自然科学GB涉及微生物常规检测技术.pptx

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1、GB/T 4789.1-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 总则总则GB/T 4789.2-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 菌落总数测定菌落总数测定GB/T 4789.3-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数大肠菌群计数GB/T 4789.4-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验沙门氏菌检验第1页/共92页GB/T 4789.7-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验副溶血性弧菌检验GB/T 4789.8-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验小肠

2、结肠炎耶尔森氏菌检验GB/T 4789.9-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 空肠弯曲菌检验空肠弯曲菌检验GB/T 4789.10-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验第2页/共92页GB/T 4789.27-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 鲜乳中抗生素残留检验鲜乳中抗生素残留检验GB/T 4789.30-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB/T 4789.34-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 双歧杆菌检验双歧杆菌检验GB/

3、T 4789.35-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 食品中乳酸菌检验食品中乳酸菌检验第3页/共92页GB/T 4789.36-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 大肠埃大肠埃希氏菌希氏菌O157:H7/NM检验检验GB/T 4789.37-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 金黄色金黄色葡萄球菌计数葡萄球菌计数GB/T 4789.38-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 大肠杆大肠杆菌计数菌计数GB/T 4789.39-2008食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 粪大肠粪大肠菌群计数菌群计数GB/T 4789.40-2008食品

4、卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 阪崎肠阪崎肠杆菌检验杆菌检验第4页/共92页菌落总数测定菌落总数测定大肠菌群计数大肠菌群计数霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数第5页/共92页沙门氏菌检验沙门氏菌检验志贺氏菌检验志贺氏菌检验副溶血弧菌检验副溶血弧菌检验金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验第6页/共92页试验器材准备试验器材准备样品处理和接种样品处理和接种增菌培养增菌培养选择性分离平板分离培养选择性分离平板分离培养挑选菌落并进行生化试验挑选菌落并进行生化试验生化结果及血清学试验生化结果及血清学试验初步判断初步判断第7页/共92页试验器材准备试验器材准备玻璃器皿清洁玻璃器皿清洁新购的器皿：流水冲

5、洗新购的器皿：流水冲洗1 12%2%（工业用）盐酸浸泡（工业用）盐酸浸泡2 26h 6h 流水冲洗流水冲洗用过的器皿：直接清洗；高压灭菌后清洗用过的器皿：直接清洗；高压灭菌后清洗第8页/共92页试验器材准备试验器材准备消毒和灭菌消毒和灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌法湿热灭菌：高压蒸汽灭菌法适用于耐热的物品适用于耐热的物品干热灭菌：干烤箱干热灭菌：干烤箱适用于在高温下不损坏、不变质、不蒸发的物品适用于在高温下不损坏、不变质、不蒸发的物品（160170持续持续2h）第9页/共92页试验器材准备试验器材准备过滤除菌：滤器过滤除菌：滤器适用于对温度不耐受的某些添加物适用于对温度不耐受的某些添加物紫外线：紫

6、外线：200-275nm，250-270nm；10m2无菌室需装无菌室需装30w紫外灯紫外灯1只（距台面只（距台面1m）第10页/共92页试验器材准备试验器材准备J高压蒸汽灭菌效果测定：高压蒸汽灭菌效果测定：留点温度计测试法：留点温度计测试法：160，50化学指示剂测试法：化学指示剂测试法：OK试纸试纸微生物学测试法：可直接取得灭菌效果的数微生物学测试法：可直接取得灭菌效果的数据，是最可靠的方法据，是最可靠的方法嗜热脂肪芽胞杆菌芽嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞菌片（每片含胞菌片（每片含1-5106），溴甲酚紫葡萄），溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水糖蛋白胨水第11页/共92页试验器材准备试验器材准备J紫外线消毒要

