微生物学实验学习教案.pptx

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1、会计学1微生物学微生物学(wi shn w xu)实验实验第一页，共77页。实验一实验一 环境环境(hunjng)微生物的微生物的检测（检测（P5-8）v v学习检测环境中微生物的方法；学习检测环境中微生物的方法；v v观察不同类群微生物的菌落形观察不同类群微生物的菌落形态特征，比较不同环境中微生态特征，比较不同环境中微生物的类型和数量物的类型和数量(shling)；v v体会无菌操作的重要性。体会无菌操作的重要性。实验项目实验项目(xingm)号：号：80000039101实验类型：实验类型：验证性验证性实验目的实验目的：第1页/共77页第二页，共77页。vv基本原理：基本原理：vv 环境中

2、的微生物在营环境中的微生物在营养丰富的培养基平板中经过养丰富的培养基平板中经过培养即可长成肉眼可见培养即可长成肉眼可见(kjin)的菌落，从而可检的菌落，从而可检测到环境中存在的微生物的测到环境中存在的微生物的类型和数量。类型和数量。vv实验材料：实验材料：vv 营养琼脂平板、营养琼脂平板、vv 灭菌棉签、灭菌棉签、vv 恒温培养箱等恒温培养箱等第2页/共77页第三页，共77页。实验方法实验方法实验方法实验方法(fngf(fngf)和步骤：和步骤：和步骤：和步骤：（P6-7P6-7）每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法（或你感每四个同学为一组，每个同学一个

3、营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法（或你感每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法（或你感每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法（或你感兴趣的其他方法），写好标签：兴趣的其他方法），写好标签：兴趣的其他方法），写好标签：兴趣的其他方法），写好标签：实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿

4、盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中10min10min，盖好皿盖；，盖好皿盖；，盖好皿盖；，盖好皿盖；打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中30min30min，盖好皿盖；，盖好皿盖；，盖好皿盖；，盖好皿盖；2.2.比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养

5、皿底部用记号笔分四个区（A A、B B、C C、DD区），洗手前区），洗手前区），洗手前区），洗手前后分别用手指在培养基表面轻按。（注意后分别用手指在培养基表面轻按。（注意后分别用手指在培养基表面轻按。（注意后分别用手指在培养基表面轻按。（注意(zh y)(zh y)不要按碎培养基。）盖好皿盖。不要按碎培养基。）盖好皿盖。不要按碎培养基。）盖好皿盖。不要按碎培养基。）盖好皿盖。3.3.口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。4.4.实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验

6、台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，也可用同样方实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，也可用同样方实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，也可用同样方实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，也可用同样方法检测你所感兴趣的其他地方或物品。法检测你所感兴趣的其他地方或物品。法检测你所感兴趣的其他地方或物品。法检测你所感兴趣的其他地方或物品。处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于37

7、37温箱培养温箱培养温箱培养温箱培养1-21-2天观察，记录实验结果。天观察，记录实验结果。天观察，记录实验结果。天观察，记录实验结果。第3页/共77页第四页，共77页。实验结果实验结果实验结果实验结果(ji gu)(ji gu)：将实验结果将实验结果将实验结果将实验结果(ji gu)(ji gu)记录于下表记录于下表记录于下表记录于下表（P8P8）：）：）：）：表表表表1 1：微生物检测：微生物检测：微生物检测：微生物检测(jin c)(jin c)的结果记录表的结果记录表的结果记录表的结果记录表处理方法处理方法（1）（2）（3）（4）菌落数量菌落数量菌落特征菌落特征（大小、形状、透明（大小

8、、形状、透明度、颜色等）度、颜色等）简要说明简要说明菌落菌落(jnlu)数量可用数量可用“+”和和“-”来表示，从多到少依次表示为来表示，从多到少依次表示为+，+，+，+，-第4页/共77页第五页，共77页。分析分析分析分析(fnx)(fnx)及及及及讨论：讨论：讨论：讨论：思考题：思考题：通过本次实验，在防止微生物污染通过本次实验，在防止微生物污染与扩散与扩散(kusn)方面，你学到了些什方面，你学到了些什么？有何体会？么？有何体会？第5页/共77页第六页，共77页。实验二实验二实验二实验二 显微镜的使用和细菌基本显微镜的使用和细菌基本显微镜的使用和细菌基本显微镜的使用和细菌基本(jbn)(

