药品检验用菌种的传代和保藏.pptx

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1、会计学1药品检验用菌种的传代和保藏药品检验用菌种的传代和保藏2菌种的定义及其与各应用领域的关系菌种的定义及其与各应用领域的关系菌种的定义及其与各应用领域的关系菌种的定义及其与各应用领域的关系n n菌种泛指从自然界获取的各种微生物的不同的种。n n医学领域研究菌种主要考虑其致病机理n n工业生产研究菌种主要考虑其发酵机理n n药品微生物检验主要考虑其标准性 第1页/共55页3标准菌种的概念及其管理标准菌种的概念及其管理标准菌种的概念及其管理标准菌种的概念及其管理n n标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。n n我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CC

2、CCMCCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCCCMCC）提供第2页/共55页4标准菌种的保藏形式标准菌种的保藏形式 我国提供的标准菌种通常是以冻干粉的形式包装于熔封的厚玻璃容器中。在这种容器中，微生物通常与赋形剂共存，由于缺乏生长必须的环境条件，一般呈休眠状态。第3页/共55页5纯培养纯培养 所谓微生物的纯培养是指在一个微生物的菌落形成单位中，所有的微生物细胞或孢子都属于生物学的同一个种。严格地说，纯培养是在培养基上由一个细胞或孢子分裂、繁殖而产生的后代。在该细胞或孢子的生长过程种，不受其他微生物的侵犯，不会在培养物中产生另外微生物种的后代，在整个生长过

3、程中不发生变异或死亡。第4页/共55页6获取纯培养的工作环境获取纯培养的工作环境1、洁净工作室：环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内，全过程必须无菌操作，防止微生物污染。2、无菌隔离舱第5页/共55页7获取纯培养的接种工具获取纯培养的接种工具1、接种环2、接种针3、接种铲4、接种钩5、其他玻璃器械第6页/共55页8获取纯培养的其他器具获取纯培养的其他器具1、玻璃器皿：如各种规格培养皿。2、微生物实验室常用的设备，如高压灭菌锅、恒温培养箱等第7页/共55页9获取纯培养的主要技术移植（又称接种）获取纯培养的主要技术移植（又称接种）获取纯培养的主要技术移植（又称接种）获取纯培养的

4、主要技术移植（又称接种）微生物的移植（或称接种）是指将微生物接种在培养基上的操作。第8页/共55页10移植（又称接种）的两种方式划线移植（又称接种）的两种方式划线移植（又称接种）的两种方式划线移植（又称接种）的两种方式划线 和穿刺和穿刺和穿刺和穿刺 1、划线法是指用接种工具将微生物细胞移植在固体培养基斜面或平板上的一种方法。2、穿刺法是指用接种工具将微生物细胞移植到固体或半固体培养基内的一种方法。第9页/共55页11影响集菌培养效果的若干因素影响集菌培养效果的若干因素影响集菌培养效果的若干因素影响集菌培养效果的若干因素n n温度n n渗透压n n氧气n n光n npH值和氧化还原电位n n培养

5、基n n抗生素第10页/共55页12验证纯培养的主要依据验证纯培养的主要依据1 1、用显微镜观察时，全部的生物个体是相似的，如果是细菌，对革、用显微镜观察时，全部的生物个体是相似的，如果是细菌，对革兰氏染色反应应当是一致的。兰氏染色反应应当是一致的。2 2、将培养物制成悬液，重新倾注平板，或平板划线培养后，所形成、将培养物制成悬液，重新倾注平板，或平板划线培养后，所形成的全部菌落的形态应该是相似的。如果是细菌，将重新形成的菌的全部菌落的形态应该是相似的。如果是细菌，将重新形成的菌落各作穿刺培养，其培养特征应当是一致的。落各作穿刺培养，其培养特征应当是一致的。3 3、从重新分离的各菌落作生理特征

6、观测时，如对氮源的利用，对糖、从重新分离的各菌落作生理特征观测时，如对氮源的利用，对糖类的发酵或同化以及其他生理生化的测定，应呈现出一致性。类的发酵或同化以及其他生理生化的测定，应呈现出一致性。第11页/共55页13定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法 一般步骤为：将菌种接种在所要求的培养基上，置最适温度下集菌培养。得到健壮的菌体（如有性孢子、无性孢子或细胞等）后，放于温度较低、干燥处保藏，并且每隔一定时间重新移植培养一次。第12页/共55页14定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法1 1、细菌置、细菌置4 46 6保藏，芽孢杆菌每保藏，芽孢杆菌每3 36