7、求：紫外线消毒要求：保持灯管无尘保持灯管无尘定期用酒精棉球擦拭紫外线定期用酒精棉球擦拭紫外线辐射强度不低于辐射强度不低于70w/cm2，照射时间，照射时间25min 经常检测紫外线强度。紫外线强经常检测紫外线强度。紫外线强度仪度仪使用时间使用时间1000h时时定期更换灯管定期更换灯管第12页/共92页菌落总数测定菌落总数测定定义：食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、定义：食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pHpH、需氧性质等），、需氧性质等），所得所得1mL1mL（或（或1g1g）检样中形成菌落的总数）检样中形成菌落的总数第13

8、页/共92页菌落总数测定菌落总数测定只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数落总数不包括厌氧菌、微需氧菌和嗜冷菌及有特殊营养要求的菌不包括厌氧菌、微需氧菌和嗜冷菌及有特殊营养要求的菌第14页/共92页菌落总数测定菌落总数测定计算公式：计算公式：N=C/（n1+0.1n2）dN-样品中菌落数；样品中菌落数；C-平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；之和；n1-第一个适宜稀释度平板上的菌落数；第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2-第二个适宜稀释度平板上的菌落数；第二

9、个适宜稀释度平板上的菌落数；d-稀释因子（第一稀释度）稀释因子（第一稀释度）第15页/共92页菌落总数测定菌落总数测定-涂布法涂布法第16页/共92页大肠菌群计数大肠菌群计数定义定义大肠菌群：一群在大肠菌群：一群在36条件下培养条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。最可能数（最可能数（MPN）：基于泊松分布的一种间接计数方法）：基于泊松分布的一种间接计数方法第17页/共92页埃希菌属埃希菌属柠檬酸杆菌属柠檬酸杆菌属肠杆菌属肠杆菌属克雷伯菌属克雷伯菌属第18页/共92页大肠菌群计数大肠菌群计数MPNMP

10、N检索表检索表MPNMPN值：表示样品中活菌密度的估测数，是细菌密度的估计值值：表示样品中活菌密度的估测数，是细菌密度的估计值MPNMPN测定的最理想结果应是最低稀释度的全部管为阳性，最高稀释度的全部测定的最理想结果应是最低稀释度的全部管为阳性，最高稀释度的全部管为阴性管为阴性第19页/共92页大肠菌群计数大肠菌群计数检索表为检索表为1010倍稀释，设倍稀释，设3 3个稀释度：当按个稀释度：当按1010倍加大或减少接种量时，所得结倍加大或减少接种量时，所得结果按表内数值相应降低或增加果按表内数值相应降低或增加1010倍倍当怀疑水样有严重污染时，可用当怀疑水样有严重污染时，可用1010倍稀释系列

11、接种倍稀释系列接种3 3个以上稀释度个以上稀释度应做到应做到最高稀释度至少有最高稀释度至少有1 1管阴性管阴性第20页/共92页表表:不同稀释样品确定不同稀释样品确定MPNMPN所需乘积倍数举所需乘积倍数举例例实实例例阳性反应管数阳性反应管数选择编码选择编码结果结果确定确定MPN乘积倍数乘积倍数51ml50.1ml50.01ml50.001ml50.0001ml1552005-2-01002554105-4-11003530005-3-0104555315-3-110005010000-1-010第21页/共92页大肠菌群计数大肠菌群计数当从表上查不到所得到的阳性管组合时，最好是重新检测或查阅

12、更完整的当从表上查不到所得到的阳性管组合时，最好是重新检测或查阅更完整的MPNMPN检索检索表表表内所列阳性管组合是最为常见的，出现机率为表内所列阳性管组合是最为常见的，出现机率为99%99%以上，未列出的阳性组合，以上，未列出的阳性组合，其总数不到其总数不到1%1%第22页/共92页大肠菌群计数大肠菌群计数MPNMPN法还可用于测定食品中其它细菌，如沙门菌、粪链球菌、亚硫酸盐还原菌等法还可用于测定食品中其它细菌，如沙门菌、粪链球菌、亚硫酸盐还原菌等须选用适合其生物特性的须选用适合其生物特性的选择性培养基选择性培养基第23页/共92页霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数培养时间：培养时间：3d开始

