三七总皂苷渗透泵控释片的质量标准研究.pdf

《三七总皂苷渗透泵控释片的质量标准研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《三七总皂苷渗透泵控释片的质量标准研究.pdf（4页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、2010.05三七总皂苷（panax notoginsenoside，PNS）是五加科人参属植物三七根的主要活性提取部位，具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用，临床上主要用于心脑血管疾病的治疗1-4。三七总皂苷含有 20 余种皂苷成分，均属于达玛烷型四环三萜皂苷，其中，人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1是三七总皂苷中含量最高的两个成分，而三七皂苷 R1则是三七总皂苷的特征化合物5。根据文献报道，三七总皂苷注射剂应用于临床时有很小的溶血性，在高等动物的消化道中，PNS不能被吸收，故口服无溶血毒性，安全性较好6。三七总皂苷渗透泵控释

2、片（又名血塞通渗透泵控释片）具有零级释药特征，是一种新的预防和治疗心脑血管疾病的药物制剂。本文采用薄层色谱法鉴别人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rg1，采用高效液相色谱法测定处方中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1，对控制三七总皂苷渗透泵控释 基金项目 辽宁省教育厅科学 技术 研究 项目（项目编号2 0 0 6 0 3 5 7）：沈阳市科学技术计划项目（项目编号 1 0 8 1 2 4 8-1-0 0）；辽宁“百千万人才工程”培养经费资助。收稿日期 2 0 1 0-0 4-0 6zoot,2001,14：213-221.7 OIE.African swine fever in Be

3、ninJ.Dis Inf Off int Epizoot,2001,14：143-148.8 OIE.African swine fever in CongoJ.Dis Inf Off intEpizoot,2001,14：81-88.9 孙怀昌.不同非洲猪瘟病毒株 j5R 基因及其编码蛋白的比较J.中国预防兽医学报，1999，21（2）：117-119.10 Odemuyiwa S O,Adebayo I A,Ammer L W,et al.An outbreak of African swine fever in Nigeria.Virusisolation and molecular c

4、haracterization of the VP72gene of a first isolate from West AfricaJ.Virus-Genes,2000,20：139-142.11 王君玮，张玲，王志亮，等.非洲猪瘟传入我国的危害风险分析J.中国动物检疫，2009，26（3）：63-66.三七总皂苷渗透泵控释片的质量标准研究张胜1，段洪云2，朱鹏飞3，王程程2，刘宇2，陈立江2（1.辽宁省药物研究院，辽宁沈阳110015；2.辽宁大学药学院，辽宁沈阳110036；3.首都医科大学中医药学院，北京100069）中图分类号R284.1文献标识码A文章编号1672-9692(201

5、0)05-0065-04摘 要本试验建立三七总皂苷渗透泵控释片质量标准，采用薄层色谱法鉴别人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rg1，采用高效液相色谱法测定对三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1进行含量测定。试验结果：在薄层色谱中检出了人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rg1；在高效液相色谱中，三七皂苷 R1平均回收率为 99.9%（n=9），RSD为 1.00%，人参皂苷 Rg1平均回收率为 99.9%（n=9），RSD为 0.83%，人参皂苷 Rb1平均回收率为 99.4%（n=9），RSD为 0.76%。试验表明该鉴别方法专属性强，含量测定方法简便、准确，可有效控制三七总皂苷渗透泵控释片

6、的质量。关键词三七总皂苷渗透泵控释片；薄层色谱法；高效液相色谱；含量测定!试验综述652010.05片的质量具有重要意义。1材料与试药1.1 材料与试剂三七总皂苷渗透泵控释片（又名血塞通渗透泵控释片，自制）；三七皂苷 R1（0745-200008）、人参皂苷 Rg1（0703-200015）、人参皂苷 Rb1（0704-200115）、对照品（中国药品生物制品检定所）；薄层层析硅胶 GF254（青岛海洋生物制品厂）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。1.2 仪器与设备美国 Tsp 高效液相色谱仪；Tsp P-2000 泵、TspUV-1000UV-VIS 检测器；TspP

7、C1000 色谱工作站；色谱柱为 ODSC18 柱（1503.9 mm，5 m，大连依利特科学仪器有限公司）；RE 52-99 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DK-S22 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；JA-1003 型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限医疗设备厂）；KQ-5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。2薄层色谱法分别取自制的三七总皂苷渗透泵控释片 3批，每批 10 片，研细，分别取粉末 30 mg（相当于三七总皂苷 10 mg），精密称定，加甲醇 40ml，超声 10 min，放冷，过滤，滤液蒸干，置

8、 1ml 量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取人参皂苷 Rb1对照品约 3.5 mg 和人参皂苷 Rg1对照品约 2.5 mg，经 60 真空干燥 2 h，精密称定，分别置 1 ml 量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验7，精密吸取上述两种溶液各 2 l，分别点于同一以含 4%（W/V）磷酸氢二钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶GF254 薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液（60359）的下层溶液为展开剂，在 1020 温度下展开，取出，挥干有机溶剂，待板温度达 90 时取出，迅速喷以 10%硫酸乙醇溶液，于 105 加热至斑点