9、jbn)形态的观形态的观形态的观形态的观察（察（察（察（P40-47P40-47）v v学习并掌握显微镜，特别是油学习并掌握显微镜，特别是油镜的工作原理和使用方法镜的工作原理和使用方法；v v熟练熟练(shlin)使用显微镜观使用显微镜观察细菌的个体形态察细菌的个体形态。实验实验(shyn)项目号：项目号：80000039101实验实验(shyn)类型：类型：验证性验证性实验目的实验目的：第6页/共77页第七页，共77页。1.光学部分光学部分:接目接目镜镜、接物镜接物镜、照明装置照明装置(聚光镜、聚光镜、虹彩光圈、虹彩光圈、反反光镜等光镜等).它使检它使检视物放大视物放大,造成物造成物象象.2

10、.机械部分机械部分:镜座、镜座、镜臂、镜筒、物镜臂、镜筒、物镜转换器、载物镜转换器、载物台、载物台转移台、载物台转移器、粗调节器、器、粗调节器、细调节器等部件细调节器等部件(bjin).它起着它起着支持支持 调节调节 固定固定等作用等作用.显微镜的构造显微镜的构造(guzo)基本原理：基本原理：微生物的个体很小，必须要借助显微镜才能微生物的个体很小，必须要借助显微镜才能(cinng)看清其形看清其形态。态。第7页/共77页第八页，共77页。1.1.放大放大放大放大(fngd)(fngd)倍数倍数倍数倍数=接物镜放大接物镜放大接物镜放大接物镜放大(fngd)(fngd)倍数倍数倍数倍数 接目镜放

11、大接目镜放大接目镜放大接目镜放大(fngd)(fngd)倍数倍数倍数倍数 2.2.显微镜的分辨率显微镜的分辨率显微镜的分辨率显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析是表示显微镜辨析是表示显微镜辨析是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可物体（两端）两点之间距离的能力，可物体（两端）两点之间距离的能力，可物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：用公式表示为：用公式表示为：用公式表示为：D=/2nsin(/2)D=/2nsin(/2)式中式中式中式中D D：物镜分辨出物体两点间的最短距：物镜分辨出物体两点间的最短距：物镜分辨出物体两点间的最短距：物镜分辨出物体两点间的最短距离。离。离。离

12、。：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均m)m)n:n:物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。显微镜的放大显微镜的放大(fngd)倍数和分辨倍数和分辨率率第8页/共77页第九页，共77页。1.1.香柏油的折射率与香柏油的折射率与香柏油的折射率与香柏油的折射率与玻璃接近，提高了玻璃接近，提高了玻璃接近，提高了玻璃接近，提高了视野视野视野视野(shy)(shy)的照明的照明的照明的照明度。

13、度。度。度。2.2.提高了显微镜的提高了显微镜的提高了显微镜的提高了显微镜的分辨率分辨率分辨率分辨率油镜使用油镜使用(shyng)的的原理原理第9页/共77页第十页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)材料：材料：材料：材料：n n玻片标本：玻片标本：n n 球状：四联球菌（球状：四联球菌（Micrococcus tetragenus）n n 杆状：枯草杆菌（杆状：枯草杆菌（Bacillus subtilis）n n 螺旋状：水弧菌螺旋状：水弧菌(h jn)（Vibrio aquatilis）n n示范片：溶血链球菌示范片：溶血链球菌（Streptococcus hemolyti