7、 6个月移植一次，其他细菌每个月移植一次，其他细菌每月移植一次。月移植一次。2 2、放线菌于、放线菌于4 46 6保藏，每保藏，每3 3个月移植一次。个月移植一次。3 3、酵母菌于、酵母菌于4 46 6保藏，每保藏，每4 46 6个月移植一次。个月移植一次。4 4、丝状真菌于、丝状真菌于4 46 6保藏，每保藏，每3 3个月移植一次。个月移植一次。5 5、担子菌于、担子菌于4 46 6保藏，每保藏，每3 3个月移植一次。个月移植一次。6 6、保藏的湿度通常在、保藏的湿度通常在50507070为宜。为宜。第13页/共55页15定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法定期移植保藏法1、需定期检查

8、2、移植进行时，应仔细核对3、集菌培养完成后，应比较培养特征4、应注意观察各代之间的变化第14页/共55页16琼脂斜面低温保藏法琼脂斜面低温保藏法1 1、菌种的典型菌落接种至斜面，规定的温度和、菌种的典型菌落接种至斜面，规定的温度和时间培养，充分生长，硅胶塞换成无菌橡胶塞。时间培养，充分生长，硅胶塞换成无菌橡胶塞。4 46 6 冰箱保藏冰箱保藏a:1a:13 3个月移植一次，继续保藏。个月移植一次，继续保藏。b:b:用半固体高层培养基穿刺培养，可保藏半年至一年。用半固体高层培养基穿刺培养，可保藏半年至一年。第15页/共55页17琼脂斜面低温保藏法琼脂斜面低温保藏法n n适用细菌、霉菌、酵母菌及

9、放线菌保藏n n优点：简便、大多数微生物适用n n缺点：保藏期短；传代次数多；容易发生变异及污染。n n生孢梭菌用硫乙醇酸盐培养基、乙型溶血性链球菌及肺炎球菌用血肉汤（琼脂）培养基第16页/共55页18液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法 一般步骤为：准备液体石蜡并灭菌去水备用。获得需要保藏菌种的纯培养，将液体石蜡注入培养容器中，并完全覆盖培养基。液体石蜡液面以高出培养基上端0.51cm为宜 46 冰箱保藏冰箱保藏第17页/共55页19液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法n n确保保藏环境的干燥，避免长霉。n n使用此法保藏的菌种时应特别注意防止微生物外

10、溅污染。n n该法对酵母菌的保藏最为有效，对大多数细菌保藏效果一般。第18页/共55页20甘油冷冻保藏法甘油冷冻保藏法n n将保藏菌种接种琼脂斜面上，适宜温度下培养适宜时间，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦使菌种充分扩散到无菌水中，调证菌液浓度，向已制备好的菌悬液加入等体积的20无菌甘油，轻轻振试管管，使内容物充分混合，分装于无菌小管。甘油冷冻管最好在-30 贮存。贮存。第19页/共55页21沙管保藏法沙管保藏法沙管保藏法沙管保藏法n n制备沙管制备沙管n n培养接种培养接种n n制备菌悬液制备菌悬液n n混菌混菌n n干燥干燥n n保藏保藏n n适合保藏芽孢杆菌、

11、梭菌、放线菌和一些丝状真菌。适合保藏芽孢杆菌、梭菌、放线菌和一些丝状真菌。第20页/共55页22土壤保藏法土壤保藏法土壤保藏法土壤保藏法n n用土壤替代沙管保藏法中的河沙，其余操作与沙管保藏法相同n n适合保藏土壤细菌、放线菌和丝状真菌，时间为26年。第21页/共55页23硅胶保藏法硅胶保藏法n n用硅胶替代沙管保藏法中的河沙，其余操作与沙管保藏法相同n n适合保藏酵母菌和某些丝状真菌 第22页/共55页24滤纸保藏法滤纸保藏法n n保藏微生物细胞或孢子的载体为滤纸。n n对细菌、酵母菌、丝状真菌等都有一定的效果，有些菌种最长可达17年。第23页/共55页25明胶片保藏法明胶片保藏法n n制备

