饲料用玉米质量检测精.ppt

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1、饲料用玉米质量检测第1页，本讲稿共40页前言前言n本标准根据我国具体情况，选取容重、粗蛋白质、不完善粒作为饲料用玉米的分等级指标；以水分、生霉 粒作为限制性指标；要求色泽、气味正常。n本标准没有采用行业标准NY/T114-1989饲料用玉米中的粗灰分、粗纤维指标。n本标准中水分指标定为小于或等于14%。n本标准中抽样及色泽、气味、容重、不完善粒、杂质测定、检验规则、包装、运输和贮存等均统一由GB13531999玉米执行。第2页，本讲稿共40页范围范围n本标准规定了饲料用玉米的定义、要求、抽样、检验方法、检验规则、包装、运输和贮存。n本标准适用于收购、贮存、运输、加工、销售的商品饲料用玉米。第3

2、页，本讲稿共40页引用标准引用标准n下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。n本标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。第4页，本讲稿共40页标准采用的定义标准采用的定义1容重容重n容重：容重：粮食籽粒在单位容积内的质量，以克/升(g/L)表示。第5页，本讲稿共40页标准采用的定义标准采用的定义2不完善粒不完善粒n不完善粒：不完善粒包括下列受到损伤但尚有饲用不完善粒：不完善粒包括下列受到损伤但尚有饲用价值的玉米粒。价值的玉米粒。n虫蚀粒：被虫蛀蚀，伤及胚或胚乳的颗粒。n病斑粒：粒面带有病斑，伤及胚或胚乳的颗粒。

3、n破损粒：籽粒破损达体积五分之一（含）以上的颗粒。n生芽粒：芽或幼根突破表皮的颗粒。n生霉粒：粒面生霉的颗粒。n热损伤粒：受热后外表或胚显著变色和损伤的颗粒。第6页，本讲稿共40页标准采用的定义标准采用的定义3杂质杂质n杂质：杂质：无法通过直径3.0mm圆孔筛的物质；无饲用价值的玉米；玉米以外的其他物质。n色泽、气味、容重、不完善粒、杂质测定按照GB1353执行。第7页，本讲稿共40页标准采用的定义标准采用的定义4粗蛋白质粗蛋白质n粗蛋白质粗蛋白质：含氮量乘以6.25n抽样按照GB1353执行。n水分含量测定按照GB/T6435执行。n含量测定按照GB/T6432执行。第8页，本讲稿共40页等

4、级等级容重容重g/L（干基）（干基）粗蛋白质粗蛋白质%不完善粒不完善粒%水分水分%杂质杂质%色泽、气味色泽、气味总量总量其中生霉粒其中生霉粒171010.05.02.014.01.0正常正常26859.06.52.014.01.0正常正常36608.08.02.014.01.0正常正常饲料用玉米质量指标饲料用玉米质量指标第9页，本讲稿共40页检验规则和包装运输检验规则和包装运输n检验规则检验规则检验规则按照GB1353执行n包装、运输和贮存包装、运输和贮存包装、运输和贮存按照GB1353执行第10页，本讲稿共40页玉米品种与利用玉米品种与利用n我国玉米国家级质量标准有三个，分别是最基础的玉米国

5、标、我国玉米国家级质量标准有三个，分别是最基础的玉米国标、饲料用玉米国标以及工业用玉米国标。这三个标准既相互联系饲料用玉米国标以及工业用玉米国标。这三个标准既相互联系又各有特点。玉米国标是大宗玉米的通用标准，广泛适用于商又各有特点。玉米国标是大宗玉米的通用标准，广泛适用于商品玉米的收购、贮存、运输、加工以及销售。而饲料用玉米标品玉米的收购、贮存、运输、加工以及销售。而饲料用玉米标准和工业用玉米标准针对性更强，在玉米国标的基础上，又有准和工业用玉米标准针对性更强，在玉米国标的基础上，又有一些变化和调整。这三个标准共同点是以水分、杂质、不完善一些变化和调整。这三个标准共同点是以水分、杂质、不完善粒