13、，开始，5d结束结束培养温度：培养温度：2528计数方法：选择菌落数在计数方法：选择菌落数在10150之间的平皿计数之间的平皿计数第24页/共92页霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数J生长特征生长特征 霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延沿培养基表面蔓延第25页/共92页霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无

14、色，中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色基内菌丝褐色第26页/共92页霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落第27页/共92页霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚只是比细菌菌落大且厚液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜 第28页/共92页肠杆菌科、弧菌

15、科及金葡菌检测肠杆菌科、弧菌科及金葡菌检测培养特性观察培养特性观察形态结构观察形态结构观察生理生化试验生理生化试验血清学试验血清学试验第29页/共92页平板划线分离平板划线分离第30页/共92页培养特性观察培养特性观察固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基菌落大小菌落大小形态形态颜色（色素是水溶性还是脂溶性）颜色（色素是水溶性还是脂溶性）光泽度光泽度透明度透明度质地质地隆起形状隆起形状边缘特征及迁移性等边缘特征及迁移性等表面生长情况表面生长情况（菌膜、环）（菌膜、环）混浊度混浊度沉淀沉淀色素色素运动运动扩散扩散第31页/共92页培养特性观察培养特性观察第32页/共92

16、页1.铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌2.2.志贺氏菌志贺氏菌 3.3.枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 第33页/共92页形态结构观察形态结构观察 染色特性染色特性形状形状大小大小排列方式排列方式细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）第34页/共92页革兰染色革兰染色J革兰染色法是革兰染色法是18841884年由丹麦病理学家年由丹麦病理学家C.GramC.Gram所创立的。革兰染色法可将所所创立的。革兰染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+G+）和革兰氏阴性菌（）和革兰氏阴性菌（G-G-）两大类，是细）两大类

17、，是细菌学上最常用的鉴别染色法。菌学上最常用的鉴别染色法。第35页/共92页革兰染色革兰染色G-G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸复红复染后就成红色复红复染后就成红色第36页/共92页革兰染色革兰染色G+G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量

18、少，经脱色剂处理后反菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色第37页/共92页革兰染色革兰染色第38页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌TSI：-/+赖氨酸脱羧酶：赖氨酸脱羧酶：+靛基质：靛基质：-（如为（如为+则需甘露醇则需甘露醇+山梨醇山梨醇+）尿素（尿素（pH7.2）：）：-KCN：-第39页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌J三糖铁（三糖铁（TSITSI）试验）试验 肠道杆菌科为革兰氏阴性菌，可发酵葡萄糖产

19、酸。三糖铁琼脂试验是利用糖类发酵的不同与硫化氢产生与肠道杆菌科为革兰氏阴性菌，可发酵葡萄糖产酸。三糖铁琼脂试验是利用糖类发酵的不同与硫化氢产生与否，将肠道杆菌科各组细菌或各菌属加以初步区分否，将肠道杆菌科各组细菌或各菌属加以初步区分第40页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线接种，培养使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线接种，培养18-2418-24小时小时第41页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌第42页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌三糖铁琼脂斜面培养基含有三糖铁琼脂斜面培养基含有11乳糖及蔗

20、糖与乳糖及蔗糖与0.10.1葡萄糖作为发酵基质，葡萄糖作为发酵基质，且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵。且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵。第43页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌斜面碱性（红色斜面碱性（红色-）底部酸性（黄色）底部酸性（黄色+）产气或不产气（）产气或不产气（或或-产气时会造成产气时会造成琼脂裂开）：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养琼脂裂开）：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养基变黄基变黄第44页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌但因葡萄糖含量低，