12、无菌营养明胶制备无菌营养明胶n n制备无菌石蜡滤纸制备无菌石蜡滤纸n n微生物培养并制成浓厚的悬液微生物培养并制成浓厚的悬液n n在悬液中加入营养明胶在悬液中加入营养明胶n n将含微生物细胞或孢子的营养明胶滴于石蜡滤纸表面将含微生物细胞或孢子的营养明胶滴于石蜡滤纸表面n n干燥干燥n n将形成的明胶片密封保藏将形成的明胶片密封保藏第24页/共55页26麸皮保藏法麸皮保藏法n n我国历史悠久的微生物保藏法n n适于保藏根霉、曲霉、青霉、红曲霉等属和赤霉菌 第25页/共55页27梭氏真空干燥保藏法梭氏真空干燥保藏法n n在小试管中放置菌悬液n n小试管在大试管中放置n n大试管在真空状态下干燥n

13、n密封大试管第26页/共55页28液体直接干燥保藏法液体直接干燥保藏法n n需要加入保护剂n n干燥之前不需冻结n n在干燥过程中为增大蒸发面积，可加入多孔材料n n干燥后的容器应熔封第27页/共55页29蒸馏水保藏法蒸馏水保藏法n n最为简便的微生物保藏法n n微生物细胞或孢子保藏在蒸馏水中n n保藏的容器应密封n n适于保藏棒状杆菌、土壤杆菌和假单孢菌等 第28页/共55页30液氮冰箱超低温保藏法液氮冰箱超低温保藏法n n需专用设备液氮超低温冰箱n n菌悬液密封于安瓿管内，控速冻结n n国外已普遍采用n n保藏时间长第29页/共55页31冻结真空干燥保藏法冻结真空干燥保藏法n n历史悠久，

14、又称冻干法n n不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用该法n n适用面广n n保藏时间可达10年以上n n多为菌种保藏机构采用第30页/共55页32冻结真空干燥保藏法冻结真空干燥保藏法n n密封性好，可避免保藏期间的污染n n保藏容器体积小，方便携带和贮藏n n保藏时间更长，变异概率更低第31页/共55页33普通微生物实验室适用的保藏技术普通微生物实验室适用的保藏技术n n琼脂斜面低温保藏法琼脂斜面低温保藏法n n液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法n n低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法n n甘油冷冻保藏法甘油冷冻保藏法第32页/共55页34琼脂斜面低温琼脂斜面低温保藏法保藏法保藏法保藏法n n细菌置细

15、菌置4 46 6保藏，芽孢杆菌每保藏，芽孢杆菌每3 36 6个月移植一次，其他细菌每个月移植一次，其他细菌每月移植一次。月移植一次。n n放线菌于放线菌于4 46 6保藏，每保藏，每3 3个月移植一次。个月移植一次。n n酵母菌于酵母菌于4 46 6保藏，每保藏，每4 46 6个月移植一次。个月移植一次。n n丝状真菌于丝状真菌于4 46 6保藏，每保藏，每4 4个月移植一次。个月移植一次。n n担子菌于担子菌于4 46 6保藏，每保藏，每3 3个月移植一次。个月移植一次。n n保藏的湿度通常在保藏的湿度通常在50507070为宜。为宜。第33页/共55页35菌种保藏的一般规定菌种保藏的一般规

16、定1 1、菌种、菌种“代代”的确定：的确定：20052005版药典规定，以干燥菌种管为第版药典规定，以干燥菌种管为第“0 0”代，由此得到代，由此得到的第一批子代为第一代，以此类推。的第一批子代为第一代，以此类推。2 2、菌种传代次数规定：、菌种传代次数规定：20052005版药典规定不超过版药典规定不超过5 5代。代。3 3、菌种应专人保藏、专柜贮藏，认真做好登记，统一编号，按期传代，并做好、菌种应专人保藏、专柜贮藏，认真做好登记，统一编号，按期传代，并做好有关检验记录。有关检验记录。4 4、保存菌种传代或冻干均应填写专用记录，菌种管上应有标签，表明菌种编号、保存菌种传代或冻干均应填写专用记

17、录，菌种管上应有标签，表明菌种编号、代次、批号、日期。代次、批号、日期。5 5、过期菌种应及时处理、登记，经、过期菌种应及时处理、登记，经121 121 3030分钟灭菌消毒。分钟灭菌消毒。第34页/共55页36实验室菌种传代操作步骤实验室菌种传代操作步骤n n1 1、接种前用、接种前用1 1：10001000新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外灯消毒新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外灯消毒3030分钟。分钟。n n2 2、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置2020分钟；温度平衡后才能传代。分钟；温度平衡后才能传代。n n3 3、实验人员进入缓冲间，换鞋、穿无菌衣