14、cus）n n其他器材：显微镜、香柏油、清洁其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸等剂、擦镜纸等 第10页/共77页第十一页，共77页。vv用前检查：零件是否齐全，镜头用前检查：零件是否齐全，镜头用前检查：零件是否齐全，镜头用前检查：零件是否齐全，镜头(jngtu)(jngtu)是否清洁。是否清洁。是否清洁。是否清洁。vv调节光亮度调节光亮度调节光亮度调节光亮度 vv低倍镜观察：粗调、细调低倍镜观察：粗调、细调低倍镜观察：粗调、细调低倍镜观察：粗调、细调 vv高倍观察高倍观察高倍观察高倍观察 ：细调：细调：细调：细调 vv油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，油镜观察：高倍镜下找到

15、清晰的物象后，旋开高倍镜，油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头(jngtu)(jngtu)浸入香柏油中，细调至看清物象为止。浸入香柏油中，细调至看清物象为止。浸入香柏油中，细调至看清物象为止。浸入香柏油中，细调至看清物象为止。vv换片：另换新片，必须从换片：另换新片，必须从换片：另换新片，必须从换片：另换新片，必须从“3”“3”开始操作。开始操作。开始操作。开始

16、操作。vv标本片的清洁：标本片的清洁：标本片的清洁：标本片的清洁：vv用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头头头头(jngtu)(jngtu)上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁剂擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的清洁剂，剂擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的清洁剂，剂擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的清洁剂，剂擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留

17、的清洁剂，后将镜体全部复原。后将镜体全部复原。后将镜体全部复原。后将镜体全部复原。实验方法实验方法实验方法实验方法(fngf(fngf)和步骤：（和步骤：（和步骤：（和步骤：（P44-P44-4545）主要主要(zhyo)是油镜的是油镜的使用使用第11页/共77页第十二页，共77页。1.1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏以免损坏以免损坏以免损坏(s(s nhui)nhui)。2.2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度镜面只能用擦镜纸擦，不

18、能用手指或粗布，以保证光洁度镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.3.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。以免压碎玻片或损伤镜面。以免压碎玻片或损伤镜面。以免压碎玻片或损伤镜面。4.4.观察时，

19、观察时，观察时，观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿

20、。拿，更不可倾斜拿。拿，更不可倾斜拿。拿，更不可倾斜拿。6.6.显微镜应存显微镜应存显微镜应存显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。显微镜保养显微镜保养(boyng)(boyng)和使用中的注和使用中的注意事项：意事项：第12页/共77页第十三页，共77页。四联球菌四联球菌(qijn)链球菌链球菌水弧菌水弧菌(h jn)枯草杆菌枯草杆菌细菌细菌(xjn)基本形态的观基本形态的观察察 利用油镜，观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。

21、利用油镜，观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。第13页/共77页第十四页，共77页。观察结果观察结果观察结果观察结果(ji gu)(ji gu)（绘图）（绘图）（绘图）（绘图）P46P46分析分析(fnx)及讨论：及讨论：菌名菌名拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数绘出在油镜下观察到的形态图，注意绘出在油镜下观察到的形态图，注意(zh y)菌体的形态、大小比例、排菌体的形态、大小比例、排列，同时标明菌名列，同时标明菌名(包括拉丁学名包括拉丁学名)和放大倍数（物镜的放大倍数和放大倍数（物镜的放大倍数目镜的目镜的放大倍数）放大倍数）第14页/共77页第十五页，共77页。用油镜观察时

22、应注意哪些问题？在载玻片和镜头用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加香柏油有什么作用？之间滴加香柏油有什么作用？镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是(b shi)直接用高倍镜或油镜观察？直接用高倍镜或油镜观察？影响显微镜分辨率的因素有哪些？影响显微镜分辨率的因素有哪些？思考题：（思考题：（P47）第15页/共77页第十六页，共77页。实验三实验三 细菌简单细菌简单(jindn)染色及革染色及革兰氏染色兰氏染色vv学习学习(xux)微生物制片、染微生物制片、染色的基本技术；色的基本技术；vv了解革兰氏染色的原理，掌握了解革兰氏染色的原理，掌

