湖南省长沙市长郡中学高中生物专题五课题1DNA的粗提取和分离课件新人教版选修1.ppt

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1、讨论讨论1：生物体的遗传物质是什么？生物体的遗传物质是什么？讨论讨论2：真核生物的遗传物质存在于哪里？真核生物的遗传物质存在于哪里？讨论讨论1：生物体的遗传物质是什么？生物体的遗传物质是什么？讨论讨论2：真核生物的遗传物质存在于哪里？真核生物的遗传物质存在于哪里？讨论讨论1：生物体的遗传物质是什么？生物体的遗传物质是什么？讨论讨论3：怎样才能将真核细胞内的遗传物怎样才能将真核细胞内的遗传物 质分离来？质分离来？基本知识基本知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L一、一、DNA的溶解性的溶解性基本知识基本知识 2mol/L浓度可使浓度可使DNA溶解；溶解；0.14mol/L浓度可浓

2、度可使使DNA析出。析出。0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L一、一、DNA的溶解性的溶解性二、酒精是一种常用有机溶剂，但二、酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却却 不能溶于酒精；不能溶于酒精；三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA 没有影响没有影响四、大多数蛋白质不能忍受四、大多数蛋白质不能忍受6080的的 高温，而高温，而DNA在在80以上才会变性以上才会变性五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去 除脂质和蛋白质除脂质和蛋白质,但对但对DNA没有影响没有影响 DNA的鉴定的鉴定DNA与二苯胺（沸水与二苯胺（沸水浴）会染成

3、蓝色，因此，浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。的试剂。甲基绿（绿色）甲基绿（绿色）(一)实验材料的选取：用什么材料提取用什么材料提取DNA？为什么？为什么？实验设计实验设计(一)实验材料的选取：鸡血细胞做实验材料。原因：鸡血细胞做实验材料。原因：1.鸡血细胞核鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得2.鸡血细胞极易吸水胀破鸡血细胞极易吸水胀破3.植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高，有时需匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。操作繁琐，历时较长。(二)破碎细胞，

4、获取含DNA的滤液1.若是动物细胞，如何获取若是动物细胞，如何获取DNA滤液？滤液？2.若是植物细胞，如何获取若是植物细胞，如何获取DNA滤液？滤液？(二)破碎细胞，获取含DNA的滤液1.若是动物细胞，如何获取若是动物细胞，如何获取DNA滤液？滤液？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？影响？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，洗涤剂是一些离子去污剂，

5、能溶解细胞膜，有利于有利于DNA释放；食盐有利于释放；食盐有利于DNA溶解溶解加入洗涤剂和食盐的作用分别是？加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于有利于DNA释放；食盐有利于释放；食盐有利于DNA溶解溶解会使细胞核内会使细胞核内DNA释放不完全，提取释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等(三)去除滤液中的杂质滤液中的杂质

6、可能有哪些细胞成分？滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？(三)去除滤液中的杂质滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？可能有核蛋白、多糖和可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。等杂质。(三)去除滤液中的杂质根据根据DNA的理化性质，可以用哪些方法的理化性质，可以用哪些方法来去除滤液中的杂质？来去除滤液中的杂质？(三)去除滤液中的杂质为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNA，能够除，能够除去杂质？去杂质？(注意：两种食盐溶液的注意：两种食盐溶液的浓度浓度和和作用作用)(三)去除滤液中的杂质为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNA，能够除，能够除去杂质？去杂质？

7、(注意：两种食盐溶液的注意：两种食盐溶液的浓度浓度和和作用作用)用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去析出，能除去在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出出DNA，就能除去与，就能除去与DNA溶解度不同的多种溶解度不同的多种杂质。杂质。析出：析出：滤液滤液+同体积同体积95%冷却酒精冷却酒精 白色丝状物白色丝状物(四)DNA的析出DNA二苯胺二苯胺 蓝色物蓝色物沸水浴沸水浴(五)DNA的鉴定如何鉴定？对比反应是为了证明什么？原理？如何鉴定？对比反应是为了证明什么？原

8、理？1.以血液为实验材料，每以血液为实验材料，每100ml 加入加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。柠檬酸钠，作为抗凝剂。操作提示操作提示2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。分子不能形成絮状沉淀。1.以血液为实验材料，每以血液为实验材料，每100ml 加入加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。柠檬酸钠，作为抗凝剂。操作提示操作提示2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状

9、沉淀。分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。鉴定的效果。1.以血液为实验材料，每以血液为实验材料，每100ml 加入加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。柠檬酸钠，作为抗凝剂。操作提示操作提示试试 验验(播放视频播放视频)加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠

10、溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地析出最大限度地析出 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地析出最大限度地析出 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mo

11、l/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地析出最大限度地析出 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地析出最大限度地析出 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提取DNA加入柠檬酸钠溶液的目的

12、是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地析出最大限度地析出 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提取DNAA出现蓝色出现蓝色 B无变化无变化讨讨 论论讨讨 论论此实验过程中有几次过滤，几次析出？此实验过程中有几次过滤，几次析出？分别在哪一步？分别在哪一步？讨讨 论论答答:整个实验共整个实验共“两次过滤，两次析出两次过滤，两次析出”此实验过程中有几次过滤，几次析出？此实

13、验过程中有几次过滤，几次析出？分别在哪一步？分别在哪一步？两次过滤两次过滤两次过滤两次过滤第一次：第一次：DNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步第二次：第二次：DNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为三次均要用其滤液，使用的纱布为12层层两次过滤两次过滤第一次：第一次：DNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步第二次：第二次：DNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步两次析出两次析出两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 molL 的的NaCI溶液溶液两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 molL 的的NaCI溶液溶液第三步第三步两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 molL 的的NaCI溶液溶液第三步第三步第二次：用冷却的第二次：用冷却的95的酒精的酒精两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 molL 的的NaCI溶液溶液第三步第三步第二次：用冷却的第二次：用冷却的95的酒精的酒精第七步第七步