什么是实时荧光定量PCR.ppt

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1、管理员：吴安庆联系方式：18862390827办公室：401#1311放射生物与纳米毒理学仪器平台 放射生物及纳米毒理学仪器平台放射生物及纳米毒理学仪器平台，整合了放射生物学研究中心和辐射纳米毒理学研究中心2个团队20余台大型仪器，总价值2000万元，中心仪器设备包括：透射电子显微镜、高速转盘激光共聚焦显微镜、点扫描激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、高内涵细胞成像系统、实时荧光定量PCR仪、全功能微孔板检测仪、溶剂纯化系统、真空冷冻干燥机、凝胶渗透色谱仪、纳米粒度仪、紫外可见近红分光光度计、X射线照射仪、液体闪烁计数仪等化学、生物学、材料学、放射生物学研究设备等。本平台目标为建成面向校内外开放的、

2、具有一流水平的放射纳米毒理学研究平台，实现对放射纳米材料的毒理评价及放射医用材料安全性评估提供重要技术支撑和检测平台。流式细胞仪流式细胞仪实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪仪其他仪器其他仪器使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，网上提前预约，管理员审核通过方可使用。注意事项：1、上机使用前在管理员指导下开机，设程序，测样。2、样本上机前必须用孔径30微米滤网进行过滤，防止大的细胞团块堵塞机器管路。3、荧光样本需要避光。4、样本测完后剩余倒入废液桶。仪器放置地点：401-1316 1.1.三激光八色的光学配置：三激光八色的光学配置：488nm488nm、640nm640nm、4

3、05nm405nm三根固态激光器，实三根固态激光器，实现八种荧光的检测，包括现八种荧光的检测，包括FITCFITC、PEPE、PerC-Cy5.5PerC-Cy5.5、PE-Cy7PE-Cy7、APCAPC、APC-APC-Cy7Cy7、V500V500、V450V450等大部分流式染料。等大部分流式染料。2.2.全自动光路校准功能，全自动光路校准功能，无需人工调节，仪器全自动完成光路校准；光无需人工调节，仪器全自动完成光路校准；光学检测单元附带电子学检测单元附带电子IDID芯片，自动识别光谱信息；光路自动开启和关闭芯片，自动识别光谱信息；光路自动开启和关闭功能。功能。3.3.荧光检测灵敏度：

4、荧光检测灵敏度：FITC110MESFFITC110MESF，PE30MESFPE30MESF。4.4.自动荧光补偿功能，自动荧光补偿功能，使用不同类型细胞做相同实验需要改变信号放大使用不同类型细胞做相同实验需要改变信号放大电压时，无需重新使用单阳性样本调节补偿，仪器自动完成调节。电压时，无需重新使用单阳性样本调节补偿，仪器自动完成调节。5.5.具备灵活的上样方式，可以同时兼容具备灵活的上样方式，可以同时兼容2ml2ml、5ml5ml、15ml15ml等多规格试管上等多规格试管上样，方便实验操作。样，方便实验操作。6.6.细胞检测能力：细胞检测能力：能将能将0.2m0.2m目标颗粒与噪音信号明

5、显区分目标颗粒与噪音信号明显区分7.7.数字分辨率：数字分辨率：16-bit16-bit动力学范围。动力学范围。8.8.细胞获取速度：细胞获取速度：3000030000细胞细胞/秒。秒。什么是流式细胞术什么是流式细胞术对于处在快速直线流动状态中的细胞或颗粒进行多参 数、快速定量分析和分选的高新技术。研究对象研究对象 单个颗粒，如微球、外周血，骨髓，细胞穿刺液，洗脱液，实体组织，培养细胞，微生物流式细胞仪工作原理和基本结构流式细胞仪工作原理和基本结构流式细胞仪原理流式细胞仪原理 液流系统液流系统 形成层流系统，聚焦细胞，让细胞逐一排队。光学系统光学系统 激发和收集光信号 电子系统电子系统 将光信

6、号转化为电信号，并使其数字化以供计 算机分析液流动系统液流动系统Sheath tankWaste tankFlow cellSample injection tube(SIT)Loader(plates or tube racks)Laser interceptVacuum pumpSheath filter激发光学系统:激发光源激光光导纤维和棱镜将激光引导到检测区域接收光学系统:滤光片等将产生的光信号引导到对应的光学接收器光学系统光学系统DetectorarraysFlow cellLaserLaserSample coreCollection lensLensExcitation opti

7、csCollection OpticsFiber opticsLaserFSC diode405 nm640 nm488 nml 将光信号转化为电信号（模拟信号）l将模拟信号转化为数字信号l 计算每个脉冲峰l和计算机连接以传出数据电子系统电子系统将光信号成比例的转换成电信号，并进行数字化处理后转入计算机光信号转换为电信号光电转换器光电转换器光电二极管光电二极管 -FSC Photodiodes 光电倍增管光电倍增管 -SSC&Fluoresence(FL1-FL4)Photomultiplier tubes(PMTs)细胞经激光照射产生的荧光信号被PMT接受，形成电脉冲信号流式细胞仪的应用流式

8、细胞仪的应用=HIVHIV免疫分型，免疫分型，CD4CD4绝对计数绝对计数=白血病和淋巴瘤的免疫分型白血病和淋巴瘤的免疫分型=肿瘤的细胞周期和倍体分析肿瘤的细胞周期和倍体分析=网织红细胞计数网织红细胞计数=细胞移植的交叉配型和免疫状态监测细胞移植的交叉配型和免疫状态监测=干细胞计数干细胞计数=残量白血病细胞检查残量白血病细胞检查=HLA-B27HLA-B27检查检查=血小板功能及相关疾病血小板功能及相关疾病临床应用临床应用细胞结构细胞结构=细胞大小细胞大小=细胞粒度细胞粒度=细胞表面面积细胞表面面积=核浆比例核浆比例=DNADNA含量与细胞周期含量与细胞周期=RNARNA含量含量=蛋白质含量蛋