18、、戴口罩，用、实验人员进入缓冲间，换鞋、穿无菌衣、戴口罩，用1 1：10001000新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及菌种移入阳性菌接种室。菌种移入阳性菌接种室。n n4 4、点燃酒精灯，将菌种管塞子，通过火焰转动使稍稍松动，以免接种时粘着打不开。、点燃酒精灯，将菌种管塞子，通过火焰转动使稍稍松动，以免接种时粘着打不开。n n5 5、接种操作：左手拿住菌种管，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒，将白金耳烧红约、接种操作：左手拿住菌种管，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒，将白金耳烧红约3030秒，杆部通过秒，杆部通过火焰灭菌。挑取少量菌苔；另取火焰灭菌。挑取少量菌苔；

19、另取，照上述方法在火焰旁打开塞子，将白金耳伸入管内斜面培养基的底部，从下到上将白金，照上述方法在火焰旁打开塞子，将白金耳伸入管内斜面培养基的底部，从下到上将白金耳轻贴斜面培养基的表面作曲折移动。耳轻贴斜面培养基的表面作曲折移动。n n5 5、接种后，将斜面置规定温度、时间培养。取出观察，菌种生长良好，换橡皮塞，贴上标签，放入冰、接种后，将斜面置规定温度、时间培养。取出观察，菌种生长良好，换橡皮塞，贴上标签，放入冰箱保存。箱保存。n n6 6、细菌一个月传代一次，枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉可三个月传、细菌一个月传代一次，枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠

20、菌、黑曲霉可三个月传代一次。代一次。第35页/共55页37菌种管理菌种管理n n1 1、标准菌种必须从认可的菌种收集途经获得；实验室必须建立和保存所有菌、标准菌种必须从认可的菌种收集途经获得；实验室必须建立和保存所有菌种的收集、贮藏、保存、种的收集、贮藏、保存、确认试验的记录。确认试验的记录。n n2 2、实验室应有文件管理标准菌种（从原始菌种到工作用菌种）。该程序应包、实验室应有文件管理标准菌种（从原始菌种到工作用菌种）。该程序应包括：括：a:a:标准菌种必须定期传代，并做确认试验，包括实验室在所需要关键诊断指标，标准菌种必须定期传代，并做确认试验，包括实验室在所需要关键诊断指标，实验室必须

21、记录并保存。实验室必须记录并保存。b b：每一子菌种都应以适当标签、标记来表示名称、标准号、接种日期和传代日：每一子菌种都应以适当标签、标记来表示名称、标准号、接种日期和传代日期。期。C:C:每一子菌种都应以标记每一子菌种都应以标记从原始菌种传代到工作用菌种的代数；记录菌种生长的培养从原始菌种传代到工作用菌种的代数；记录菌种生长的培养基及培养条件；菌种生存条件等。基及培养条件；菌种生存条件等。第36页/共55页38过期菌种处理过期菌种处理n n过期菌种应及时清理、登记，并经121、3030分钟高压消毒灭菌。分钟高压消毒灭菌。第37页/共55页39例例1：金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌传代保藏技

22、术传代保藏技术传代保藏技术传代保藏技术n n1 1、购置金黄色葡萄球菌（如我所提供的菌种为第二代菌种），假定购置日期、购置金黄色葡萄球菌（如我所提供的菌种为第二代菌种），假定购置日期为为5 5月月2121日。日。n n2 2、准备、准备1010支营养琼脂斜面，其中支营养琼脂斜面，其中2 2支用于保藏，其余支用于保藏，其余8 8支用于当月实验。支用于当月实验。n n3 3、于、于5 5月月2222日打开菌种管，接种菌种至上述日打开菌种管，接种菌种至上述1010支斜面，支斜面，35 35 培养培养16161818小时。小时。n n4 4、将、将1010支第三代菌种管做好标签，置适宜温度保藏。支第三

23、代菌种管做好标签，置适宜温度保藏。n n5 5、5 5月月2222日至日至6 6月月2222日，可以使用上述第三代菌种管。日，可以使用上述第三代菌种管。n n6 6、至、至6 6月月2222日，重复步骤日，重复步骤2 2，得第四代菌种管。，得第四代菌种管。n n7 7、至、至8 8月月2222日前，重新日前，重新购置原种管。购置原种管。第38页/共55页40例例2：黑曲霉的传代技术：黑曲霉的传代技术n n1 1、制备孢子悬液：取灭菌水或生理盐水、制备孢子悬液：取灭菌水或生理盐水3 35ml5ml，分，分2 23 3次小心滴次小心滴加至菌种管内（试管斜面），反复振摇。倾取孢子悬液置另一灭加至菌种