23、握革兰氏染色的方法；革兰氏染色的方法；vv巩固油镜的使用方法，熟练观巩固油镜的使用方法，熟练观察细菌的个体形态。察细菌的个体形态。实验项目实验项目(xingm)号：号：80000039102实验类型实验类型：验证性验证性实验目的：实验目的：第16页/共77页第十七页，共77页。基本原理：基本原理：简单染色：简单染色：简单染色法是只用一种染料使细菌着色简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态。染料主要有碱性染料、酸以显示其形态。染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，通常采用碱性性染料和中性染料三大类，通常采用碱性染料进行染料进行(jnxng)染色。因细菌在中性、染色。因细菌在中性、

24、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，而碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，而染料电离后的染色部分带正电荷，易与细染料电离后的染色部分带正电荷，易与细胞结合使其着色。胞结合使其着色。第17页/共77页第十八页，共77页。根据细胞壁结构和成分根据细胞壁结构和成分根据细胞壁结构和成分根据细胞壁结构和成分(chng fn)(chng fn)的不同的不同的不同的不同 革兰氏染色法（细菌学上最常用革兰氏染色法（细菌学上最常用革兰氏染色法（细菌学上最常用革兰氏染色法（细菌学上最常用(chn(chn yn yn)的鉴的鉴的鉴的鉴别染色法）：别染色法）：别染色法）：别染色法）：第18页/共77页第十九页，共77页。

25、实验实验实验实验(shyn)(shyn)材材材材料：料：料：料：n n菌种：菌种：n n 枯草杆菌（枯草杆菌（Bacillus subtilis）n n 大肠杆菌大肠杆菌(d chn n jn)（Escherichia coli）n n染色液和试剂：革兰氏染色液、染色液和试剂：革兰氏染色液、简单染色液等简单染色液等n n芽胞、鞭毛、荚膜的示范片芽胞、鞭毛、荚膜的示范片n n其他器材：显微镜、香柏油、清其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸等洁剂、擦镜纸等 第19页/共77页第二十页，共77页。n n简单染色：（材料：牙垢简单染色：（材料：牙垢(ygu)）n n 涂片涂片 干燥干燥 固定固定

26、染色染色（1-2min）水洗水洗干燥干燥油油镜检镜检绘图绘图n n革兰氏染色：（材料：大肠杆革兰氏染色：（材料：大肠杆菌、枯草杆菌）菌、枯草杆菌）n n 涂片涂片干燥干燥固定固定结晶紫结晶紫初染（初染（1-2min）水洗水洗 碘碘液媒染（液媒染（1min）水洗水洗 酒酒精脱色（精脱色（30s内）内）水洗水洗 番红复染（番红复染（2min）水洗水洗 干燥干燥油镜检，判断菌体的革油镜检，判断菌体的革兰氏染色结果兰氏染色结果绘图绘图 实验方法实验方法实验方法实验方法(fngf(fngf)和步骤：和步骤：和步骤：和步骤：第20页/共77页第二十一页，共77页。n n观察观察观察观察(gunch)(gu

27、nch)标本标本标本标本片片片片细胞结构细胞结构菌名菌名染色方法染色方法图例图例芽胞芽胞枯草杆菌枯草杆菌（Bacillus subtilis）芽胞染色法芽胞染色法鞭毛鞭毛变形杆菌变形杆菌(Proteus vulgaris)鞭毛染色法鞭毛染色法荚膜荚膜圆褐固氮菌圆褐固氮菌（褐球固氮菌）（褐球固氮菌）（Azotobacter chroococcum）负染色法负染色法第21页/共77页第二十二页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)结结结结果果果果:u绘图绘图(hu t)u革兰氏染色革兰氏染色(rns)的结果的结果牙垢中的细菌牙垢中的细菌10010枯草杆菌（示芽胞）枯草杆菌（示芽胞）拉

28、丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数变形杆菌（示鞭毛）变形杆菌（示鞭毛）拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数圆褐固氮菌（示荚膜）圆褐固氮菌（示荚膜）拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数菌名菌名形状形状简图简图颜色颜色革兰氏染色结果革兰氏染色结果大肠杆菌大肠杆菌枯草杆菌枯草杆菌第22页/共77页第二十三页，共77页。在进行细菌涂片时应注意哪些环节？在进行细菌涂片时应注意哪些环节？P75(1)进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？加热固定时应注意什么？P76(2)你的革兰氏染色是否成功？有哪些问题需要你的革兰氏染色是否成功？有哪些问题需要注意，为什么？

