药敏试验及药敏试验结果分析.pptx
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1、一、药敏试验MIC:在与微生物生长速率有关的特定时间间隔内,通常是1824小时,能够抑制被测菌生长的最低药物浓度。对倍稀释的优点:操作容易敏感株的MIC呈正态分布区分异常(R)与敏感(S)的菌群第1页/共84页药敏试验折点的建立 1.MIC的分布2.药代动力学和药效学定MIC的折点3.临床疗效和细菌清除率4.抑菌圈直径的分布定抑菌圈折点统计学的线性回归计算错误率:尽可能减少极重要误差(假敏感率)第2页/共84页MIC的分布第3页/共84页药代动力学和药效学药代动力学:药物吸收,分布,代谢,排泄药效学:药物对机体的作用时间依赖型(TMIC:内酰胺类,大环内酯类浓度依赖型(AUC/MIC比率:AG
2、S,FQ这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案第4页/共84页MIC与抑菌圈直径的线性关系耐药 中介 敏感RISLog2.MICD 1 d2 抑菌圈直径(mm)v第5页/共84页抑菌圈直径与MIC的关系第6页/共84页不同国家的判定折点可能不同原因:用药剂量不同,服药的间隔不同评价敏感时较保守更强调检测出耐药株(即特定的耐药群)技术因素:接种、培养基第7页/共84页敏感性分类(NCCLS的定义)敏感(Susceptible)用常规用量治疗有效常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC5倍以上。耐药(Resistance)用常规用量治疗不能抑制细菌的生长MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓
3、度第8页/共84页敏感性分类(2)中介(Intermediate)MIC接近血、体液中药物的浓度,治疗反应率低于敏感株药物生理浓集部位有效(尿FQ)加大用药剂量可能有效缓冲区:防止操作的系统误差造成重大结果的判定错误第9页/共84页药敏试验的方法学半定量纸片扩散法(抑菌圈直径)MIC法:稀释法(肉汤、琼脂)自动化仪法抗生素连续梯度法(Etest)流式细胞仪第10页/共84页药敏试验方法的选择纸片法有独特之处选药灵活、便宜、易懂MIC法:商品肉汤法(自动化法)可用于厌氧菌、苛氧菌计算机管理快速,但可能有错误(如诱导型菌)新药的评价第11页/共84页药敏试验方法1(纸片扩散法材料:浸有一定Abs的
4、干燥的园滤纸片步骤:制备菌悬液涂平板贴纸片孵育卡尺测量抑菌圈直径判定R、I、S优点:选药灵活、便宜、一个平皿可测多个药缺点:影响因素多适用于快生长菌、部分苛养菌第12页/共84页纸片扩散法影响因素MIC接种菌量细菌生长率抗生素含量、扩散性平皿厚度温度,预孵育时间第13页/共84页纸片扩散法标准化NCCLS:美国实验室标准化委员会(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards)每年修订更改包括质控新药的判定标准特殊耐药性的检测第14页/共84页NCCLS的法规规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判定标准、质控规定常规测试报告的抗生素不同的药
5、判定标准不同不同的菌判定标准也不同第15页/共84页常规测试并报告的药物分组(1)肠杆菌科绿脓和非肠杆菌科一级氨苄头孢他啶唑林,庆大庆大,替卡,哌拉二级阿米卡星阿米卡星氨苄/舒,阿莫/克吡肟,哌酮,氨曲南头孢肤肟,头霉环丙,亚胺培南,替卡/克噻肟,曲松,环丙妥布,磺胺亚胺培南,替卡,哌拉三级氨曲南,头孢他啶头孢曲松卡那,奈替,妥布氯霉素,奈替四环素,氯霉素第16页/共84页常规测试并报告的药物分组(2)葡萄球菌肠球菌一级苯唑,青霉素青霉素,氨苄二级红霉素类万古霉素克林,万古三级氯霉素庆大第17页/共84页常规测试并报告的药物分组(3)流感嗜血杆菌肺炎链球菌一级氨苄,青霉素青霉素,红霉素TMP/
6、SMZTMP/SMZ二级头孢肤肟,噻肟氧氟,四环素他啶,氯霉素万古霉素三级阿奇,头孢克罗氯霉素,利福平环丙,亚胺培南利福平,四环素第18页/共84页预报用药(一)测试药菌名推测其它药物的敏感性苯唑西林 葡萄球菌所有内酰胺类四环素所有(除葡多西环素,米诺环素萄球菌和不动杆菌红霉素G球菌罗红,克拉,阿奇克林霉素 所有林可霉素第19页/共84页预报用药(二)测试药菌名推测其它药物的敏感性氨苄西林肠球菌青霉素青霉素G葡萄球菌氨苄,美洛,替卡头孢噻吩肠杆菌科拉定,头孢氨苄,克罗奈啶酸s肠杆菌科所有FQs万古霉素s所有替考拉宁s第20页/共84页纸片扩散法操作规程(一)培养基:MH(重复性好,低抑制剂,营
7、养好)厚度:4mmPH:7.27.4pH低时,氨基糖甙,大环内酯pH高时,青霉素类的活性离子浓度(Ca2+,Mg2+)影响氨基糖甙类、四环素对Pae活性高时,抑菌圈;第21页/共84页纸片扩散法操作规程(二)接种:纯的新鲜菌落,0.5号麦氏比浊管菌悬液在15分钟内种入平皿内纸片中心的间距=24mm孵育:CO2影响Ags,Tet,Macrolides质控:ATCC25922,35218ATCC27853,ATCC25923第22页/共84页纸片扩散法结果的判定1.先看菌名(鉴定到种2.不同的药物使用不同的折点药名菌名RS菌株1菌株2Pip/Taz绿脓171816R30SCAZ绿脓141816I1
8、9S3.同是S时,偏离敏感折点越高的药,MIC越低,活性也越高第23页/共84页抑菌圈的分布第24页/共84页抑菌圈的分布第25页/共84页非NCCLS系统的扩散试验方法国家学会培养基评论比较法 UKBSACIso-Sensitest 不校正MICsStokesUKBSACIso-Sensitest 不校正MICsSFM法国SFMMH与NCCLS相近DIN德国DINMH与NCCLS相近SIR瑞典SMSPDMASM MIC相关值低Neo-sensitabs丹麦、比利时MH药片,易保存双歧澳大利亚Sensitest无中介第26页/共84页药敏试验的错误来源(一)每个系统特有的局限性(快生长菌培养基