24、管内（试管斜面），反复振摇。倾取孢子悬液置另一灭菌试管。菌试管。n n2 2、涂布接种：用灭菌滴管吸取悬液滴加至改良马丁琼脂培养基斜、涂布接种：用灭菌滴管吸取悬液滴加至改良马丁琼脂培养基斜面，每管滴加面，每管滴加2 23 3滴，转动试管，使悬液与斜面表面充分接触滴，转动试管，使悬液与斜面表面充分接触第39页/共55页41菌种确认试验菌种确认试验n n包括以下几个方面：包括以下几个方面：1 1、菌落生长情况：目测、菌落生长情况：目测2 2、染色镜检：、染色镜检：3 3、生化试验；、生化试验；(1)(1)糖醇代谢试验糖醇代谢试验 （2 2）氨基酸和蛋白质代谢试验）氨基酸和蛋白质代谢试验 （3 3）

25、碳源和氮源利用试验）碳源和氮源利用试验 （4 4）酶类试验）酶类试验 （5 5）其他试验）其他试验第40页/共55页42短小芽孢杆菌短小芽孢杆菌确认该菌未发生变异的主要方法为：1、通过显微鉴别，为不呈链状排列的杆菌，革兰氏染色为阳性。2、营养琼脂斜面上菌苔光滑，薄，闪光，蔓延，不粘着，常常是浅黄色。3、生化试验可选做明胶穿刺、淀粉水解和硝酸盐还原，结果为明胶缓慢液化，淀粉水解阴性，硝酸盐还原阴性。第41页/共55页43枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌确认该菌未发生变异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为呈链状排列的杆菌，不形成荚膜，革兰氏染色、通过显微鉴别，为呈链状排

26、列的杆菌，不形成荚膜，革兰氏染色为阳性。为阳性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔生长丰厚，粗糙，不透明，不闪光，蜡质，生长丰厚，粗糙，不透明，不闪光，蜡质，蔓延，奶油色至微褐色。蔓延，奶油色至微褐色。3 3、生化试验可选做明胶穿刺、淀粉水解和硝酸盐还原，结果明胶呈、生化试验可选做明胶穿刺、淀粉水解和硝酸盐还原，结果明胶呈漏斗形至层状液化，淀粉水解阳性，硝酸盐还原阳性。漏斗形至层状液化，淀粉水解阳性，硝酸盐还原阳性。第42页/共55页44大肠埃希菌大肠埃希菌确认该菌未发生变异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为成对和呈短链排列的近球形的杆菌，一般不

27、形、通过显微鉴别，为成对和呈短链排列的近球形的杆菌，一般不形成荚膜，革兰氏染色为阴性。成荚膜，革兰氏染色为阴性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔通常白色，有时带黄白色，湿润，闪光，蔓通常白色，有时带黄白色，湿润，闪光，蔓延生长。延生长。3 3、生化试验可选做明胶穿刺和靛基质试验、甲基红试验、生化试验可选做明胶穿刺和靛基质试验、甲基红试验、V.P.V.P.试验和试验和柠檬酸盐利用试验，结果不液化明胶，靛基质试验和甲基红试验柠檬酸盐利用试验，结果不液化明胶，靛基质试验和甲基红试验阳性，阳性，V.P.V.P.和柠檬酸盐利用试验阴性。和柠檬酸盐利用试验阴性。第43页/共55页45大肠埃希

28、菌大肠埃希菌 该菌为微生物限度检查规定不得检出的控制菌，有一整套完整的鉴定手段，也可参考该方法用于判断所保藏的菌种有无发生变异。该鉴定方法主要内容即为经典的IMViC试验，结果为+-。第44页/共55页46铜绿假单孢菌铜绿假单孢菌确认该菌未发生变异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为、通过显微鉴别，为单个，成对或呈短链单个，成对或呈短链排列的杆菌，有运动性，排列的杆菌，有运动性，革兰氏染色为阴性。革兰氏染色为阴性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔生长旺盛，薄，白色，闪光，培养基变为绿生长旺盛，薄，白色，闪光，培养基变为绿色至暗褐色或黑色，发荧光。