29、注意，为什么？P84(1)现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定杆菌是请你鉴定杆菌是G+还是还是G-，如何，如何(rh)确确定你的染色结果的正确性？定你的染色结果的正确性？P84(2)思考题：（思考题：（P47）分析分析(fnx)及讨论：及讨论：第23页/共77页第二十四页，共77页。实验四实验四实验四实验四 放线菌、酵母菌、霉菌个体形态放线菌、酵母菌、霉菌个体形态放线菌、酵母菌、霉菌个体形态放线菌、酵母菌、霉菌个体形态(xngti)(xngti)的观察的观察的观察的观察四大类微生物菌落形态四大类微生物菌落形态四大类微生物菌落形态四大类微生物菌

30、落形态(xngti)(xngti)的观察的观察的观察的观察vv学习学习(xux)放线菌、酵母菌、放线菌、酵母菌、霉菌的制片方法，观察其个霉菌的制片方法，观察其个体形态体形态vv了解四大类微生物的菌落特点，了解四大类微生物的菌落特点，学会从菌落形态区分四大类学会从菌落形态区分四大类微生物。微生物。实验实验(shyn)项目号：项目号：80000039103实验实验(shyn)类型类型：验证性验证性实验目的实验目的：第24页/共77页第二十五页，共77页。基本原理：基本原理：1.放线菌（放线菌（P72-73）：）：印片法：用于观察气生菌丝、孢子丝的形态、孢子的排列印片法：用于观察气生菌丝、孢子丝的形

31、态、孢子的排列方式及形态。方式及形态。2.酵母菌（酵母菌（P73）：）：用吕氏碱性用吕氏碱性(jin xn)美兰染色做水浸片，可区分死活细美兰染色做水浸片，可区分死活细胞：胞：死细胞死细胞 蓝色蓝色 活细胞活细胞 无色无色3.霉菌（根霉）（霉菌（根霉）（P74）：挑菌做水浸片直接观察。）：挑菌做水浸片直接观察。第25页/共77页第二十六页，共77页。青霉青霉根霉根霉曲霉曲霉(qmi)细黄链霉菌细黄链霉菌(mjn)（放线菌）（放线菌）酵母菌酵母菌第26页/共77页第二十七页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)材料：材料：材料：材料：n n菌种：细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜

32、面）菌种：细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜面）菌种：细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜面）菌种：细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜面）、黑根霉（平板）、黑根霉（平板）、黑根霉（平板）、黑根霉（平板）n n玻片标本：青霉、黑曲霉玻片标本：青霉、黑曲霉玻片标本：青霉、黑曲霉玻片标本：青霉、黑曲霉n n菌落标本：菌落标本：菌落标本：菌落标本：n n 细菌细菌细菌细菌(xjn)(xjn)（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌）球菌）球菌）球菌）n n 放线菌（细黄链霉菌）放线菌（细黄链霉菌）放线菌（细

33、黄链霉菌）放线菌（细黄链霉菌）n n 酵母菌（酿酒酵母）酵母菌（酿酒酵母）酵母菌（酿酒酵母）酵母菌（酿酒酵母）n n 霉菌（黑曲霉、黑根霉）霉菌（黑曲霉、黑根霉）霉菌（黑曲霉、黑根霉）霉菌（黑曲霉、黑根霉）n n染料：石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚染料：石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚染料：石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚染料：石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚n n其他器材：其他器材：其他器材：其他器材：第27页/共77页第二十八页，共77页。vv放线菌（菌种：细黄链霉菌平放线菌（菌种：细黄链霉菌平板板(pngbn)）vv 印片法：用接种铲取一小印片法：用接种铲取一小块菌苔（连同培养基）放在