9、(成分、厚度、pH、离子浓度)各种材料的正确保存(纸片20)操作步骤纯菌、35、1628h葡萄球菌、肠球菌24h第27页/共84页药敏试验的错误来源(二)体内、体外试验的不一致性某些菌测某些药,结果有误头孢菌素、氨基糖甙类:沙门菌、志贺菌头孢菌素:李斯特菌属头孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ:肠球菌Beta内酰胺类:MRS即使敏感,也应报告耐药第28页/共84页问题菌和耐药机制有些菌无标准化的药敏试验棒杆菌、芽胞杆菌、气单胞菌、巴斯德菌某些耐药机制需要多种检测方法诱导型:VanB,BushI型酶MRS的异质型表达ESBL药敏可能无法检出新出现的耐药,VISA第29页/共84页药敏试验方法2
10、肉汤稀释法 4 816 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清抗生素倍比稀释,种菌105CFU/ml,孵育35,16-20h,判读第30页/共84页药敏试验方法2肉汤稀释法调节离子浓度的MH肉汤宏量肉汤法(2ml,13x100mm)微量肉汤法(0.1ml,微量板)自动化仪优点:准确,可靠,可用于研究缺点:劳动强度大细菌生长情况不可查第31页/共84页药敏试验方法3琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128 256 ug/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板,制备菌悬液,点种菌,104/每个点,孵育,判读结果第32页/共84页药敏试验方法3琼脂稀释法优点:金标准精确可靠可同时测定多株
11、菌(40株)细菌生长情况可查缺点:测多个药时劳动强度大制备平皿费时费力第33页/共84页药敏试验方法4E test 法 细菌生长区E test 塑料条椭圆形细菌生长抑制区256128 8016判读抑菌浓度(MIC ug/ml)第34页/共84页药敏试验方法4E test 法优点连续浓度梯度,与琼脂稀释法相关性好影响因素少,稳定性高操作简单,省时缺点:昂贵用途:快生长菌,苛养菌,厌氧菌,酵母菌,分枝杆菌第35页/共84页评价药物体外抗菌活性的指标MIC50,MIC90,MIC均值,MIC范围,R,I,SMIC50/MIC90:MIC从小到排列,位于第50/90百分位菌株的MIC值单纯比较MIC5
12、0,MIC90是片面的,还要同时看平均MIC及MIC范围同时结合R,I,S,(不同药物血浓度不同,安全范围不同第36页/共84页抗生素细 菌人 体 RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDE EFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、细菌、人体第37页/共84页第38页/共84页Slideno39Time above MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC(susceptibility)of an organism Time above MICTimeAntibiotic
13、 concentration(ug/ml)2Drug ADrug BABDrug A present at concentration of 2 ug/ml for 50%of dosing intervalDrug B present at concentration of 2 ug/ml for 30%of dosing interval4680第39页/共84页Relationship between Time above MIC and efficacy in animal infection models020406080100020406080100Time above MIC(%
14、)PenicillinsCephalosporinsMortality after 4 days of therapy(%)Craig.Diagn Microbiol Infect Dis 1996;25:213217第40页/共84页Slideno41Antibiotic concentrationMIC TimeArea under the curve over MIC24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection,the magnitude required for success and MIC at which this o
15、ccurs becomes the PD breakpoint 24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC(susceptibility)of an organism 第41页/共84页Slideno42The relationship between time above MIC90and bacteriological cure in S.pneumoniae(red)andH.influenzae(blue)in otitis media and sinusitisOtitis mediaSinusitisTim
16、e Above MIC(%of dosing interval)Bacteriological cure(%)020406080100020406080100Craig,ECCMID 2000,Stockholm,Sweden第42页/共84页抗生素选择时需考虑的因素药物感染部位浓度对细菌MIC结果微生物学抗菌机制抗菌谱药代动力学吸收、分布、代谢、排泄给药方案药效学时间/浓度依赖型杀菌剂/抑菌剂组织渗透抗菌时效临床效果细菌清除患者依从性耐受性耐药产生第43页/共84页抗生素治疗失败的主要原因病人相关原因病人相关原因依从性差依从性差不适当给药途径不适当给药途径免疫抑制免疫抑制病灶病灶药物原因药物
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