6、、生霉粒等作为衡量玉米品质的主要指标；其不同点在于饲粒、生霉粒等作为衡量玉米品质的主要指标；其不同点在于饲料用玉米除保留容重等主要指标外，还增加了粗蛋白质这一技料用玉米除保留容重等主要指标外，还增加了粗蛋白质这一技术指标，而工业用玉米则舍弃了容重这一指标项，代之以淀粉术指标，而工业用玉米则舍弃了容重这一指标项，代之以淀粉指标来进行定等。总体看，容重、杂质、水分、不完善粒以及指标来进行定等。总体看，容重、杂质、水分、不完善粒以及生霉粒指标是衡量玉米质量最基本也是最重要的指标，具有广生霉粒指标是衡量玉米质量最基本也是最重要的指标，具有广泛代表性和权威性。泛代表性和权威性。第11页，本讲稿共40页玉

7、米品种与利用玉米品种与利用n我国玉米国家级质量标准有三个，分别是最基础的玉米国标、饲我国玉米国家级质量标准有三个，分别是最基础的玉米国标、饲料用玉米国标以及工业用玉米国标。这三个标准既相互联系又各料用玉米国标以及工业用玉米国标。这三个标准既相互联系又各有特点。玉米国标是大宗玉米的通用标准，广泛适用于商品玉米有特点。玉米国标是大宗玉米的通用标准，广泛适用于商品玉米的收购、贮存、运输、加工以及销售。而饲料用玉米标准和工业的收购、贮存、运输、加工以及销售。而饲料用玉米标准和工业用玉米标准针对性更强，在玉米国标的基础上，又有一些变化和用玉米标准针对性更强，在玉米国标的基础上，又有一些变化和调整。这三个

8、标准共同点是以水分、杂质、不完善粒、生霉粒等调整。这三个标准共同点是以水分、杂质、不完善粒、生霉粒等作为衡量玉米品质的主要指标；其不同点在于饲料用玉米除保留作为衡量玉米品质的主要指标；其不同点在于饲料用玉米除保留容重等主要指标外，还增加了粗蛋白质这一技术指标，而工业用容重等主要指标外，还增加了粗蛋白质这一技术指标，而工业用玉米则舍弃了容重这一指标项，代之以淀粉指标来进行定等。总玉米则舍弃了容重这一指标项，代之以淀粉指标来进行定等。总体看，容重、杂质、水分、不完善粒以及生霉粒指标是衡量玉米体看，容重、杂质、水分、不完善粒以及生霉粒指标是衡量玉米质量最基本也是最重要的指标，具有广泛代表性和权威性。

9、质量最基本也是最重要的指标，具有广泛代表性和权威性。第12页，本讲稿共40页玉米品种与利用玉米品种与利用n1硬粒型，也称燧石型。硬粒型，也称燧石型。n2马齿形，又叫马牙型。马齿形，又叫马牙型。n3半马齿型，也叫中间型。半马齿型，也叫中间型。n4粉质型，又名软质型。粉质型，又名软质型。n5甜质型，亦称甜玉米。甜质型，亦称甜玉米。n6甜粉型，籽粒上半部为角质胚乳；下半部为粉质胚乳。甜粉型，籽粒上半部为角质胚乳；下半部为粉质胚乳。中国很少栽培。中国很少栽培。n7蜡质型，又名糯质型。蜡质型，又名糯质型。n8爆裂型爆裂型n9有稃型有稃型第13页，本讲稿共40页玉米品种与利用玉米品种与利用n就玉米利用而言

10、，大体经历了作为人类口粮、牲畜饲料和工业就玉米利用而言，大体经历了作为人类口粮、牲畜饲料和工业生产原料的三个阶段生产原料的三个阶段n口粮消费占玉米总消费的比重大约在口粮消费占玉米总消费的比重大约在5%左右。左右。n饲料消费是玉米最重要的消费渠道，约占消费总量的饲料消费是玉米最重要的消费渠道，约占消费总量的70%左右。左右。n作为工业原料使用也是玉米消费的主要渠道。作为工业原料使用也是玉米消费的主要渠道。n库存亦是玉米需求的一种形式。处于粮食安全的考虑，各国库存亦是玉米需求的一种形式。处于粮食安全的考虑，各国总要储备一些粮食。世界玉米库存量一般占消费量比重的总要储备一些粮食。世界玉米库存量一般占

11、消费量比重的20%左右。左右。第14页，本讲稿共40页玉米品种与利用玉米品种与利用n随着全世界畜牧业的大发展，饲料工业得以迅速发展，全世界随着全世界畜牧业的大发展，饲料工业得以迅速发展，全世界饲料用玉米需求呈现增长趋势。在发展中国家表现为工业饲料饲料用玉米需求呈现增长趋势。在发展中国家表现为工业饲料消耗玉米增加，同时采用传统方式喂饲畜禽的饲料玉米消耗亦消耗玉米增加，同时采用传统方式喂饲畜禽的饲料玉米消耗亦在增加。在发达国家和地区表现为大量的玉米原粮被加工为工在增加。在发达国家和地区表现为大量的玉米原粮被加工为工业饲料。业饲料。n中国改革开放以来随着畜牧业的大发展，人民生活水平的提高，玉米中国改