34、一块块菌苔（连同培养基）放在一块载玻片上载玻片上取另一块载玻片稍加取另一块载玻片稍加热并在其上轻压热并在其上轻压固定固定用石碳用石碳酸复红做简单染色片酸复红做简单染色片油镜检油镜检绘图绘图 实验实验实验实验(shyn)(shyn)方法和步骤：方法和步骤：方法和步骤：方法和步骤：第28页/共77页第二十九页，共77页。vv酵母菌（菌种：酿酒酵母）酵母菌（菌种：酿酒酵母）vv 在载玻片上滴一滴美兰在载玻片上滴一滴美兰用用接种环取少量酵母菌与染料混接种环取少量酵母菌与染料混匀匀盖上盖玻片（注意防止气盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）泡的产生）镜检（高倍镜）镜检（高倍镜）绘图绘图vv霉菌（菌种：根霉）霉

35、菌（菌种：根霉）vv 在载玻片上滴一滴乳酸酚在载玻片上滴一滴乳酸酚用解剖针小心挑取少许根霉的用解剖针小心挑取少许根霉的菌丝放在染料中菌丝放在染料中盖上盖玻片盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）（注意防止气泡的产生）镜镜检（低倍镜或高倍镜）检（低倍镜或高倍镜）绘图绘图vv标本片的观察：（青霉、曲霉标本片的观察：（青霉、曲霉(qmi)）vv菌落形态的观察：菌落形态的观察：第29页/共77页第三十页，共77页。第30页/共77页第三十一页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)结果结果结果结果:绘出所观察微生物的个体形态图（细黄链霉菌、酿酒绘出所观察微生物的个体形态图（细黄链霉菌、酿酒酵母、

36、根霉、青霉、曲霉酵母、根霉、青霉、曲霉，注意标注清楚，注意标注清楚(qng chu)各部分结构的名称）各部分结构的名称）菌名菌名拉丁学拉丁学名名放大放大(fngd)倍数倍数第31页/共77页第三十二页，共77页。列表比较四大类微生物的菌落列表比较四大类微生物的菌落列表比较四大类微生物的菌落列表比较四大类微生物的菌落(jnlu)(jnlu)特征特征特征特征类群类群菌名菌名菌落大小菌落大小干湿干湿颜色颜色表面表面边缘边缘厚薄厚薄致密度致密度气味气味细菌细菌放线菌放线菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌四大四大(s d)类微生物的菌落特征类微生物的菌落特征第32页/共77页第三十三页，共77页。根据你的观察结果，

37、吕氏碱性美兰染色的作用时间根据你的观察结果，吕氏碱性美兰染色的作用时间与酵母菌死活细胞与酵母菌死活细胞(xbo)的比例的变化是否有关系的比例的变化是否有关系？试分析原因。？试分析原因。P76-（10）黑曲霉和黑根霉在个体形态和菌落形态上有何区别黑曲霉和黑根霉在个体形态和菌落形态上有何区别？P76-（12）思考题：思考题：分析分析(fnx)及讨及讨论：论：第33页/共77页第三十四页，共77页。实验五实验五实验五实验五 显微镜直接计数法显微镜直接计数法显微镜直接计数法显微镜直接计数法及微生物大小及微生物大小及微生物大小及微生物大小(dxio)(dxio)的测定的测定的测定的测定 （P47-56)

38、P47-56)vv了解血球计数板的构造了解血球计数板的构造了解血球计数板的构造了解血球计数板的构造(guzo)(guzo)和使用方法，学会和使用方法，学会和使用方法，学会和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌悬液进行计数。用血球计数板对酵母菌悬液进行计数。用血球计数板对酵母菌悬液进行计数。用血球计数板对酵母菌悬液进行计数。vv学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。实验实验(shyn)项目号：项目号：80000039104实验实验(shyn)类型类型：验证性验证

39、性实验目的实验目的：第34页/共77页第三十五页，共77页。基本原理：基本原理：每一个大方格边长为每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度片与盖玻片之间的高度(god)为，所以计数室的容为，所以计数室的容积为积为3。设五个中方格中总菌数为设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为，菌液稀释倍数为B，1.1.显微镜直接显微镜直接(zhji)(zhji)计数法计数法:(P52):(P52)第35页/共77页第三十六页，共77页。采用目镜采用目镜(mjng)测微尺和镜台测微尺测微尺和镜台测微尺测量微生物细胞