9、显色清晰，取出，放冷。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。试验结果表明，该鉴别方法专属性、重现性较好。3高效液相色谱法3.1 色谱条件色谱柱：ODSC18 柱（2504.6 mm，5 m）；流动相：A 为乙腈，B 为水；流速：1.0 ml/min；采用梯度洗脱法，08 min（2674），8104040 min（3466）；检测波长 203 nm；柱温：30；进样量 20 l。在该色谱条件下，三七皂苷 R1和人参皂苷 Rg1的保留时间分别为 5.484 min和 7.189 min，理论塔板数按人参皂苷 Rg1计为8 019，分离度2。从结果可以看出，三七总皂苷渗透泵控

10、释片中的三七皂苷 R1与人参皂苷 Rg1和其他组分达到了基线分离。3.2 溶液的制备3.2.1对照品溶液的制备分别精密称取三七总皂苷对照品三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1各约 6.0、2.5 和 2.5 mg，置 25 ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。3.2.2供试品溶液的制备取三七总皂苷渗透泵控释 10 片，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 ml，密塞，称定重量，精密加入甲醇适量，摇匀，超声处理10 min（超声频率 40 Hz，功率约为 60 W）溶解，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，密塞，摇匀，作为供

11、试品溶液。3.2.3阴性溶液的制备称取辅料适量照本品配制工艺（不加入三七总皂苷），配制阴性对照溶液，并将溶剂甲醇注入高效液相色谱仪中，经试验，溶剂与辅料对样品检测无干扰。3.3 专属性试验分别吸取三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1对照品、阴性样品及供试品溶液各 20 l，依法测定，见图 13，在此条件下，阴性对照对三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1测定无干扰，说明本方法专属性强。3.4 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液 3、4、5、6、7 ml 置 50 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，注入液相色谱仪，记录

12、色谱图，试验综述662010.05量取峰面积，以峰面积（A）对进样量（g）进行线性回归，三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷Rb1回归方程分别为：A=327 127.8W681.2（r=0.999 1）；A=406 964.1W+787.9（r=0.999 1）；A=262 563.9W5 498.7（r=0.999 6），三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂 Rb1分别在进样量 0.29810.695 6 g、1.276 82.979 2 g 和 1.153 92.692 5 g 范围内时，峰面积与进样量具有良好的线性关系。3.5 方法学考察3.5.1精密度试验精密吸取对照品溶液

13、10 l，连续进样 6 次，记录色谱图，量取峰面积，计算三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1的相对标准偏差分别为 1.86%、1.68%、1.60%。结果显示仪器的精密度良好。3.5.2重现性试验精密吸取供试品溶液 5 份，每份 10 l，共测定 5 次，依照 HPLC 测定方法，记录色谱图，量取峰面积，计算三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1的相对标准偏差分别为 1.89%、1.05%、1.13%。结果表明方法的重现性良好。3.5.3稳定性试验依照 HPLC 测定方法，精密吸取供试品溶液 5 份，分别在制备 0、3、6、9、12 h 进样，依照 HPLC 测定方法

14、，记录色谱图，量取峰面积，三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1的相对标准偏差分别为 1.79%、0.68%、1.09%。结果表明室温下 12 h 内峰面积无显著变化，溶液稳定。3.5.4回收率试验精密取供试品 5 ml 共 9 份置 10 ml 量瓶中，另精密称取三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1对照品各约 6.0、2.5 和2.5 mg，置 25 ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取此对照品溶液 0.5、1.0、1.5 ml，置 10 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，照“3.2.2”项下的方法制成供试品溶液，依HPLC 测定方法，结果三七皂苷

15、 R1平均回收率为99.9%（n=9），RSD 为 1.00%；人参皂苷 Rg1平均回收率为 99.9%（n=9），RSD 为 0.83%；人参皂苷Rb1平均回收率为 99.4%（n=9），RSD 为 0.76%。3.6 样品的含量测定分别称取三批三七总皂苷渗透泵控释片，照“3.2.2”项下的方法制备供试品溶液，依照 HPLC 测定方法，含量测定结果见表 1。批号123三七皂苷 R1(l/ml)29.328.828.6人参皂苷 Rg1(l/ml)103.6103.0103.4人参皂苷 Rb1(l/ml)106.9102.4105.6三七总皂苷含量（%）101.7101.2100.9表 1三批样

16、品含量测定结果图 1 三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1对照品图 3三七总皂苷渗透泵控释片图 2阴性对照图试验综述672010.054讨论4.1 供试品的制备参考资料，三七含量测定的供试品溶液采用甲醇超声溶解8-9。因此，本试验分别考察了超声时间和超声频率对提取效果的影响，结果表明超声时间为 10 min、超声频率为40 Hz 即可提取完全。4.2 色谱条件的确定流动相的选择：由于三七总皂苷中成分极性差别较大，同时，以 A 乙腈；B 水为流动相10。参考文献，试验不同梯度条件，最后确定，流动相 AB 08 min（2674），8104040 min（3466），三七总皂苷成分