12、革开放以来随着畜牧业的大发展，人民生活水平的提高，玉米工业的发展，玉米已成为粮食、饲料、工业原料和出口商品的多用途工业的发展，玉米已成为粮食、饲料、工业原料和出口商品的多用途作物。中国的玉米消费是作物。中国的玉米消费是80年代口粮比例占年代口粮比例占38%，消费玉米，消费玉米2588万吨，饲料用玉米占万吨，饲料用玉米占48%（工业饲料和传统饲料），消耗玉米（工业饲料和传统饲料），消耗玉米3269万吨，出口占万吨，出口占11%，出口玉米，出口玉米749万吨，工业原料和食品加工占万吨，工业原料和食品加工占3%，耗用玉米，耗用玉米205万吨左右。万吨左右。第15页，本讲稿共40页玉米贮藏玉米贮藏引起

13、样品成分变化的因素引起样品成分变化的因素n温度：高温时，水分及挥发性物质的散失加快，温度：高温时，水分及挥发性物质的散失加快，酶促反应也加快，虫、霉的侵染、滋生加速，样酶促反应也加快，虫、霉的侵染、滋生加速，样品成分易发生变化。品成分易发生变化。n湿度：微生物、虫害的生长发育均需要一定的湿度，湿度：微生物、虫害的生长发育均需要一定的湿度，多种化学反应都以水作为反应介质，且在干燥条件多种化学反应都以水作为反应介质，且在干燥条件下，微生物及害虫的生长发育及各种化学反应均受下，微生物及害虫的生长发育及各种化学反应均受到抑制。到抑制。n空气成分：主要指氧气的含量，在低氧或缺氧状态下，空气成分：主要指氧

14、气的含量，在低氧或缺氧状态下，微生物及害虫的生长发育基本处于停滞状态。微生物及害虫的生长发育基本处于停滞状态。n光照：光照引起某些物质的光分解，如脂肪酸发生酸光照：光照引起某些物质的光分解，如脂肪酸发生酸败变质等。败变质等。第16页，本讲稿共40页检验检验1容重（容重器测定）容重（容重器测定）n每种饲料都有固有的容重，测定饲料的容重，并于该饲料的标准容重比较，可以分辨出有无异物。n容重器测定：按照标准规定执行第17页，本讲稿共40页检验检验1容重（简易测定）容重（简易测定）n第一步：取样，沿纸折缝轻而仔细地放入1000毫升的量筒中，用刮铲调整容积，使之正好达到1000毫升为止。n第二步：倒出样

15、品并称重，则容重=W（试样重）/V（容积）n第三步：重复测定三次，取平均值。第18页，本讲稿共40页检验检验2不完善粒不完善粒n感官检测感官检测是指饲料或原料不加特殊处理，就按原样进行观察的一种直观检测方法。即通过感官（嗅、视、尝、触），以及借助基本工具（如筛子、放大镜）所进行的一般性外观检测。n虫蚀粒：被虫蛀蚀，伤及胚或胚乳的颗粒。n病斑粒：粒面带有病斑，伤及胚或胚乳的颗粒。n破损粒：籽粒破损达体积五分之一（含）以上的颗粒。n生芽粒：芽或幼根突破表皮的颗粒。n生霉粒：粒面生霉的颗粒。n热损伤粒：受热后外表或胚显著变色和损伤的颗粒。第19页，本讲稿共40页检验检验3杂质杂质n筛分法：使用一组筛

16、子，以各种筛份的饲料种类分辨出混合比例及各种夹杂物的混入状态。同时也可以通过感官检测的方法来检验杂质。n玉米中杂质：无法通过直径3.0mm圆孔筛的物质；无饲用价值的玉米；玉米以外的其他物质。第20页，本讲稿共40页检验检验4水分水分n自由水：风干或65烘干风干样品n结合水：105烘干绝干样品n玉米中水分小于等于14%第21页，本讲稿共40页检验检验5粗蛋白质粗蛋白质n玉米中的含氮量乘以6.25n玉米分级的指标之一第22页，本讲稿共40页检验检验6卫生指标检验卫生指标检验n有毒有害物质的来源有毒有害物质的来源n1、霉菌所产生的毒素n2、农药残留n3、原料本身的有毒物质n4、原料或产品中的某些重金