40、的大测量微生物细胞的大小。镜台测微尺一般小。镜台测微尺一般是将是将1mm等分为等分为100格，格，因此每格长因此每格长10m，而，而目镜目镜(mjng)测微尺在测微尺在不同放大倍数下的每不同放大倍数下的每格所代表的长度是不格所代表的长度是不同的，使用前须用镜同的，使用前须用镜台测微尺校正，以求台测微尺校正，以求得在一定放大倍数下得在一定放大倍数下的实际长度。的实际长度。2.微生物大小微生物大小(dxio)的测定：的测定：(P48)第36页/共77页第三十七页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)材料：材料：材料：材料：n n菌种：酿酒酵母菌悬液，枯草杆菌种：酿酒酵母菌悬液，枯草杆

41、菌斜面菌斜面(ximin)n n其他器材：血球计数板，目镜测其他器材：血球计数板，目镜测微尺，镜台测微尺，显微镜，盖微尺，镜台测微尺，显微镜，盖玻片，载玻片，染色液等玻片，载玻片，染色液等第37页/共77页第三十八页，共77页。1.1.显微镜直接计数法：（菌种：酿酒酵母）显微镜直接计数法：（菌种：酿酒酵母）显微镜直接计数法：（菌种：酿酒酵母）显微镜直接计数法：（菌种：酿酒酵母）镜检计数室镜检计数室镜检计数室镜检计数室加样品加样品加样品加样品静止静止静止静止5 5分钟分钟分钟分钟显微镜计数显微镜计数显微镜计数显微镜计数（每个计数室选（每个计数室选（每个计数室选（每个计数室选5 5个中格）个中格）

42、个中格）个中格）记录结果记录结果记录结果记录结果清洗血清洗血清洗血清洗血球计数板球计数板球计数板球计数板2.2.微生物大小的测定微生物大小的测定微生物大小的测定微生物大小的测定(cdng)(cdng)：（菌种：枯草杆菌）：（菌种：枯草杆菌）：（菌种：枯草杆菌）：（菌种：枯草杆菌）做枯草杆菌的简单染色片做枯草杆菌的简单染色片做枯草杆菌的简单染色片做枯草杆菌的简单染色片安装目镜测微尺（已安装好）并用镜台测微尺在各物安装目镜测微尺（已安装好）并用镜台测微尺在各物安装目镜测微尺（已安装好）并用镜台测微尺在各物安装目镜测微尺（已安装好）并用镜台测微尺在各物镜下校正目镜测微尺镜下校正目镜测微尺镜下校正目镜

43、测微尺镜下校正目镜测微尺在油镜下测定在油镜下测定在油镜下测定在油镜下测定(cdng)(cdng)菌体大小：分别测菌体大小：分别测菌体大小：分别测菌体大小：分别测1010个菌的宽个菌的宽个菌的宽个菌的宽和长，求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺和长，求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺和长，求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺和长，求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺（油镜）下每格代表的长度，即得该菌的实际大（油镜）下每格代表的长度，即得该菌的实际大（油镜）下每格代表的长度，即得该菌的实际大（油镜）下每格代表的长度，即得该菌的实际大小。小。小。小。实验方法实验方法实验方法实验方法(fngf(fn

44、gf)和步骤：和步骤：和步骤：和步骤：第38页/共77页第三十九页，共77页。实验实验实验实验(shyn)(shyn)结果结果结果结果:1.显微镜直接显微镜直接(zhji)计数：计数：计算并报告该菌悬液的浓度：计算并报告该菌悬液的浓度：（写成科学（写成科学(kxu)记数法，保留记数法，保留2位有效数字）位有效数字）表表1：显微镜直接计数的结果：显微镜直接计数的结果A表示五个中方格中的总菌数；表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。表示菌液稀释倍数。各中格菌数各中格菌数A 两室平均两室平均A值值 B 菌液浓度菌液浓度（菌数（菌数/ml）12345第一室第一室第二室第二室第39页/共77页第