17、40 min内流出色谱柱，谱图上各主要色谱峰分离度好，保留时间适中，因此确定为最终色谱条件。检测波长的确定：由于三七总皂苷类成分大多为紫外末端吸收，流动相 B 乙腈在 200 nm 左右亦有吸收，干扰较大；同时参考文献8-10，确定 203 nm为检测波长。参考文献 1 韩一波.三七总皂苷的研究进展 J .中国药师，2 0 0 5，8（3）：1 9 7-1 9 9.2 黄恩，金宏伟，郑永.三七总皂苷对严重烫伤大鼠心肌的保护作用研究 J .中国药业，2 0 0 7，1 6（2 1）：1 0-1 1.3 C h a nP,T h a n a sCN,T r o m l i n s o nB.P r

18、 o t e c t i v ee f f e c t so ft r i l i n o l e i ne x t r a c t e df r o mP a n a xn o t o g i n s e n g a g a i n s t c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e J .P l a n t a M e d,2 0 0 2,6 8：1 0 2 4.4 唐敏.三七总皂苷治疗原发性高血压伴左心功能不全的临床观察 J .世界中西医结合杂志，2 0 0 8，3（1）：4 3-4 4.5 傅秋生，许小红.H P L C 法测定三七总皂苷中三种皂

19、苷的含量 J .解放军药学学报，2 0 0 8，2 5（1）：8 4-8 6.6 秦枫，葛竹兴，郁杰，等.三七总皂苷的溶血性研究 J .黑龙江畜牧兽医，2 0 0 8，3（9）：8 9-9 0.7 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2 0 0 5 年版二部 S .北京：化学工业出版社，2 0 0 5：附录 V B 2 7.8 周玉新，袁永生，高霞，等.三七药材及其制剂指纹图谱研究 J .中国中药杂志，2 0 0 1，2 6（2）：1 2 2.9 王梅，范亚刚.R P-H P L C 梯度洗脱法同时测定三七总皂苷及血栓通注射液中三种皂苷的含量 J .药物分析杂志，2 0 0 0，2 0

20、（6）：4 1 0.1 0 赖宇红.三七总皂苷 H P L C 研究方法及应用 D .广州中医药大学硕士学位论文.广州，广州中医药大学，2 0 0 5.Quality standard for Osmotic Pump ControlledRelease Tablets of panax notoginosideZHANG Sheng1,DUAN Hongyun2,ZHU Pengfei3,WANG Chengcheng2,LIU Yu2,CHEN Lijiang2(1.Liaoning Institute of Medicine,Liaoning Shenyang 110015;2.Depa

21、rtment of Pharmacy,Liaoning University,Liaoning Shenyang 110036;3.School of Chinese Medicine,Capital Medical University,Beijing 100069)AbstractT h ee x p e r o m e n te s t a b l i s h e dt h eq u a l i t ys t a n d a r df o ro s m o t i cp u m pc o n t r o l l e dr e l e a s et a b l e t so fp a n

22、a xn o t o g i n o s i d e.M e t h o d sT h i nL a y e rc h r o m a t o g r a p h y(T L C)w a su s e df o rG i n s e n o s i d eR b1a n dG i n s e n o s i d eR g1;G i n s e n o s i d eR b1G i n s e n o s i d eR g1a n dN o t o g i n s e n o s i d eR1w a sa n a l y z e db yh i g hp e r f o r m a n c e

23、 l i q u i d r o m a t o g r a p h y(H P L C);R e s u l t s:G i n s e n o s i d e R b1a n dG i n s e n o s i d e R g1c o u l d b e i d e n t i f i e d b y T L C m e t h o d.A v e r a g e r e c o v e r y r a t e f o rN o t o g i n s e n o s i d eR1:9 9.9(n=9),R S D=1.0 0;a v e r a g er e c o v e r yr

24、 a t ef o rG i n s e n o s i d eR g1:9 9.9(n=9),R S D:0.8 3;a n da v e r a g er e c o v e r yr a t ef o rG i n s e n o s i d eR b1:9 9.4%(n=9),R S D=0.7 6%.T h em e t h o dw a sr e l i a b l e，a c c u r a t ea n ds p e c i f i c,c o u l db eu s e di nq u a l i t yc o n t r o lo fo s m o t i cp u m pc o n t r o l l e dr e l e a s et a b l e t so fp a n a xn o t o g i n o s i d e.Key wordsO s m o t i cp u m pc o n t r o l l e dr e l e a s et a b l e t so fp a n a xn o t o g i n o s i d e;T L C;H P L C;C o n t e n td e t e r m i n a t i o n!试验综述68