17、属及其它有毒元素如铅、砷、汞等。n5、混入的有毒物质n6、由于人类生活和生产活动产生“三废”污染环境而以多种渠道渗透到饲料或野生原料中的有毒有害物质n7、某些饲料添加物质第23页，本讲稿共40页检验检验6黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1n黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉在一定条件下新陈代谢时所产生的肝毒性代谢产物。饲料中污染的黄曲霉毒素有B1、B2、G1、G2等，其中最强的是B1，其次是G1、G2；黄曲霉毒素主要是损害动物的肝脏并有致癌作用，对动物的危害很大；因而在饲料检测中通常把测定黄曲霉毒素B1是否超标作为衡量饲料是否合格的一个重要依据。第24页，本讲稿共40页检验检验6黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1n1、

18、薄层层析法n2、液相色谱法n3、免疫化学分析方法第25页，本讲稿共40页检验检验6黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1n黄曲霉毒素B1检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫法定量测定谷物和饲料中的黄曲霉毒素B1的含量。第26页，本讲稿共40页检验检验6黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1nB1试剂盒检测的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对黄曲霉毒素抗体的捕获抗体。加入标准品或样品溶液、酶标记黄曲霉毒素（酶连接物）和黄曲霉毒素抗体。游离的黄曲霉毒素和酶连接物竞争黄曲霉毒素抗体结合位点（竞争性酶联免疫分析）。同时黄曲霉毒素抗体也与微孔板上固定的捕获抗体结合。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。在孔中加入底物/发色剂，结合的酶

19、连接物将发色剂转化为蓝色。加入反应终止液后颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处测量，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素浓度成反比。第27页，本讲稿共40页n黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1的快速检测的快速检测n1、原理：利用黄曲霉毒素在紫外光下发出亮而绿的光检测。、原理：利用黄曲霉毒素在紫外光下发出亮而绿的光检测。n2、仪器：紫外灯、暗箱。、仪器：紫外灯、暗箱。n3、步骤：、步骤：(1)样品样品800g放于紫外光暗箱里，打开光源，观察放于紫外光暗箱里，打开光源，观察亮而发绿点的数目。亮而发绿点的数目。n(2)取出样品，反面再看，反复多次。取出样品，反面再看，反复多次。n(3)发现亮而绿的点，分出该亮点区域，

20、平摊试样，再观察亮点发现亮而绿的点，分出该亮点区域，平摊试样，再观察亮点的数目。的数目。n(4)结果计算：结果计算：800g样品粉碎样品粉碎n1整粒整粒100ppm；1/4粒粒25ppm；1/2粒粒50ppm；粉碎后一个；粉碎后一个点点5ppm。n将观察的累计相加，即为黄曲霉总量。将观察的累计相加，即为黄曲霉总量。检验检验6黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1第28页，本讲稿共40页检验检验6玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮n玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮(Zearalenone)又称又称F-2毒素毒素,玉米烯酮。玉米烯酮。n玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌

21、、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。n玉米赤霉烯酮有许多种衍生物，植物中的玉米赤霉烯酮结玉米赤霉烯酮有许多种衍生物，植物中的玉米赤霉烯酮结构和对生物体的影响与霉菌产生的玉米赤霉烯酮作用是一构和对生物体的影响与霉菌产生的玉米赤霉烯酮作用是一致的。致的。第29页，本讲稿共40页检验检验6玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮n目前，一般都采取液相和气相色谱的方法进目前，一般都采取液相和气相色谱的方法进行测定。测定的方法较为复杂，对仪器的要行测定。测定的方法较为复杂，对仪器的要求也很高，但结果很准确。还有的是从分子求也很高，但结果很准确。还有的是从

22、分子生物学的角度进行分析，测定的范围在生物学的角度进行分析，测定的范围在5100gmL。第30页，本讲稿共40页检验检验6玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮n目前也探索出一套可供实验室简易测定的方法。称取目前也探索出一套可供实验室简易测定的方法。称取10g样品，先用样品，先用10mLlmolL的盐酸酸化，然后用的盐酸酸化，然后用100mL氯仿苹取氯仿苹取30min（可放在振荡器上振荡），（可放在振荡器上振荡），静置后过滤。取氯仿液静置后过滤。取氯仿液20mL，用，用lmolL氢氧化钠氢氧化钠50mL进行反提取两次。将提取液浓缩至进行反提取两次。将提取液浓缩至20mL左右，左右，再用氯仿液再用氯仿液50m