9、白质含量=染色体分析染色体分析 细胞功能细胞功能=细胞表面细胞表面/胞浆胞浆/核的特核的特异性抗原异性抗原=细胞活性细胞活性=细胞内细胞因子细胞内细胞因子=酶活性酶活性=激素结合位点激素结合位点=细胞受体细胞受体=细胞凋亡细胞凋亡细胞学应用细胞学应用=细胞周期细胞周期=细胞凋亡细胞凋亡=以细胞为载体，以荧光为信号的实验都可以考虑用流式细胞仪检测以细胞为载体，以荧光为信号的实验都可以考虑用流式细胞仪检测我们平台流式细胞仪使用情况统计我们平台流式细胞仪使用情况统计使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，网上提前预约，管理员审核通过方可使用。注意事项：1、保持上样支架干净整洁。2、做完实

10、验及时带走废弃物。3、荧光样本需要避光。仪器放置地点：402-2211仪器型号：ViiA 7仪器价格：70万收费标准：100元/h实时荧光定量PCR仪1.光学系统：卤钨灯(寿命2000小时)、6色激发滤光片，6色检测滤光片、冷CCD成像。2.支持4种模块：标准96孔模块；快速96孔模块；384孔模块；微流体卡片模块。3.反应体积：标准96孔模式：10-100 L；384孔模式：5-20 L；4.温控范围：4C100C5.支持的荧光染料：FAM,SYBR,SYTO9(MeltDoctor),Fluorescein,SYPRO Orange，VIC,JOE,TET,HEX，TAMRA,NED,BO

11、DIPY TMR-X，Texas Red，Alexa Fluor,Joda-46.被动参照染料：软件支持Rox荧光校正去除移液误差7.数据同时采集：所有反应孔同时采集荧光数据，不同孔之间不存在时间差什么是什么是PCR?PCR?PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链，低温（经常是60C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。什么是实时荧光定量什么是实时荧光定量

12、PCRPCR？在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控，以此实现对初始模板的定量分析。实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR一般步骤：一般步骤：样本处理与 RNA提取 cDNA qPCR定量定量PCRPCR仪如何工作仪如何工作使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，无需预约，随到随用。注意事项：1、机器使用前需开机预热20min，待稳定。2、比色皿自备注意比色皿的材质和待测样本的浓度不宜过大。3、机仓门关闭严实，防止露光。4、上机刷卡开机、用完刷卡关机。仪器放置地点：401-13161、可用于食品、生化样品、药品以及环境样品定性定量分析；悬浊液，固体

13、粉末、薄膜、光学材料等的透射、反射测定。2、用于合成样品，液体(透明及悬浊样品)，固体材料透明或不透明样品在紫外，可见，近红外区的吸收，透射，反射测定，进而指导研究开发工作。使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，无需预约，随到随用。注意事项：1、机器使用前需开机预热20min，待稳定。2、注意比色皿的材质和待测样本的浓度不宜过大。3、机仓门关闭严实，防止露光。4、上机刷卡开机、用完刷卡关机。仪器放置地点：401-1316粒度:NIBS专利技术可以对0.6纳米至6微米的颗粒和分子进行测量。Zeta电位:M3-PALS专利技术能够对水分散和非水分散体系中的zeta电位进行精确的测量。

14、分子量:高灵敏度APD检测器和特殊设计的光纤检测光学装置提供测量绝对分子量所需的灵敏度和稳定性。使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，无需预约，随到随用。注意事项：1、注意96孔板的的选材。2、样本浓不宜过高，显色过深。3、上机刷卡开机、用完刷卡关机。仪器放置地点：401-1316多功能微孔板检测仪（多功能酶标仪）一种多用途生物学研究设备，可以进行大量不同物质与标记物检测的实验，是生命科学研究所必备的科学研究仪器。光吸收、化学发光，荧光、荧光偏振、时间分辨荧光和Alpha检测等检测技术可以解决生命科学研究中的重要的检测问题。可以在DNA/RNA/蛋白质测试及定量；所有微孔板的EL

15、ISAs、酶动力学，测试药物解离代谢测试；细胞毒及细胞发育、死亡测试；Caspase-3 以及蛋白酶测试等方面广泛应用。使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，无需预约，每个星期一开机，统一放入样品，星期四关机。使用一次签名登记一次。注意事项：(1)冻干机侧面的微通气阀在放气时一定要注意缓慢。禁止把微通气阀瞬间开大。(2)罩子的下密封表面一定要保护好,千万不可碰伤,移走罩子时一定要将罩子反放在垫子上.长期不用时，应将罩子反放在垫子上。(3)挂上一个外挂瓶以后，应等待干燥腔内真空值稳定后，再挂下一个外挂瓶，以防止腔内气压升高导致样品融化；只有当真空值降至0.1mbar以下时，才可挂外挂瓶。仪器放置地点：401-1318冷冻干燥保存易脱水的材料，在加水以后能够再次恢复原材料的特性，不影响其生物活性等；在非常低温的状态下达到干燥，蛋白质保持无水，而其他主要的化学键保持质的量不变；冷冻干燥，组织、组织提取物、细菌、疫苗及血浆之类的材料，成为干燥状态，从而不会发生酶的、细菌的及化学的改变。适用于细菌、病毒、血浆、血清、抗体、疫苗以及药品、微生物、酵母、生物研究用植物提取物等的干燥。