21、斜面上产生的微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产但因葡萄糖含量低，斜面上产生的微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱，培养基底部则因氧张力较小，且微生物生长较慢，故仍维持酸性反应碱，培养基底部则因氧张力较小，且微生物生长较慢，故仍维持酸性反应第45页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌斜面酸性（黄色斜面酸性（黄色+）底部酸性（黄色）底部酸性（黄色+）产气或不产气（）产气或不产气（或或-）：表示除了葡萄糖发酵外，乳糖与：表示除了葡萄糖发酵外，乳糖与（或）蔗糖也发酵。由于乳糖与蔗糖浓度高，经继续发酵，可维持培养基斜面与底部保持酸性

22、反应。（或）蔗糖也发酵。由于乳糖与蔗糖浓度高，经继续发酵，可维持培养基斜面与底部保持酸性反应。第46页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌斜面碱性（红色斜面碱性（红色-）底部碱性（红色）底部碱性（红色-）或无变化（橘红色）：表示无糖类）或无变化（橘红色）：表示无糖类发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨，而使培养基呈碱发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨，而使培养基呈碱性反应，如有氧与厌氧均发生蛋白质分解，则斜面与底部均呈碱性反应性反应，如有氧与厌氧均发生蛋白质分解，则斜面与底部均呈碱性反应第47页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌 三糖

23、铁琼脂培养基中含有硫代三糖铁琼脂培养基中含有硫代硫酸钠作为产生硫化氢的基质，硫酸钠作为产生硫化氢的基质，且含硫酸亚铁作为检测此无色且含硫酸亚铁作为检测此无色产物之指示剂，若微生物有硫产物之指示剂，若微生物有硫化氢产生，会与亚铁离子作用化氢产生，会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀，生成不溶性硫化亚铁之沉淀，进而使培养基变黑进而使培养基变黑培养基变黑培养基变黑第48页/共92页斜面红色，底面黄色斜面红色，底面黄色制好的培制好的培养基养基培养基全黄色培养基全黄色斜面、底部斜面、底部黄色，并产黄色，并产生生H H2 2S S斜面红色，底部黄斜面红色，底部黄色，产生色，产生H H2 2S S底面黄

24、色，并产生底面黄色，并产生COCO2 2对照管对照管第49页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌为使结果准确，应于接种培养为使结果准确，应于接种培养18-2418-24小时内观察结果，以确保糖类尚未用尽，小时内观察结果，以确保糖类尚未用尽，且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。第50页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌J赖氨酸脱羧酶试验赖氨酸脱羧酶试验原理：细菌（如阴沟肠杆菌）含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类原理：细菌（如阴沟肠杆菌）含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行。当培养基含胺类时

25、呈碱性反应，和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行。当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。使指示剂变色。第51页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌接种：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封液体石蜡，对照管与接种：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封液体石蜡，对照管与测定管同时接种封油。肠杆菌科的细菌于测定管同时接种封油。肠杆菌科的细菌于3737培养培养4 4天观察天观察结果：阳性结果：阳性-先黄色后变为紫色或带红色调的紫色；阴性先黄色后变为紫色或带红色调的紫色；阴性-黄色；对照管黄色；对照管-黄黄色色第52页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌第53

26、页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌J靛基质（吲哚）试验靛基质（吲哚）试验原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质，与对二甲氨基苯甲醛作用，原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质，与对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈色生成玫瑰吲哚而呈色结果：阴性（液面黄）；阳性（液面玫瑰红）结果：阴性（液面黄）；阳性（液面玫瑰红）第54页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌第55页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌J尿素酶试验尿素酶试验原理：细菌产生尿素酶，将尿素分解、产生原理：细菌产生尿素酶，将尿素分解、产生2 2个分子的氨，使培养基变为碱个分子

27、的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。其活性最适性，酚红呈粉红色。其活性最适pHpH为为7.27.2结果：阴性结果：阴性-黄；阳性黄；阳性-红红第56页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌第57页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌J氰化钾试验氰化钾试验 原理：原理：KCNKCN可抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过可抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶以铁卟啉作为辅基，氧化氢酶和过氧化物酶以铁卟啉作为辅基，KCNKCN能与铁卟啉结合使这些酶失能与铁卟啉结合使这些酶失去活性从而抑制细菌的生长去活性从而抑制细

