微生物标本的采集方法学习教案.pptx
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1、会计学1微生物标本微生物标本(biobn)的采集方法的采集方法第一页,共53页。基本基本(jbn)原则原则1、及时采集微生物标本作病原学检查2、在抗菌药物使用前采集标本3、采样时严格执行无菌操作4、采样后立即送检5、棉拭子标本宜用运送培养基6、标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂7、送检标本时应注明来源(liyun)和检验目的8、混有正常菌群的标本,不可置肉汤培养第2页/共53页第二页,共53页。如何提高如何提高(t go)细菌阳性检出细菌阳性检出率率、标本采集时机、标本采集时机、标本采集方法、标本采集方法、标本的质与量、标本的质与量、标本的运送与保存、标本的运送与保存、镜检筛选、镜检筛选(s
2、hixu(shixu n)n)合格标本合格标本、高质量、多种分离培养基、高质量、多种分离培养基培养环境培养环境第3页/共53页第三页,共53页。一、痰标本一、痰标本(biobn)采集采集关于咳痰标本 在抗菌素应用前采集标本 标本采集后12h内必须立即进行实验室处 理 痰标本应用最早且广泛(gungfn),但也是最受争议的标本 采集标本过程中要有专业的医务人员指导第4页/共53页第四页,共53页。使下呼吸道感染使下呼吸道感染(gnrn)病原诊断成为难题病原诊断成为难题 细菌(包括防线细菌(包括防线(fngxin)(fngxin)菌与奴卡菌,厌氧菌与分枝杆菌)菌与奴卡菌,厌氧菌与分枝杆菌)真菌(包
3、括肺孢子菌)真菌(包括肺孢子菌)病毒病毒 支原体、衣原体与立克次体支原体、衣原体与立克次体 原虫原虫 寄生虫寄生虫第5页/共53页第五页,共53页。n n痰标本采集自然咳痰标本n n患者清晨起床后,用清水或冷开水反复漱口去除过量的口腔细菌,有假牙者应取下假牙n n先轻咳,咳出口腔中的痰液弃去,再用力深咳,从气管咳出呼吸道深部的痰,直接吐入清洁、无菌的容器(rngq)中n n无痰可用3%-5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰n n也可用物理疗法。体位引流等法取痰第6页/共53页第六页,共53页。几种下呼吸道直接采集几种下呼吸道直接采集(cij)的标本的标本 经气管穿刺(chunc)吸引经胸壁针
4、刺吸引经支气管镜采样 支气管肺泡灌洗 经支气管镜直接吸引开胸肺活检经人工气道吸引分泌物 第7页/共53页第七页,共53页。痰标本采集吸痰吸痰:无法咳痰或不合作者、人工气道者,戴好无菌手套,无菌集痰器分别连接吸引器和无菌吸痰管。按吸痰法将痰吸入无菌集痰器内,加盖送检(sn jin)经支气管镜直接吸引:注意严格无菌操作第8页/共53页第八页,共53页。二、尿标本的正确采集二、尿标本的正确采集(cij)清洁中段尿标本清洁中段尿标本n n应保证尿液在膀胱内至少停留应保证尿液在膀胱内至少停留4h4h以上。最好留取早晨清洁中段尿标本以上。最好留取早晨清洁中段尿标本(biobn)(biobn)n n方法:患
5、者睡前少饮水,清晨起床后先用肥皂水清洗会阴部,女性应用手分开方法:患者睡前少饮水,清晨起床后先用肥皂水清洗会阴部,女性应用手分开大阴唇,男性上翻包皮,仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围;开始排尿,将前大阴唇,男性上翻包皮,仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围;开始排尿,将前段尿排出,弃去,不要停顿,直接将中段尿段尿排出,弃去,不要停顿,直接将中段尿10-20ml10-20ml直接排入专用的无菌容器中,直接排入专用的无菌容器中,立即送检。容器内是无菌的,所以打开容器盖后,应拿在手中,不要随意乱放。立即送检。容器内是无菌的,所以打开容器盖后,应拿在手中,不要随意乱放。记录留取标本记录留取标本(biobn
6、)(biobn)的时间,保证在留取标本的时间,保证在留取标本(biobn)(biobn)后后1 1小时内送至检验科小时内送至检验科第9页/共53页第九页,共53页。n n尿标本正确采集-留置导尿(do nio)n n消毒导尿(do nio)管外部(接头上端近会阴部),按无菌操作方法用注射器穿刺导尿(do nio)管吸取尿液10ml,操作时注意防止混入消毒剂(推荐用三步消毒法:75%酒精-2%碘酒-75%酒精脱碘待干)n n注意不能从收集袋中采集尿液第10页/共53页第十页,共53页。三、血培养三、血培养(piyng)标本采集标本采集1 1、手清洁:无明显污染使用速干手消毒液进行手卫生、手清洁:
