维生素类药物分析三.pptx

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1、会计学1维生素类药物分析三维生素类药物分析三维生素维生素D3（胆骨化醇）（胆骨化醇）第1页/共73页1.溶解性溶解性 脂溶性脂溶性2.不稳定性不稳定性 含多个双健易被氧化，含多个双健易被氧化，对酸不稳定对酸不稳定3.旋光性旋光性 性状项下比旋度性状项下比旋度一、结构与性质一、结构与性质4.显色反应显色反应5.紫外吸收特征紫外吸收特征 性状项下吸收系数性状项下吸收系数第2页/共73页二、鉴别试验二、鉴别试验（一）显色反应（一）显色反应1.与醋酐与醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应 Ch.P（2005）第3页/共73页维生素维生素D2 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.5mg，加

2、三，加三氯甲烷氯甲烷5ml溶解后，加醋酐溶解后，加醋酐0.3ml与硫与硫酸酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。迅即变为紫色，最后成绿色。第4页/共73页维生素维生素D3 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.5mg，加三，加三氯甲烷氯甲烷5ml溶解后，加醋酐溶解后，加醋酐0.3ml与硫与硫酸酸0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。第5页/共73页2.与三氯化锑反应与三氯化锑反应 BP3.其他显色反应其他显色反应维生素D+三

3、氯化锑 橙红色粉红色第6页/共73页（二）（二）IR Ch.P（2005）维生素维生素D2 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（2）本品的红外光吸收图）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集谱应与对照的图谱（光谱集452图）图）一致。一致。第7页/共73页（三）维生素（三）维生素D2、D3的区别反应的区别反应 维生素D 与乙醇+硫酸反应维生素D2显 红 色，max在570nm维生素D3显 黄 色，max在495nm第8页/共73页三、杂质检查三、杂质检查维生素维生素D2中麦角甾醇的检查中麦角甾醇的检查灵敏度法灵敏度法维生素维生素D2 Ch.P（2005）【检查检查】麦角甾醇麦角甾醇 取本品取

4、本品10mg，加，加90%乙醇乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷液（取洋地黄皂苷20mg，加，加90%乙醇乙醇2ml，加热溶解制成），加热溶解制成）2ml，混合，放置，混合，放置18小时，不得发生浑浊或沉淀。小时，不得发生浑浊或沉淀。第9页/共73页四、含量测定四、含量测定HPLC 药典附录药典附录维生素维生素D测定法测定法 共有三法共有三法第10页/共73页第一法第一法 适用于无维生素适用于无维生素A醇及其它醇及其它杂质干扰时杂质干扰时 正相色谱、内标法正相色谱、内标法1.色谱条件色谱条件 色谱柱色谱柱 硅胶硅胶 流动相流动相 正己烷正己烷 正戊醇正戊醇（

5、997:3）内内 标标 邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯 第11页/共73页2.系统适应性试验系统适应性试验维生素维生素D3对照品对照品维生素维生素D3前维生素前维生素D3反式维生素反式维生素D3速甾醇速甾醇D3光光照照目的目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，检查分离度是否符合规定检查分离度是否符合规定第12页/共73页3.计算校正因子（对照品为维生素计算校正因子（对照品为维生素D3）（1）维生素）维生素D校正因子（校正因子（f1）第13页/共73页（2）前维生素）前维生素D折算成维生素折算成维生素D的校的校正因子（正因子（f2）第14页/共73页4.计算

6、含量计算含量维生素维生素D及前维生素及前维生素D折算成维折算成维生素生素D的总量（的总量（mi）单位单位=0.025 g 第15页/共73页第二法第二法 适用于有维生素适用于有维生素A醇及其它杂醇及其它杂 质干扰时质干扰时按第一法按第一法第16页/共73页第三法第三法 适用于按第二法处理后前维适用于按第二法处理后前维 生素生素D仍被干扰的样品仍被干扰的样品第二法净化后样品第二法净化后样品维生素维生素D外标法计算维生素外标法计算维生素D含量含量第17页/共73页维生素维生素D2 Ch.P（2005）【含量测定含量测定】精密称取本品精密称取本品25mg，置，置100ml棕色量瓶中，加三甲基戊烷棕色