28、菌的生长第58页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌结果：浑浊（未抑制）结果：浑浊（未抑制）+；清亮（抑制）清亮（抑制）-接种时注意菌量不宜过多接种时注意菌量不宜过多注意：氰化钾是剧毒药品，操作时必须小心。培养基用毕，每管加几粒硫注意：氰化钾是剧毒药品，操作时必须小心。培养基用毕，每管加几粒硫酸亚铁和酸亚铁和0.5mL200.5mL20KOHKOH以解毒，然后清洗以解毒，然后清洗第59页/共92页生理生化试验生理生化试验-沙门氏菌沙门氏菌意义：当培养基中意义：当培养基中KCN含量为含量为1：13300或或1：10000时，肠杆菌科中沙时，肠杆菌科中沙门氏菌、志贺氏菌和大肠埃希菌

29、的生长受到抑制而其他菌大多能生长门氏菌、志贺氏菌和大肠埃希菌的生长受到抑制而其他菌大多能生长第60页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌TSI：-/+-葡萄糖半固体：动力葡萄糖半固体：动力-葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、赖氨酸脱羧酶、尿素、葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、赖氨酸脱羧酶、尿素、KCN、水杨苷和七叶、水杨苷和七叶苷：苷：-第61页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌J葡萄糖铵利用葡萄糖铵利用原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼克酸和某些氨基酸作为生长因子时，可以在葡萄糖铵原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼克酸和某些氨基酸作为生长因子时，可

30、以在葡萄糖铵培养基上生长。培养基上生长。第62页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌结果：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落结果：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落意义意义大肠埃希菌可利用铵盐作为唯一氮源，且不需要尼克酸作为生长因子大肠埃希菌可利用铵盐作为唯一氮源，且不需要尼克酸作为生长因子-生长生长第63页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌志贺菌属可利用铵盐作为唯一氮源，但需要尼克酸作为生长因子志贺菌属可利用铵盐作为唯一氮源，但需要尼克酸作为生长因子-不生长不生长变形杆菌和摩根氏菌属不能利用铵盐作为

31、唯一氮源，补给尼克酸也不能生变形杆菌和摩根氏菌属不能利用铵盐作为唯一氮源，补给尼克酸也不能生长长-不生长不生长第64页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌J西蒙氏柠檬酸盐利用西蒙氏柠檬酸盐利用原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时利用柠檬酸盐为唯一碳源原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时利用柠檬酸盐为唯一碳源时，可以在葡萄糖铵培养基上生长。细菌生长时，分解柠檬酸生成碳酸盐，时，可以在葡萄糖铵培养基上生长。细菌生长时，分解柠檬酸生成碳酸盐，使培养基变碱使培养基变碱第65页/共92页生理生化试验生理生化试验-志贺氏菌志贺氏菌结果：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色

32、，阴性者不生长结果：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长意义意义肠杆菌科中大肠埃希菌属、志贺氏菌属、爱德华氏菌属和摩根氏菌属均为肠杆菌科中大肠埃希菌属、志贺氏菌属、爱德华氏菌属和摩根氏菌属均为阴性阴性其它菌属多为阳性其它菌属多为阳性第66页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌J3.5%氯化钠氯化钠TSI：-/+-J氧化酶试验：氧化酶试验：+J革兰氏染色：革兰氏染色：-，棒状、弧状、卵原状等多形态，无芽胞，有鞭毛，棒状、弧状、卵原状等多形态，无芽胞，有鞭毛第67页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌J嗜盐试验：在无氯化钠和嗜盐试

33、验：在无氯化钠和10%氯氯化钠胰胨水不生长或微弱生长，在化钠胰胨水不生长或微弱生长，在7%氯化钠胰胨水生长良好氯化钠胰胨水生长良好第68页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌氧化酶试验氧化酶试验 氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素酶先使细胞色素C C氧化，然后此氧化型细胞色素氧化，然后此氧化型细胞色素C C再使对苯二胺氧化，产生再使对苯二胺氧化，产生颜色反应颜色反应第69页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌注意：注意：盐酸二甲基对苯二胺溶

