泵振动在系统中假如脉冲阻尼器泵入口管路松或阻塞检查泵入口管路在同一水平上有其他设备关掉仪器，检查干扰是否来自于外部第60页/共73页三、从数据结果中分析1.定量结果现象判断故障排除精密度降低样

30、品预处理时样品降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品保留时间改变，峰形不正常见“峰形不正常”的故障排除方法检测器响应故障检查检测器第61页/共73页现象判断故障排除精密度降低峰积分不正确重新设置参数进样问题（对外标法）随手动进样器的类型不同而异，有下列情况：（1）如使用全部定量环的手动进样器，在进样前需在“取样”状态下清洗三次；（2）如使用部分定量环的手动进样器，进样量需少于定量唤体积的50%第62页/共73页现象判断故障排除精密度降低进样问题（对外标法）（3）如使用注射器的手动进样器，需确保进样操作重复；（4）如使用自动进样器需确保正确的进样体积，注射器不含空气，样品瓶有足够

31、的样品，系统不泄漏（5）如手动进样器、自动进样器都使用，应确保系统的平衡第63页/共73页现象判断故障排除准确度降低峰积分不正确见“精密度降低”的故障排除方法进样问题见“精密度降低”的故障排除方法样品预处理时样品降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品样品蒸发样品密封保存在适当的温度下第64页/共73页现象判断故障排除准确度降低样品前处理不当检查样品的处理过程内标物配置不当配置新的内标物第65页/共73页现象判断故障排除峰不能分辨改变保留时间见“保留时间改变”的故障排除数据处理装置的参数不正确适当输入参数，进标准样，提高准确度无峰改变保留时间故障排除方法数据处理装置的参数不正确重

32、新适当输入参数，进标准样，提高准确度鬼峰见“鬼峰”可能的原因见“鬼峰”的故障排除方法2.定性结果第66页/共73页想一想想一想,看一看看一看:1.1.HPLCHPLC系统中各机器是否开机正常系统中各机器是否开机正常2.2.溶剂瓶内溶剂是否新鲜且脱气溶剂瓶内溶剂是否新鲜且脱气3.3.泵是否已初始化且工作正常泵是否已初始化且工作正常4.4.系统管路及电路是否连接正常系统管路及电路是否连接正常5.5.检测器是否通过自检且工作正常检测器是否通过自检且工作正常6.6.溶剂瓶会不会产生负压溶剂瓶会不会产生负压7.7.溶剂的溶剂的PHPH值是否合适值是否合适8.8.对温度敏感的检测器是否被阳光直射或被空调直

33、吹对温度敏感的检测器是否被阳光直射或被空调直吹9.9.溶剂瓶是否被阳光直射溶剂瓶是否被阳光直射10.10.停机前是否将系统及柱子中的缓冲液置换干净停机前是否将系统及柱子中的缓冲液置换干净11.11.较长时间停机之前是否将柱子摘下较长时间停机之前是否将柱子摘下,且系统最后用甲醇冲洗过且系统最后用甲醇冲洗过(系系统不能在缓冲液或统不能在缓冲液或THFTHF下长时间停机下长时间停机)12.12.样品是否能完好的溶于流动相样品是否能完好的溶于流动相13.13.所选用的过滤膜是否正确所选用的过滤膜是否正确14.14.若用若用7725i7725i进样器进样器,所用的进样针是否正确所用的进样针是否正确第67

34、页/共73页切忌切忌:示差示差/荧光检测器的出口管堵塞荧光检测器的出口管堵塞 直接用甲醇置换缓冲液直接用甲醇置换缓冲液 进的样品会在流动相中产生沉淀进的样品会在流动相中产生沉淀 用水溶性滤膜过滤有机溶剂用水溶性滤膜过滤有机溶剂 溶剂溶剂,特别是缓冲液撒漏在机器内特别是缓冲液撒漏在机器内 流速变化率太大流速变化率太大 高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵 阳光直射溶剂瓶或检测器阳光直射溶剂瓶或检测器 空调直吹检测器空调直吹检测器 溶剂瓶完全密封溶剂瓶完全密封第68页/共73页液相色谱仪(hplc)的保养1HPLC的日常操作条件：温度：1030；相对湿度80；最好是

35、恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。2泵的保养：1)使用流动相尽量要清洁；2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3)流动相交换时要防止沉淀；4)避免泵内堵塞或有气泡;3进样器的保养：1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；4柱的保养：1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3)要注意流动相的脱气；4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5)进样样品要提纯；6)严格控制进样量；7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；

36、5检测器(UV)的保养：1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。2)样品池要保养。第69页/共73页HPLC的正确使用和科学保养1、保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。2、定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。3、使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02m滤膜过滤）。对流动相一定要脱气。4、每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。5、珍惜

37、保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。6、采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰形变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。7、避免超负荷进样，对2504.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100g。在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措之一。第70页/共73页8、经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇-二氯甲烷（1：1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗

38、，时间均不少于1h。9、做完试验，及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀，尤其是对过夜的柱子和进样阀，一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液，再用甲醇或乙腈冲洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。10、以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。11、尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。12、对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。13、色

39、谱仪检测器输出与积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来，使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。14、用HPLC分析酸碱性物质，由于吸附作用（次级保留）使峰开拖尾。加入改良剂可以大大改善峰形，提高积分的准确度。一般规则是：（1）分析酸性物质，可加入1%有醋酸。（2）分析碱性物质，可加入10-20mmol/L三乙胺。（3）酸碱物质混为一体，可同时加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺。第71页/共73页谢谢大家！光棍节快乐！山东德士嘉科技有限公司赵广义2011.11.11第72页/共73页谢谢您的观看！第73页/共73页