23、L萃取两次。浓缩至萃取两次。浓缩至2mL左右使用硅左右使用硅胶胶60板，用氯仿一丙酮（板，用氯仿一丙酮（2:98或或4：96）作为展开）作为展开剂，在紫外灯下观察亮点。如出现蓝色荧光，即含有剂，在紫外灯下观察亮点。如出现蓝色荧光，即含有玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮。第31页，本讲稿共40页检验检验6玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮n玉米赤霉烯酮试剂盒也可用于检测尿液玉米赤霉烯酮试剂盒也可用于检测尿液样品中玉米赤霉醇的残留含量样品中玉米赤霉醇的残留含量(检测下限检测下限为为150ng/l(ppt)。第32页，本讲稿共40页检验检验6呕吐毒素呕吐毒素n脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)又称呕吐毒

24、素，主要是由镰刀菌的某些种产又称呕吐毒素，主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物单端孢霉烯族化合物单端孢霉烯族化合物中的一种。中的一种。DON的主要产生菌是禾谷镰刀菌，据报道也有其它一些镰的主要产生菌是禾谷镰刀菌，据报道也有其它一些镰刀菌可产生刀菌可产生。nDON广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外，它还常与其它的霉卤毒素如

25、黄曲霉毒素共广泛的毒性效应。另外，它还常与其它的霉卤毒素如黄曲霉毒素共同污染农作物，进入人体后可以相互影响。由于同污染农作物，进入人体后可以相互影响。由于DON的危害严重，的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标的含量有严格的限量标准。我国谷物中准。我国谷物中DON的限量标准为的限量标准为10mgkg。第33页，本讲稿共40页检验检验6呕吐毒素呕吐毒素nDON的污染常出现于小麦、大麦、玉米和饲料中，因此绝大部分DON检测方法是针对这些物质，而分析谷物及饲料中的DON并非易事，许多因素必须给以良好控制。n薄层色谱法n酶联免疫吸附试

26、验(ELISA）n气相色谱n高效液相色谱n红外光谱分析n荧光极荧光极性免疫分析性免疫分析第34页，本讲稿共40页检验检验6呕吐毒素呕吐毒素n呕吐毒素试剂盒简介：呕吐毒素试剂盒简介：96孔/盒，适用于饲料，小麦、大麦、玉米等谷物中的呕吐毒素的测定nBeacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用水震荡萃取粉碎样品中的DON,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。加入呕吐毒素的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合呕吐毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养5分

27、钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的呕吐毒素浓度。第35页，本讲稿共40页检验检验6呕吐毒素呕吐毒素n呕吐毒素试剂盒产品特点：呕吐毒素试剂盒产品特点：n（1）快速只需要20分钟n（2）可半定量和定量分析n（3）检测范围：0.2-2.5ug/ml（ppm）n（4）可分析单个样品，也可成批分析样品(用于更经济的检测)n（5）操作简便易处理，作用效果佳n（6）专有的技术保证有更长的保质期n（7）美国农业部的认可方法n定性：根据样本孔颜色与标准品孔颜色进行比对n定量：运用酶标仪进行计算第36页，本讲稿共40页检验检

28、验6T-2毒素毒素nT-2毒素毒素是单端孢霉烯族毒素之一，也是是单端孢霉烯族毒素之一，也是毒性最强的真菌毒素，可由多种真菌产生，毒性最强的真菌毒素，可由多种真菌产生，在自然界中广泛存在，严重危害人畜健康。在自然界中广泛存在，严重危害人畜健康。nT-2毒素毒素由由Bamburg于于1968年首次分离年首次分离提纯并确认了化学结构。提纯并确认了化学结构。第37页，本讲稿共40页检验检验6T-2毒素毒素nBeaconT-2毒素试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇毒素试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的水震荡萃取粉碎样品中的T-2毒素毒素,过滤萃取物并稀释，然后

29、进行免疫学检测。加过滤萃取物并稀释，然后进行免疫学检测。加T-2毒素的酶标记物到测试微孔中，接下来加入毒素的酶标记物到测试微孔中，接下来加入标准及样品，标准及样品，T-2毒素抗体加入后反应开始，毒素抗体加入后反应开始，10分钟培养过程中，样品中的分钟培养过程中，样品中的T-2毒素及毒素及T-2毒素酶标毒素酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合酶标记分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合酶标记毒素。加入无色的底物溶液，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质，培养毒素。加入无色的底物溶液，所有结合的酶标记物使底