7、量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加，避免加热热，用超声处理，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷分钟使溶解，加三甲基戊烷至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶液各液各5ml，置，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素D测定法（附录测定法（附录 K 第一法）测定，即得。第一法）测定，即得。第18页/共73页苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节 维生素维生素E 第19页/共73页名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚

8、CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第20页/共73页生物效价生物效价 右旋体右旋体 ：消旋体消旋体 =1.4：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第21页/共73页结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键、酯键 易水解易水解第22页/共73页7515（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、第23页/共73页（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂第24页/共73页 取本品约取本品约30m

9、g，加无水，加无水乙醇乙醇10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在，摇匀，在75加热加热15分钟，分钟，溶液应显溶液应显橙红色。橙红色。第25页/共73页三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应O（二）（二）第26页/共73页生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱氧化弱氧化剂剂第27页/共73页红色红色第28页/共73页 =41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）第29页/共73页维生素维生素EUV图图第30页/共73页薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5

10、）VitE Rf =0.7TLC法法（四）（四）第31页/共73页三、特殊杂质三、特殊杂质1.酸度 检查制备过程中引入的游离羧酸，酸碱滴定法2.游离生育酚的检查 第32页/共73页硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）利用游离生育酚的还原性，利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈将硫酸铈还原成硫酸亚铈原理原理（一）（一）试剂试剂（二）（二）第33页/共73页（M生育酚生育酚=430.8）例例 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液溶解后，加二苯胺试液1滴，滴，用硫酸铈液（用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定

11、，）滴定，消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不）不得过得过 1.0ml。第34页/共73页2.15限量限量（三）（三）第35页/共73页药典规定药典规定消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml设：应消耗硫酸铈液设：应消耗硫酸铈液 V ml0.011.0 实际浓度实际浓度 V若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量应重新计算硫酸铈的消耗量第36页/共73页例例 Ce(SO4)2=0.01020mol/L第37页/共73页四、四、含量测定含量测定GC法法（一）（一）GC特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速

12、度快分离效能好分离效能好挥发性低、不挥发性低、不稳定、极性强稳定、极性强衍生化易受衍生化易受样品蒸气压限样品蒸气压限制制第38页/共73页载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子第39页/共73页第40页/共73页内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的

13、物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第41页/共73页校正因子：校正因子：第42页/共73页实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法第43页/共73页例例 内标液内标液 取正三十二烷加正己烷溶解取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成并稀释成1.0mg/ml溶液溶液对照液对照液 精密称取精密称取VitE对照品对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液标液10ml，密塞，振摇使溶解，取，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入注入GC仪，测定，计算仪，测定，计算供试液供试液 精密称取供试品精

14、密称取供试品0.1998g置棕置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入注入GC仪，测定，计算仪，测定，计算第44页/共73页对照液对照液供试液供试液0.3730.368本品含本品含C31H52O3应为应为96.0 102.0%第45页/共73页BP GC 内标内标 正三十二烷正三十二烷 R1.4USP GC 内标内标 十六酸十六醇酯十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外标外标 dl生育酚生育酚 R1.4第46页/共73页利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性还原型还原型氧化型氧化型二苯胺（亮黄二

15、苯胺（亮黄灰紫）灰紫）原理原理1、铈量法铈量法（二）（二）指示剂指示剂2、第47页/共73页防止防止Ce(SO4)2的水解的水解减慢生育酚被减慢生育酚被O2氧化速度氧化速度C、酸性条件、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水易溶于水生育酚易溶于醇生育酚易溶于醇B、溶剂、溶剂分子量较大，反应慢分子量较大，反应慢 易被易被O2氧化氧化A、反应速度、反应速度H2SO4讨论讨论3、第48页/共73页含量计算含量计算4、MVitE =472第49页/共73页样品样品 dl生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇-水（水（49 ：1）检测波长检测波长292nm R2.