45、四十页，共77页。2.微生物大小微生物大小(dxio)的测定：的测定：接物镜接物镜物镜放大倍数物镜放大倍数目镜测微尺格数目镜测微尺格数 物镜测微尺格数物镜测微尺格数目尺每格的长度（目尺每格的长度（m）低倍镜低倍镜高倍镜高倍镜油镜油镜表表2：用镜台：用镜台(jngti)测微尺校正目镜测微尺的结果测微尺校正目镜测微尺的结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均平均宽（格）宽（格）长（格）长（格）表表3：枯草杆菌细胞大小：枯草杆菌细胞大小(dxio)测定的结果测定的结果计算出枯草杆菌的大小：宽计算出枯草杆菌的大小：宽=m 长长=m 表示为：宽表示为：宽长长（保留小数点后保留小数点后1位）位

46、）第40页/共77页第四十一页，共77页。根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误差主根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？2.为什么更换不同放大为什么更换不同放大(fngd)倍数的目镜或物镜时，倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？思考题：思考题：分析分析(fnx)及讨及讨论：论：第41页/共77页第四十二页，共77页。实验六实验六实验六实验六 微生物的分离纯化及生理微生物的分离纯化及生理微生物的分离纯化及生理微生物的分离纯化

47、及生理(shngl)(shngl)生化生化生化生化试验试验试验试验了解培养基的配制原理和方法，了解培养基的配制原理和方法，掌握掌握(zhngw)其配制过程；其配制过程；了解干热灭菌法和高压蒸汽灭了解干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的原理，掌握菌法的原理，掌握(zhngw)其其灭菌方法。灭菌方法。实验实验(shyn)项目号：项目号：80000039105实验实验(shyn)类型类型：综合性综合性 实验目的实验目的：、培养基的配制及灭菌、培养基的配制及灭菌（P15-28）第42页/共77页第四十三页，共77页。基本原理：基本原理：培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖和积累代谢培养基是人工配制的适合微生物

48、生长繁殖和积累代谢产物的营养基质，包括碳源、氮源、能源、矿物元素、产物的营养基质，包括碳源、氮源、能源、矿物元素、生长因子和水等生长要素。不同微生物对营养物质和生长因子和水等生长要素。不同微生物对营养物质和pH的要求是不同的。培养基在使用之前的要求是不同的。培养基在使用之前(zhqin)必必须要处于无菌状态，故要先灭菌。须要处于无菌状态，故要先灭菌。灭菌方法：高压蒸汽灭菌法（灭菌方法：高压蒸汽灭菌法（121/20min）烘箱干热灭菌法（烘箱干热灭菌法（160-170/1-2h）原理及适用物品？原理及适用物品？第43页/共77页第四十四页，共77页。根据来源可分为根据来源可分为根据来源可分为根据

49、来源可分为:天然培养基天然培养基天然培养基天然培养基(complex/undefined medium):(complex/undefined medium):合成培养基合成培养基合成培养基合成培养基(defined medium):(defined medium):半合成培养基半合成培养基半合成培养基半合成培养基(semi-defined medium)(semi-defined medium)：根据使用目的可分为根据使用目的可分为根据使用目的可分为根据使用目的可分为:（生物）鉴别培养基（生物）鉴别培养基（生物）鉴别培养基（生物）鉴别培养基(differential medium)(diff

50、erential medium)选择选择选择选择(xunz)(xunz)培养基培养基培养基培养基(selected medium)(selected medium)：根据形状可分为根据形状可分为根据形状可分为根据形状可分为:固体培养基（固体培养基（固体培养基（固体培养基（solid mediumsolid medium）：）：）：）：半固体培养基（半固体培养基（半固体培养基（半固体培养基（semi-solid mediumsemi-solid medium）：）：）：）：液体培养基（液体培养基（液体培养基（液体培养基（liquid medium liquid medium）：）：）：）：培养基