7、无明显污染使用速干手消毒液进行手卫生2 2、血培养瓶口消毒:、血培养瓶口消毒:75%75%酒精消毒一遍,待干酒精消毒一遍,待干60s60s3 3、静脉穿刺消毒:推荐用三步法、静脉穿刺消毒:推荐用三步法 用用75%75%酒精消毒采集部位酒精消毒采集部位 用用2%2%碘酒从穿刺点向外画圆消毒,至消毒区域直径达碘酒从穿刺点向外画圆消毒,至消毒区域直径达5cm5cm以上,涂擦穿刺皮肤以上,涂擦穿刺皮肤2 2遍,遍,待干待干 75%75%酒精脱碘:用酒精脱碘:用75%75%酒精由内向外涂抹酒精由内向外涂抹(tm(tm)去碘酒液,待酒精挥发干燥后采血去碘酒液,待酒精挥发干燥后采血第11页/共53页第十一页
8、,共53页。操作操作(cozu)(cozu)注意事项:注意事项:从静脉采血,不建议从动脉采血从静脉采血,不建议从动脉采血 用注射器无菌穿刺取血后,勿换针头(如果行第二次穿刺,应换针头)直接注用注射器无菌穿刺取血后,勿换针头(如果行第二次穿刺,应换针头)直接注入消毒后的血培养瓶入消毒后的血培养瓶 血抽到培养瓶后,轻轻颠倒混匀以防血液凝固,立即送检,切勿冷藏!血抽到培养瓶后,轻轻颠倒混匀以防血液凝固,立即送检,切勿冷藏!多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。除非无法作多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。除非无法作静脉穿刺取血,否则不应从留置导管内取血。静脉穿刺
9、取血,否则不应从留置导管内取血。抽血前应将标签贴于血培养瓶颈上,标签内容包括病人基本信息、采血时间、抽血前应将标签贴于血培养瓶颈上,标签内容包括病人基本信息、采血时间、采血部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上,否则仪器无法识别。采血部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上,否则仪器无法识别。第12页/共53页第十二页,共53页。血培养血培养血培养血培养(piy(piy ng)ng)次数和采血时间次数和采血时间次数和采血时间次数和采血时间n n采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行,在患者发热期间越早越好,以发采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行,在患者发热期间越早越好,以发热高峰前热高峰前1
10、h1h内或病人寒战和发热开始内或病人寒战和发热开始(kish)(kish)时采集为宜。在时采集为宜。在1010分钟内与不同部分钟内与不同部位采集外周血位采集外周血2323份培养(有助于判断是污染还是感染,提高检出阳性率)份培养(有助于判断是污染还是感染,提高检出阳性率)n n注意报阳时间,阳性瓶数。注意报阳时间,阳性瓶数。n n在采取血培养后的在采取血培养后的2-52-5天内,不需要再重复采取血培养,因为进行治疗后的天内,不需要再重复采取血培养,因为进行治疗后的2-2-5-5天血液中的感染细菌不会马上消失。天血液中的感染细菌不会马上消失。第13页/共53页第十三页,共53页。四、对可疑中心四、
11、对可疑中心四、对可疑中心四、对可疑中心(zhngxn)(zhngxn)(zhngxn)(zhngxn)静脉导管相关血流感染静脉导管相关血流感染静脉导管相关血流感染静脉导管相关血流感染1、保留导管2、外周静脉血一份,中心静脉导管血1分,不用弃去导管起始部分的血液。3、拔除导管:4、2个外周静脉血、导管尖端(jindun)5cm(在进行中心静脉导管血和周围静脉血培养时应记录报阳时间)第14页/共53页第十四页,共53页。血管内导管尖段标本的采集、送检程序用75%酒精清洁(qngji)导管周围皮肤无菌操作移动导管,剪取尖端末端5cm,直接置入无菌试管内或直接置入血平板内。立即送检(不超过15min)
12、,防止干燥如因怀疑CRBSI移除皮下埋置式静脉输液港,港内容物及导管尖端作定量培养。第15页/共53页第十五页,共53页。血培养血培养(piyng)常见错误常见错误n n 培养瓶放冰箱n n 瓶橡胶塞上(si shn)小盖未打开直接穿刺n n 抽血后未及时混匀血液凝固第16页/共53页第十六页,共53页。五、如何正确运送五、如何正确运送(yn sn)标标本本1 1、运送培养基温度应适当、运送培养基温度应适当 2 2、原则、原则(yunz)(yunz):保持细菌活力:保持细菌活力 3 3、血培养、脑脊液标本:应及时送检;不能及时送检的标本应置温箱或室、血培养、脑脊液标本:应及时送检;不能及时送检
13、的标本应置温箱或室温中,切不能放入冰箱中保存(除病毒、霉菌、分支杆菌培养样本置温中,切不能放入冰箱中保存(除病毒、霉菌、分支杆菌培养样本置4 4)4 4、痰、尿等标本:如不能及时送检可置冰箱,以抑制细菌生长,但时间、痰、尿等标本:如不能及时送检可置冰箱,以抑制细菌生长,但时间不能超过不能超过6h.6h.第17页/共53页第十七页,共53页。六、各种标本六、各种标本(biobn)储存的储存的环境环境 标本采取后应该标本采取后应该(ynggi)(ynggi)立即送检,如不能立即送检,储立即送检,如不能立即送检,储 存的环境要求:存的环境要求:储存环境标本来源储存环境标本来源4 4冰箱冰箱-痰、尿液