16、6 RSD0.8%JP-RP-HPLC法（外标法）法（外标法）（三）（三）第50页/共73页测定对象测定对象血清中血清中VitA和和VitE固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇-水（水（96 ：4）检测波长检测波长 8前前330nm 8后后292nmRP-HPLC法（外标法）法（外标法）（四）（四）第51页/共73页108在三氯醋酸或盐酸存在下，经在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是咯即产生蓝色产物的药物应是 A.氯氮卓氯氮卓 B.维生素维生素A C.普鲁卡因普鲁卡因 D.盐酸吗啡盐酸吗

17、啡 E.维生素维生素C第52页/共73页99：88中国药典（中国药典（2000年版）采用年版）采用 以下何法测定维生素以下何法测定维生素E含量含量 A.酸碱滴定法酸碱滴定法 B.氧化还原法氧化还原法 C.紫外分光光度法紫外分光光度法 D.气相色谱法气相色谱法 E.非水滴定法非水滴定法第53页/共73页98：79中国药典（中国药典（2000年版）采用年版）采用 气相色谱法测定维生素气相色谱法测定维生素E含含 量，内标物质为量，内标物质为 A.正二十二烷正二十二烷 B.正二十六烷正二十六烷 C.正三十烷正三十烷 D.正三十二烷正三十二烷 E.正三十六烷正三十六烷 第54页/共73页99：77.下列

18、药物的碱性溶液，加入下列药物的碱性溶液，加入 铁氰化钾后，再加正丁醇，铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是显蓝色荧光的是 A.维生素维生素A B.维生素维生素B1 C.维生素维生素C D.维生素维生素D E.维生素维生素E第55页/共73页97：77既具有酸性又具有还原性的既具有酸性又具有还原性的 药物是药物是 A.维生素维生素A B.咖啡因咖啡因 C.苯巴比妥苯巴比妥 D.氯丙嗪氯丙嗪 E.维生素维生素C第56页/共73页99m：132.维生素维生素C的鉴别反应，常采的鉴别反应，常采 用的试剂有用的试剂有 A.碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 B.硝酸银硝酸银 C.碘化铋钾碘化铋钾 D.乙酰丙酮乙

19、酰丙酮 E.三氯醋酸和吡咯三氯醋酸和吡咯第57页/共73页99m：84.测定维生素测定维生素C注射液的含量注射液的含量 时，在操作过程中要加入时，在操作过程中要加入 丙酮，这是为了丙酮，这是为了 A.保持维生素保持维生素C的稳定的稳定 B.增加维生素增加维生素C的溶解度的溶解度 C.使反应完全使反应完全 D.加快反应速度加快反应速度 E.消除注射液中抗氧剂的干扰消除注射液中抗氧剂的干扰第58页/共73页98：85.能发生硫色素特征反应的药物能发生硫色素特征反应的药物 是是 A.维生素维生素A B.维生素维生素B1 C.维生素维生素C D.维生素维生素E E.烟酸烟酸第59页/共73页97：81

20、使用碘量法测定维生素使用碘量法测定维生素C的的 含量含量,已知维生素已知维生素C的分子量的分子量 为为176.13，每，每1ml碘滴定液碘滴定液 (0.1mol/L)相当于维生素相当于维生素C 的量为的量为 A.17.61mg B.8.806mg C.176.1mg D.88.06mg E.1.761mg第60页/共73页97：121125（99：121125）可发生以下反应或现象的药物为可发生以下反应或现象的药物为 A.维生素维生素B1 B.维生素维生素C C.两者均能两者均能 D.两者均不能两者均不能 121.与碘化汞钾生成黄色沉淀与碘化汞钾生成黄色沉淀 122.麦芽酚反应麦芽酚反应 12

