动物体细胞培养.ppt

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1、2.2 动物细胞工程（第一课时）动物细胞工程（第一课时）专题2 细胞工程东江中学东江中学 生物科组生物科组一个大面积烧伤的病人，自体健康皮肤非常有限，使一个大面积烧伤的病人，自体健康皮肤非常有限，使用其他人皮肤会产生排异反应，那么怎么才能获得大用其他人皮肤会产生排异反应，那么怎么才能获得大量的自体健康皮肤？量的自体健康皮肤？体外培养人体细胞构建的人造皮肤体外培养人体细胞构建的人造皮肤动物细胞工程动物细胞工程 其中，动物细胞培养技术是其他其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段常用的技术手段动物细胞培养动物细胞培养动物细胞

2、核移植动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体离体的植物器官、离体的植物器官、组织、细胞组织、细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体植物组织培养植物组织培养动物细胞培养和植物细胞一样吗？动物细胞培养和植物细胞一样吗？一、动物细胞培养一、动物细胞培养概念：动物细胞培养就概念：动物细胞培养就是从动物机体内取出相是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。些细胞生长和增殖。思考思考1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做、为什么选

3、用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？3、用什么方法对动物组织进行处理？说明动物细胞、用什么方法对动物组织进行处理？说明动物细胞间的物质主要是什么成分？间的物质主要是什么成分？4、用胃蛋白酶可以吗？、用胃蛋白酶可以吗？5、用蛋白酶处理这一过程需要控制时间吗？、用蛋白酶处理这一过程需要控制时间吗？6、体外培养的细胞有何特点？、体外培养的细胞有何特点？动物细胞生长特性动物细胞生长特性细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。在瓶

4、壁上，称为细胞贴壁。要求：要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。毒、易于贴附。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。这种现象称为细胞的接触抑制。细胞贴壁过程细胞贴壁过程继续思考继续思考7、什么是原代培养？、什么是原代培养？8、什么是传代培养？、什么是传代培养？9、传代培养为什么要在、传代培养为什么要在10代以内？代以内？10代以代以后会有什么现象？后会有什么现象？动物组织用酶消化后的初次培养。动物组织用酶消化后的初次

5、培养。将原代细胞重新用酶消化后分瓶继续培养。将原代细胞重新用酶消化后分瓶继续培养。一般来说，细胞在传至一般来说，细胞在传至10至至50代的时候，增殖逐渐缓慢，代的时候，增殖逐渐缓慢，以至于完全停止，这时，部分细胞的细胞核型可能会以至于完全停止，这时，部分细胞的细胞核型可能会发生变化，获得不死性。所以，正常细胞培养通常在发生变化，获得不死性。所以，正常细胞培养通常在10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型代以内，以保持细胞正常的二倍体核型动物细胞培养过程动物细胞培养过程取动物组织取动物组织处理组织处理组织制成细胞悬液制成细胞悬液转入培养液中转入培养液中（原代培养）（原代培养）传代培养传代培养动物胚

6、胎或幼龄个体的器官或组织动物胚胎或幼龄个体的器官或组织剪碎、用胶原蛋白或是胰蛋白酶剪碎、用胶原蛋白或是胰蛋白酶原代培养原代培养：动物组织用酶消化后的初次培动物组织用酶消化后的初次培养。养。传代培养传代培养：将原代细胞重新用酶消化后分瓶将原代细胞重新用酶消化后分瓶继续培养。继续培养。（10代左右）代左右）细胞贴壁生长、细胞接触抑制细胞贴壁生长、细胞接触抑制动物细胞培养条件动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血

7、清等清等）3、温度和、温度和PH 温度温度36.5+0.5度，pH7.27.44、气体环境、气体环境 O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？培养基有何独特之处？2、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？为什么？终培养成新个体？为什么？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分

8、中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多思考思考3、动物细胞培养需要经过脱分化的过程吗？、动物细胞培养需要经过脱分化的过程吗？一般而言，动物细胞培养不需要脱分化的过程一般而言，动物细胞培养不需要脱分化的过程概念：动物细胞培养就是从动物机体内取出相概念：动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。动物细胞培养概念理解动物细胞培养概念理解概念：动物细胞培养就是从动物机体内概念：动物细胞培养就是从动物机体内取出

9、相关的组织，将它分散成单个细胞，取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。胞生长和增殖。原理：细胞增殖原理：细胞增殖动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等克隆抗体等健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。用于植皮。用于检测有毒物质用于检测有毒物质用于生理、病理、药理等方面的研究，为治用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据疗和预防疾病提供理论依据练一练练一练

10、1、用于动物细胞培养的组织和细胞大都、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞组织，其主要原因是这样的组织细胞 A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.取材十分方便取材十分方便 D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D小试牛刀小试牛刀1、在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞、在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面分裂生长到细胞表面 时，细胞会时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数是。此时，瓶壁

11、上形成的细胞层数是 。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是要用酶处理，可用的酶是 。相互接触相互接触 接触抑制接触抑制 单层（或一层）单层（或一层）胰蛋白酶胰蛋白酶 2、随着细胞传代次数的增多，绝大部分细、随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现胞分裂停止，进而出现 的现的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性细胞，该种细胞的黏着性 ，细胞膜，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量表面蛋白质（糖蛋白）的量 。衰

12、老甚至死亡衰老甚至死亡 不死性不死性 降低降低 减少减少 3、现用某种大分子染料，对细胞进行染色、现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是色，原因是 。4、检查某种毒物是否能改变细胞染色体的、检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到数目，最好选用细胞分裂到 期的细期的细胞用显微镜进行观察。胞用显微镜进行观察。由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，故活细胞不能着色（或由于死细

13、胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）大分子染料能够进入死细胞内而着色）中中 5、在细胞培养过程中，通常在、在细胞培养过程中，通常在 条件条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中 的活性降低，细胞的活性降低，细胞 的速率降低。的速率降低。6、给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，、给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作组织当作 进行攻击。进行攻击。冷冻（或超低温、液氮）冷冻（或超低温、液氮）酶酶 抗原抗原 新陈代谢新陈代谢 比较项目比较项目植物组织培养

14、植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基成分培养基成分培养结果培养结果细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基营养物质营养物质 植物激素植物激素营养物质营养物质 动物血清动物血清植物体或植物体或细胞产品细胞产品大量产生细胞或大量产生细胞或细胞产物细胞产物植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较2.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（于（）A.培养基不同；培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。养成植株。A