34、液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如盐酸二甲基对苯二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。溶液变为红褐色，即不宜使用。第70页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌铁、镍铬丝等金属可催化盐酸二甲基对苯二胺呈红色反应，若用它来挑取铁、镍铬丝等金属可催化盐酸二甲基对苯二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔第71页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜

35、，如滤纸过湿，会防碍空气与菌在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性意义：是区分肠杆菌科细菌和弧菌科细菌的重要试验意义：是区分肠杆菌科细菌和弧菌科细菌的重要试验第72页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌J嗜盐试验嗜盐试验观察渗透压对细菌生长的影响。由于不同菌类耐盐性不同，故常以此作为观察渗透压对细菌生长的影响。由于不同菌类耐盐性不同，故常以此作为鉴别特征。鉴别特征。第73页/共92页生理生化试验生理生化试验-副溶血性弧菌副溶血性弧菌一般可根据不同种类的菌株，选择其适合生

36、长的培养基，在其中加入不同量的一般可根据不同种类的菌株，选择其适合生长的培养基，在其中加入不同量的NaClNaCl，接种后观察其生长与，接种后观察其生长与否，以判断其耐盐性否，以判断其耐盐性注意：接种的细菌量不宜过多注意：接种的细菌量不宜过多第74页/共92页生理生化试验生理生化试验-金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板平板血浆凝固酶试验：血浆凝固酶试验：+过氧化氢酶试验：过氧化氢酶试验：+第75页/共92页生理生化试验生理生化试验-金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌J过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验 过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解为水和氧。过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧

37、化氢分解为水和氧。试剂：试剂：3 3过氧化氢溶液（过氧化氢溶液（H H2 2O O2 2）第76页/共92页生理生化试验生理生化试验-金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌注意：过氧化氢酶是注意：过氧化氢酶是1 1种以正铁血红素作为辅基的酶，所以测试菌所生长的种以正铁血红素作为辅基的酶，所以测试菌所生长的培养基不可含有血红素或红血球。培养基不可含有血红素或红血球。第77页/共92页血清学试验血清学试验 J血清学反应：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见血清学反应：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。的沉淀、凝集现象。第78页/共92页血清学试验血清学试验

38、J血清学反应的特点血清学反应的特点 抗原抗体的结合具有特异性，当有共同抗原存在时，会出现交叉反应抗原抗体的结合具有特异性，当有共同抗原存在时，会出现交叉反应抗原抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的抗原抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的第79页/共92页血清学试验血清学试验抗原抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反抗原抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应应第80页/共92页血清学试验血清学试验J血清学反应的两个阶段血清学反应的两个阶段第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即

39、可完毕，但不出现肉眼可第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象见现象第81页/共92页血清学试验血清学试验第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，电解质、电解质、PHPH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。第82页/共92页血清学试验血清学试验J方法方法

40、凝集反应凝集反应 补体结合反应补体结合反应 沉淀反应沉淀反应 第83页/共92页血清学试验血清学试验J凝集反应：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所凝集反应：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原称为凝集原，抗体称为形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。凝集素。第84页/共92页血清学试验血清学试验直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应凝集反应第85页/共92页血

41、清学试验血清学试验直接凝集反应分为直接凝集反应分为玻片凝集法：是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型玻片凝集法：是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型第86页/共92页血清学试验血清学试验如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。第87页/共92

42、页血清学试验血清学试验试管凝集法：是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及试管凝集法：是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。第88页/共92页血清学试验血清学试验如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。因为要测定抗体的含量，故将如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，3737或或5656，2 24 4小时观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价小时观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价 第89页/共92页血清学试验血清学试验J血清凝集强度记录血清凝集强度记录+-第90页/共92页谢谢！谢谢！第91页/共92页感谢您的观看！第92页/共92页