14、、粪便、活检组织、气枪冲洗物、痰、尿液、粪便、活检组织、气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等 室温(室温(2525)-血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、喉、血管血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。导管尖、体液、厌氧菌培养标本。第18页/共53页第十八页,共53页。美国美国(mi u)的理念的理念n n19701970年以前,美国的医院定期对空气和环境表面(如地面、墙壁、台面)进行培养。年以前,美国的医院定期对空气和环境表面(如地面、墙壁、台面)进行培养。到了到了19701970年,年,CDCCDC和
15、美国医院协会(和美国医院协会(AHAAHA)主张停止对环境的常规培养,因为医院感)主张停止对环境的常规培养,因为医院感染发生率与空气或环境表面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生染发生率与空气或环境表面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生物含量的允许水平也没有有意义的标准物含量的允许水平也没有有意义的标准(biozh(biozh n)n)。1970-19751970-1975年,美国有年,美国有25%25%的医院减的医院减少了这种常规的环境培养工作少了这种常规的环境培养工作-一个已经持续的趋势。一个已经持续的趋势。第19页/共53页第十九页,共53页。什么什么(sh
16、n me)情况下要求进行环情况下要求进行环境采样境采样四种状况下要求进行环境采样:四种状况下要求进行环境采样:一、是当环境中的宿主或媒介物被认为在一、是当环境中的宿主或媒介物被认为在疾病传播中有流行病学意义时,提供疾病或疾病传播中有流行病学意义时,提供疾病或感染爆发感染爆发(bof)(bof)的依据的依据 二、是在研究过程中进行适当的环境采样二、是在研究过程中进行适当的环境采样 三、是为了监测潜在的危险环境条件,确三、是为了监测潜在的危险环境条件,确认有害的化学或生物因素的存在,并验证危认有害的化学或生物因素的存在,并验证危险因素的成功消除险因素的成功消除 四、是为了质量保证(四、是为了质量保
17、证(QAQA)而采样,以)而采样,以评估改变感染控制措施取得的效果或是确保评估改变感染控制措施取得的效果或是确保设施或系统按照规范或预期结果执行。设施或系统按照规范或预期结果执行。第20页/共53页第二十页,共53页。一、物体表面一、物体表面(biomin)采样采样 物体表面细菌总数的检测物体表面细菌总数的检测(ji(ji n c)n c)评价评价 被污染程度被污染程度 主要依据主要依据 消毒效果消毒效果第21页/共53页第二十一页,共53页。物体物体(wt)表面采样表面采样-涂抹法涂抹法n n涂抹法:将5cm5cm的标准灭菌规格板,放在被检测物品表面,用浸有无菌生理盐水的棉拭子在规格板内来回
18、均匀涂抹整个方格,并随之转动棉拭子,剪去手接触部分,将棉拭子放入盛有10ml生理盐水的试管(shgun)中,充分振摇1min,作适量稀释后,接种于普通营养琼脂平板上进行计数,然后根据平板上菌落数得出物品表面每平方厘米的细菌数第22页/共53页第二十二页,共53页。第23页/共53页第二十三页,共53页。物体物体(wt)表面采样表面采样-斑贴法斑贴法n n斑贴法:按无菌操作方法将5cm5cm的无菌滤纸用灭菌生理盐水浸湿,均匀贴附与物体表面,1min取下放入盛有25ml灭菌生理盐水试管中,充分振摇1min,作适量稀释后,接种于普通营养琼脂平板(pngbn)上作菌落计数,同样得出物品表面每平方厘米的
19、细菌数第24页/共53页第二十四页,共53页。二、消毒物品表面二、消毒物品表面(biomin)的的监测:监测:1 1、采样时间:消毒处理后、采样时间:消毒处理后4 4小时内进行采样小时内进行采样2 2、采样面积:被采面积、采样面积:被采面积100100平方厘米,取全部表面;平方厘米,取全部表面;100 100平方厘米,取平方厘米,取100100平方厘米。平方厘米。3 3、采样方法:、采样方法:用用5cm*5cm5cm*5cm的标准灭菌规格板放在被检消毒物品表面,用含相应中和剂无菌洗脱的标准灭菌规格板放在被检消毒物品表面,用含相应中和剂无菌洗脱液(液(5ml)5ml)的棉拭子在规格板内横竖往返均
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