细菌生化实验课件.ppt

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1、实 验 十 细菌生化实验一、实验目的一、实验目的1 1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。说明不同微生物有着不同的酶系统。2 2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。3 3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。4 4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。5 5、了解、了解IMViCIMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意与硫化氢反应的原理及其

2、在肠道菌鉴定中的意义和方法。义和方法。二、实验原理二、实验原理1 1、微生物对生物大分子的分解利用、微生物对生物大分子的分解利用淀粉水解：淀粉酶油脂水解：脂肪酶明胶液化：蛋白酶石蕊牛乳试验：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。2 2、糖发酵试验、糖发酵试验产酸：溴甲酚紫指示剂大肠杆菌：产气肠杆菌：产气：杜氏小管检测大肠杆菌：产气肠杆菌：3 3、IMViCIMViC试验试验三、实验材料三、实验材料1 1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（假单胞菌（Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aerugi

3、nosa），普通变形杆菌（），普通变形杆菌（Proteus Proteus vularisvularis），产气肠杆菌。），产气肠杆菌。2 2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各管和乳糖发酵培养基试管各3 3支，普通变形杆菌（内装有倒支，普通变形杆菌（内装有倒置的德汉氏小管）置的德汉氏小管），蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。养基

4、，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。3 3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugols iodine Lugols iodine solutionsolution），甲基红指示剂，），甲基红指示剂，40%KOH40%KOH，5%-5%-萘酚，乙醚，萘酚，乙醚，吲哚试剂等。吲哚试剂等。4 4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。试管架。四、实验步骤四、实验步骤1 1、细菌水解大分子物质试验、细菌水解大分子物质试验n 淀粉水解试验培养基：淀粉培养基平板菌种：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌方

5、法：平板上划“十”字接种注意：接种前在平板底部作记号；“十”字不要太大n 油脂水解试验培养基：油脂培养基平板菌种：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌方法：平板上划折线接种注意：接种前在平板底部作记号n 明胶液化试验培养基：试管明胶培养基菌种：大肠杆菌或 产气肠杆菌方法：穿刺接种注意：20培养n 石蕊牛乳试验培养基：试管石蕊牛乳培养基（2支）菌种：粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌方法：斜面划线接种注意：观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。四、实验步骤四、实验步骤1 1、细菌水解大分子物质试验、细菌水解大分子物质试验2 2、糖发酵试验、糖发酵试验培养基：葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基（内装杜氏

6、小管）（各3支）菌种：大肠杆菌和产气肠杆菌方法：分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基四、实验步骤四、实验步骤1 1、细菌水解大分子物质试验、细菌水解大分子物质试验2 2、糖发酵试验、糖发酵试验3 3、IMViCIMViC试验试验五、实验报告五、实验报告1 1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“”表示表示阳性，阳性，“”表示阴性。表示阴性。2 2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以发酵试验结果。以“+”“+”表示产酸或产气，表示产酸或产气，“”表示不产酸或不产气。表示不产酸或不产气。3 3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，以以“+”“+”表示阳性反应。表示阳性反应。“”表示阴性反应。表示阴性反应。4 4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？