30、物转化成蓝色物质，培养5分钟，加入反应停分钟，加入反应停止液并且每个微孔中的颜色是可读的，未知浓度样品与标准物的颜色进行比较，就可以得到样品的止液并且每个微孔中的颜色是可读的，未知浓度样品与标准物的颜色进行比较，就可以得到样品的T-2毒素浓度。毒素浓度。n操作简单、快速，只需要操作简单、快速，只需要20分钟分钟n可半定量和定量分析可半定量和定量分析n可分析单个样品，也可成批分析样品可分析单个样品，也可成批分析样品n检测范围：检测范围：0.025-0.5ppmn最低检测限为最低检测限为12ppb，最低定量限为，最低定量限为25ppb第38页，本讲稿共40页检验检验6T-2毒素毒素n美国美国hel

31、ica T-2毒素检测试剂盒毒素检测试剂盒n适用适用T-2毒素检测试剂盒的原理是竞争毒素检测试剂盒的原理是竞争ELISA，用于定量检测玉米，玉米粉，玉米胚芽，用于定量检测玉米，玉米粉，玉米胚芽粉，玉米蛋白粉，玉米粉，玉米蛋白粉，玉米/大豆混合物中大豆混合物中T-2毒素的含量。毒素的含量。n原理原理本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法，利用甲醇水溶液通过震荡萃取从样品中提本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法，利用甲醇水溶液通过震荡萃取从样品中提取取T-2毒素。然后过滤萃取液待测。在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品，然后加入毒素。然后过滤萃取液待测。在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品，然后加入

32、T-2毒素酶标记物，再加入毒素酶标记物，再加入T-2毒素抗体引发反应。孵育毒素抗体引发反应。孵育10分，样品中的分，样品中的T-2毒素和酶标毒素和酶标T-2毒素竞争毒素竞争T-2毒素抗体发生反应，毒素抗体发生反应，T-2毒素抗体和微孔结合。洗板除去没有反应的试剂。加入毒素抗体和微孔结合。洗板除去没有反应的试剂。加入底物显色剂、无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；底物显色剂、无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在在450nm波长进行检测，样品中的波长进行检测，样品中的T-2毒素浓度与吸收光强度成反比。毒素浓度与吸收光强度成反比。n敏

33、感性敏感性T-2毒素检测试剂盒检测的范围是毒素检测试剂盒检测的范围是0.0250.5ppm，当测定样品中包含的，当测定样品中包含的T-2毒素的量少于毒素的量少于0.025ppm时应记录为小于时应记录为小于0.025ppm，当测定样品中，当测定样品中T-2毒素的量大于毒素的量大于0.5ppm时要把样品提取液用时要把样品提取液用70%的甲醇水溶液稀释后再测定。的甲醇水溶液稀释后再测定。n试剂盒组成试剂盒组成试剂盒保存在试剂盒保存在2-8摄氏度，在有效期内都可以使用。摄氏度，在有效期内都可以使用。第39页，本讲稿共40页检验检验6T-2毒素毒素n操作步骤：操作步骤：a、使用前将试剂盒和样品处理液提前

34、从冰箱中拿出来使恢复到室温。、使用前将试剂盒和样品处理液提前从冰箱中拿出来使恢复到室温。b、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。条受潮。c、每个测试孔都加入、每个测试孔都加入50L酶结合物酶结合物d、在对应的微孔中加入、在对应的微孔中加入50L1：10稀释后的标准和样品，确保吸头要干净。稀释后的标准和样品，确保吸头要干净。e、每个测试孔都加入、每个测试孔都加入50L抗体溶液抗体溶液f、孵育、孵育10分钟分钟g、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用自来水加满微孔然后倒掉，重、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用自来水加满微孔然后倒掉，重复四次，总共五次洗板。拍板，去掉残留的洗液。复四次，总共五次洗板。拍板，去掉残留的洗液。h、在每个测试孔内加入、在每个测试孔内加入100L底物溶液。底物溶液。i、孵育、孵育5分钟分钟j、在每个测试孔内加入、在每个测试孔内加入100L终止液终止液k、450nm下读取每个孔的吸光度值（下读取每个孔的吸光度值（OD）。）。注意注意标准和样品做平行可以增加精密度和准确度标准和样品做平行可以增加精密度和准确度第40页，本讲稿共40页