29、色至暗褐色或黑色，发荧光。3 3、生化试验可选做明胶穿刺、吲哚和硝酸盐还原试验，结果迅速液、生化试验可选做明胶穿刺、吲哚和硝酸盐还原试验，结果迅速液化明胶，化明胶，液体呈浅黄绿色或浅蓝绿色，液体呈浅黄绿色或浅蓝绿色，吲哚试验阴性，硝酸盐还吲哚试验阴性，硝酸盐还原试验阳性。原试验阳性。第45页/共55页47铜绿假单孢菌铜绿假单孢菌 该菌为微生物限度检查规定不得检出的控制菌，可利用氧化酶试验和绿脓菌素试验迅速判断所保藏的菌种有无发生变异。第46页/共55页48乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌确认该菌未发生变异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为、通过显微鉴别，为单

30、个出现单个出现的杆菌，有运动性，革兰氏染色为阴的杆菌，有运动性，革兰氏染色为阴性。性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔浅灰色，湿润，光滑，半透明。浅灰色，湿润，光滑，半透明。3 3、生化试验可选做明胶穿刺、吲哚、硫化氢和硝酸盐还原试验，结、生化试验可选做明胶穿刺、吲哚、硫化氢和硝酸盐还原试验，结果不液化明胶，吲哚试验阴性，硫化氢阳性，硝酸盐还原试验阳果不液化明胶，吲哚试验阴性，硫化氢阳性，硝酸盐还原试验阳性。性。第47页/共55页49乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌 该菌为微生物限度检查规定不得检出的控制菌，可利用三糖铁琼脂斜面和血清试验迅速判断所保藏的菌种有无发生变异。第48页

31、/共55页50藤黄微球菌藤黄微球菌 确认该菌未发生变异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为、通过显微鉴别，为呈堆团排列的球菌呈堆团排列的球菌，革兰氏染色为阳性。，革兰氏染色为阳性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔硫黄色到酪黄色，光滑，软。硫黄色到酪黄色，光滑，软。3 3、生化试验可选做明胶穿刺、硫化氢和硝酸盐还原试验，结果缓慢、生化试验可选做明胶穿刺、硫化氢和硝酸盐还原试验，结果缓慢液化明胶成漏斗形，硫化氢阳性，硝酸盐还原试验阳性。液化明胶成漏斗形，硫化氢阳性，硝酸盐还原试验阳性。第49页/共55页51金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌确认该菌未发生变

32、异的主要方法为：确认该菌未发生变异的主要方法为：1 1、通过显微鉴别，为、通过显微鉴别，为单个或成对呈短链和不规则堆团状排列的球菌单个或成对呈短链和不规则堆团状排列的球菌，革兰氏染色为阳性。革兰氏染色为阳性。2 2、营养琼脂斜面上菌苔、营养琼脂斜面上菌苔生长茂盛，半透明，光滑，平坦，湿润，白生长茂盛，半透明，光滑，平坦，湿润，白色至浅黄色或橙色。色至浅黄色或橙色。3 3、生化试验可选做明胶穿刺、硝酸盐还原和过氧化氢酶试验，结果、生化试验可选做明胶穿刺、硝酸盐还原和过氧化氢酶试验，结果明胶呈囊状液化，硝酸盐还原试验阳性，过氧化氢酶试验阳性。明胶呈囊状液化，硝酸盐还原试验阳性，过氧化氢酶试验阳性。

33、第50页/共55页52金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 该菌为微生物限度检查规定不得检出的控制菌，可利用血浆凝固酶试验迅速判断所保藏的菌种有无发生变异。第51页/共55页53生孢梭菌生孢梭菌确认该菌未发生变异的主要方法为：1、通过显微鉴别，菌体粗大单独存在或呈短链排列，芽孢比菌体宽，芽孢呈梭形，革兰氏染色为阳性。2、过氧化氢酶试验阳性。第52页/共55页54白色念珠菌白色念珠菌确认该菌未发生变异的主要方法为：1、通过显微鉴别，可见卵形细胞，有多边芽殖现象，有假菌丝。2、改良马丁琼脂斜面上菌苔生长茂盛，光滑，湿润，菌落呈乳白色。第53页/共55页55黑曲霉黑曲霉确认该菌未发生变异的主要方法为：1、通过显微鉴别，可见分隔菌丝体，分生孢子穗球形，黑色。2、改良马丁琼脂斜面上菌苔呈黑褐色厚绒状，色泽均一，无杂色，菌落呈黑色。第54页/共55页