荧光显示细胞器和细胞凋亡精选课件.ppt
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1、关于荧光显示细胞器和细胞关于荧光显示细胞器和细胞凋亡凋亡第一页,本课件共有25页膜相结构膜相结构细胞膜细胞膜核被膜核被膜线粒体线粒体内质网内质网高尔基体高尔基体溶酶体溶酶体过氧化物酶体过氧化物酶体非膜相结构非膜相结构细胞骨架细胞骨架微管微管微丝微丝中间纤维中间纤维核骨架,核纤层核骨架,核纤层细细胞胞结结构构染色质,染色体染色质,染色体,核仁,核糖体,核仁,核糖体第二页,本课件共有25页4人一组人一组1.细胞核的荧光显示 P60-622.线粒体的荧光标记 P703.内质网的荧光标记内质网的荧光标记P64-674.细胞凋亡的形态学观察细胞凋亡的形态学观察第三页,本课件共有25页常用荧光染料的激发及
2、发射波长常用荧光染料的激发及发射波长 FluorescentDyeExcitation(激发频谱,(激发频谱,nm)Emission(发射频谱,(发射频谱,nm)Cy2TM489506GFP(RedShifted)488507YO-PROTM-1491509YOYOTM-1491509Calcein494517FITC494518FluorXTM494519AlexaTM488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreenTM500503522OregonGreenTM488496524RlboGreenTM500525RhodamineG
3、reenTM502527Rhodamine123507529MagnesiumGreenTM506531CalciumGreenTM506533TO-PROTM-1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548第四页,本课件共有25页FluorescentDyeExcitation(激发频谱,(激发频谱,nm)Emission(发射频谱,(发射频谱,nm)BODIPY530/550530550Dil549565BODIPYTMR542568BODIPY558/568558568BODIPY564/570564570Cy3TM550570TRITC547572MagnesiumO
4、rangeTM550575Phycoerythrin,R&B565575RhodaminePhalloidin550575CalciumOrangeTM549576PyroninY555580RhodamineB555580RhodamineRedTM570590Cy3.5TM581596ABI,ROX588608CalciumCrimsonTM590615第五页,本课件共有25页FluorescentDyeExcitation(激发频谱,(激发频谱,nm)Emission(发射频谱,(发射频谱,nm)TexasRed595615NileRed549628YO-PROTM-3612631YOY
5、OTM-3612631R-Phycocyanin618642C-Phycocyanin620648TO-PROTM-3642660TOTO-3642660DiDDilC(5)644665Cy5TM649670Thiadicarbocyanine651671Cy5.5675694第六页,本课件共有25页1.细胞核的荧光显示 P60-62吖啶橙吖啶橙(AcridineOrange)吖啶衍生物之一,它既可嵌入吖啶衍生物之一,它既可嵌入DNA双链间与双链双链间与双链DNA结合,经结合,经蓝蓝光光激发后发出激发后发出亮绿色亮绿色荧光,荧光,又可以静电堆积的方式与单链又可以静电堆积的方式与单链DNA或或R
6、NA 的磷酸根结合,蓝光激发下的磷酸根结合,蓝光激发下发出橘红色荧光,从而清晰的显示发出橘红色荧光,从而清晰的显示DNA,RNA。异染色质(核内深染)和常染色质(核内浅染)异染色质(核内深染)和常染色质(核内浅染)异染色质(核内深染)和常染色质(核内浅染)异染色质(核内深染)和常染色质(核内浅染)第七页,本课件共有25页实验方法实验方法:P621.将生长有培养细胞的盖玻片(注意细胞面向上)置于一将生长有培养细胞的盖玻片(注意细胞面向上)置于一次性小培养皿内,加入次性小培养皿内,加入9595乙醇固定乙醇固定15153030分钟,取出自分钟,取出自然干燥;然干燥;2.2.加入加入1 1醋酸酸化醋酸
7、酸化3030秒;秒;3.3.在盖玻片标本上滴加在盖玻片标本上滴加0.01吖啶橙染液吖啶橙染液,染色,染色510分分钟;钟;4.去染液,用磷酸缓冲液冲洗去染液,用磷酸缓冲液冲洗1分钟;分钟;5.用用1/10氯化钙分化氯化钙分化30秒秒3分钟;分钟;6.用用PBS漂洗玻片漂洗玻片3次,每次数秒;次,每次数秒;7.临时封片:滴临时封片:滴临时封片:滴临时封片:滴1 12 2滴滴滴滴PBS于载玻片上,将含细胞的盖玻片于载玻片上,将含细胞的盖玻片于载玻片上,将含细胞的盖玻片于载玻片上,将含细胞的盖玻片反扣其上,置荧光显微镜下用反扣其上,置荧光显微镜下用反扣其上,置荧光显微镜下用反扣其上,置荧光显微镜下用
8、100X100X物镜观察。物镜观察。物镜观察。物镜观察。第八页,本课件共有25页细胞核呈绿色(细胞核呈绿色(DNA),细胞质呈橙红色。细胞质呈橙红色。第九页,本课件共有25页2.线粒体的荧光标记线粒体的荧光标记P70P70罗丹明罗丹明罗丹明罗丹明123123特异性的线粒体荧光染料特异性的线粒体荧光染料特异性的线粒体荧光染料特异性的线粒体荧光染料,是膜电位敏感的阳离子荧光素,活细胞线粒体具有大是膜电位敏感的阳离子荧光素,活细胞线粒体具有大是膜电位敏感的阳离子荧光素,活细胞线粒体具有大是膜电位敏感的阳离子荧光素,活细胞线粒体具有大量质子积累造成的外正内负跨膜电位,吸引染料并量质子积累造成的外正内负
9、跨膜电位,吸引染料并量质子积累造成的外正内负跨膜电位,吸引染料并量质子积累造成的外正内负跨膜电位,吸引染料并将它保持在线粒体中将它保持在线粒体中将它保持在线粒体中将它保持在线粒体中,经经经经蓝光激发蓝光激发蓝光激发蓝光激发,呈现呈现呈现呈现黄绿色荧光黄绿色荧光黄绿色荧光黄绿色荧光.可作为线粒体膜电位的灵敏指示可作为线粒体膜电位的灵敏指示可作为线粒体膜电位的灵敏指示可作为线粒体膜电位的灵敏指示.罗丹明罗丹明123123结构式结构式第十页,本课件共有25页电子传递和氧化磷酸化的偶联电子传递和氧化磷酸化的偶联第十一页,本课件共有25页实验方法实验方法:P711.取出已培养好细胞的盖玻片,用取出已培养
10、好细胞的盖玻片,用PBS(+)冲洗冲洗3次,每次漂次,每次漂洗浸泡洗浸泡2-3分钟,分钟,2.加入加入罗丹明罗丹明罗丹明罗丹明123123标记液,标记液,3737培养箱孵育培养箱孵育培养箱孵育培养箱孵育1515分钟,分钟,3.3.吸去标记液,吸去标记液,吸去标记液,吸去标记液,PBS液洗液洗液洗液洗3次,每次次,每次次,每次次,每次3-5分钟,分钟,分钟,分钟,4.4.临时封片:滴临时封片:滴1 12 2滴缓冲液于载玻片上,将含细胞的盖滴缓冲液于载玻片上,将含细胞的盖滴缓冲液于载玻片上,将含细胞的盖滴缓冲液于载玻片上,将含细胞的盖玻片反扣其上,置荧光显微镜下用玻片反扣其上,置荧光显微镜下用玻片
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