21、3.在乙醚中不溶在乙醚中不溶 124.与与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失二氯靛酚反应使颜色消失 125.硫色素反应硫色素反应ADCBA第61页/共73页115维生素维生素A的鉴别试验为的鉴别试验为 A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.硫酸锑反应硫酸锑反应 C.2,6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应 D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.间二硝基苯的碱性乙醇液反间二硝基苯的碱性乙醇液反 应应第62页/共73页77中国药典（中国药典（2000年版）规定维生年版）规定维生 素素A的测定采用紫外分光光度法的测定采用紫外分光光度法 （三点校正法），此法又分为（三点校正法），此法又分为 A等波长差法等波长差法 B等吸

22、收度法等吸收度法 C6/7 A法法 D差示分光法差示分光法 E双波长法双波长法第63页/共73页78维生素维生素E的鉴别试验有的鉴别试验有 A硫色素反应硫色素反应 B硝酸氧化呈色反应硝酸氧化呈色反应 C硫酸硫酸-乙醇呈色反应乙醇呈色反应 D碱性水解后加三氯化铁乙醇碱性水解后加三氯化铁乙醇 液与液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反联吡啶乙醇液呈色反 应应 EMarquis反应反应第64页/共73页80.下面哪些描述适用于维生素下面哪些描述适用于维生素A A.分子具有长二烯醇侧链，易被氧化分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B.具有较长的全反式共轭多烯结构具有较长的全反式共轭多烯结构 C.含酯键，经水解后产

23、生苯并二氢吡含酯键，经水解后产生苯并二氢吡 喃衍生物，易被氧化喃衍生物，易被氧化 D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳 定兰色，很快转变为紫红色定兰色，很快转变为紫红色 E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加 热后，呈橙红色热后，呈橙红色 第65页/共73页 维生素维生素A与与 反应即显蓝反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在色，渐变成紫红色；反应需在 条件下进行。条件下进行。（）维生素维生素A分子中由于具有共分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。不易被氧化变质。三氯化锑三氯化锑无水无水第

24、66页/共73页 维维生生素素E在在酸酸性性或或碱碱性性溶溶液液中中加加热热可可水水解解生生成成游游离离 ，当当有有氧氧或或其其他他氧氧化化剂剂存存在在时时，则则进进一一步步被被氧氧化化成成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。生育酚生育酚第67页/共73页 维生素维生素B1 的噻唑环在的噻唑环在 介质介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经环合，然后经 等氧化剂氧等氧化剂氧化生成具有荧光的化生成具有荧光的 ，加，加 荧荧光消失，加光消失，加 荧光又显出；此反应荧光又显出；此反应称为称为 反应。反应。碱性碱性铁氰化钾铁氰化钾硫色

25、素硫色素酸酸碱碱硫色素硫色素第68页/共73页 维生素维生素C是是 元弱酸，具有强元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的作其它制剂的 剂。剂。一一还原还原抗氧抗氧第69页/共73页 维生素维生素E中游离生育酚的检查时中游离生育酚的检查时规规 定定 消消 耗耗 硫硫 酸酸 铈铈 滴滴 定定 液液（0.01mol/L）不得过不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实，现硫酸铈滴定液的实际浓度为际浓度为0.01053mol/L，应不得超过，应不得超过多少多少ml？A.0.95 B.0.97 C.0.99 D.0.92 E.1.05第70页/共73页 中国药典维生素中国

26、药典维生素C的含量测定的含量测定 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加，精密称定，加新新沸过的冷水沸过的冷水100ml与与稀醋酸稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即立即用碘滴用碘滴定液定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色，滴定，至溶液显蓝色，在在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6。已知：取样量为已知：取样量为0.2084g，消耗碘滴，消耗碘滴定液（定液（0.09981mol/L）22.75ml。第71页/共73页要求：（要求：（1）解释划线部分）解释划线部分 （2）计算本品的含量是否符合）计算本品的含量是否符合 规定规定（规定本品含（规定本品含C6H8O6应不低于应不低于99.0%）第72页/共73页