基因工程全部课件人教版.ppt
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1、The camelecow基因工程全部课件基因工程全部课件人教版人教版设想一设想一能否让禾本科的植物也能够固定能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮?空气中的氮?能否让细菌能否让细菌“吐出吐出”蚕丝?蚕丝?设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物?干扰素等珍贵的药物?设想三经过多年的努力,科学家于经过多年的努力,科学家于2020世纪世纪7070年年代创立了可以定向改造生物的新技术代创立了可以定向改造生物的新技术基因工程。金湖二中生物教研组金湖二中生物教研组 请大家阅读请大家阅读P1内容,你认为基因内容,你认为基因工程的理论基础和技术基础有哪些?工程的
2、理论基础和技术基础有哪些?基因工程基础:基因工程基础:(1)DNA的规则双螺旋结构是基因工的规则双螺旋结构是基因工程的物质基础;程的物质基础;(2)不同生物共用一套密码子是理论基)不同生物共用一套密码子是理论基础;础;(3)转移载体和工具酶的发现为基因工)转移载体和工具酶的发现为基因工程的提供了技术基础。程的提供了技术基础。几点说明:几点说明:(1)最早的基因工程)最早的基因工程 艾弗里的肺炎双球菌的转化艾弗里的肺炎双球菌的转化实验,证明了实验,证明了DNA可以从一种生物个可以从一种生物个体转移到另一个生物个体;体转移到另一个生物个体;(2)不同生物的)不同生物的DNA分子完成重组的分子完成重
3、组的理论基础:不同生物的理论基础:不同生物的DNA分子的结分子的结构和组成成分一样;构和组成成分一样;(3)最早的转基因动物)最早的转基因动物1980年的年的转基因老鼠。转基因老鼠。1、基因工程的概念、基因工程的概念 基因工程又叫基因拼接技术或基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技重组技术。术。概念一:概念一:在生物体外,通过对在生物体外,通过对DNA分子进分子进行人工行人工“剪切剪切”和和“拼接拼接”,对生物的基因进,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生
4、出生出人类所需要人类所需要的基因产物。的基因产物。概念二:概念二:按照人们的意愿,把一种生物的按照人们的意愿,把一种生物的个别基因复制出来,加以修饰,然后放到另一个别基因复制出来,加以修饰,然后放到另一种生物的细胞里,种生物的细胞里,定向地定向地改造生物的遗传性状。改造生物的遗传性状。从基因工程概念上看,你认为基从基因工程概念上看,你认为基因工程可分为几步?因工程可分为几步?基因工程是在分子水平对基因工程是在分子水平对DNA分子进分子进行的行的“剪切剪切”和和“拼接拼接”,这需要专门的,这需要专门的工具。工具。二、基因操作的工具二、基因操作的工具 1、限制性核酸内切酶、限制性核酸内切酶“分子手
5、分子手术刀术刀”思考:思考:限制性内切酶剪切的是限制性内切酶剪切的是DNA中的什么中的什么化学键?化学键?限制性内切酶的特性?限制性内切酶的特性?DNA分子经限制性内切酶处理后形成分子经限制性内切酶处理后形成的结构叫什么名称?的结构叫什么名称?(1)限制性内切酶剪切的结构)限制性内切酶剪切的结构注意:注意:限制性内切酶破坏的是限制性内切酶破坏的是DNA骨架上骨架上的磷酸与脱氧核糖形成的化学键(磷酸二的磷酸与脱氧核糖形成的化学键(磷酸二酯键),而不是碱基对之间的氢键。酯键),而不是碱基对之间的氢键。(2)限制性内切酶的特性)限制性内切酶的特性 一种限制性内切酶只能识别一种特一种限制性内切酶只能识
6、别一种特定的脱氧核苷酸序列,并且能在特定的切定的脱氧核苷酸序列,并且能在特定的切点是切割点是切割DNA分子。分子。(3 3)分布:)分布:主要在微生物中主要在微生物中。你认为微生物中的限制性内切你认为微生物中的限制性内切酶有什么作用?酶有什么作用?(4)结果:)结果:产生黏性末端(碱基互补配对)、平产生黏性末端(碱基互补配对)、平末端。末端。(5)举例:)举例:大肠杆菌的一种限制酶(大肠杆菌的一种限制酶(EcoR)能识能识别别GAATTC序列,并在序列,并在G和和A之间切开形成之间切开形成黏性末端;黏性末端;Sma能识别能识别CCCGGG序列,序列,并在并在C和和G之间切割形成平末端。之间切割
7、形成平末端。练习:练习:请大家看第请大家看第4页下面的页下面的DNA片段,片段,如果此如果此DNA片段被片段被EcoR限制酶处限制酶处理,请你标出切点,并写出切割后的理,请你标出切点,并写出切割后的末端。末端。要从一个要从一个DNA分子中获得一个分子中获得一个所需要的基因,要有几个切口?产生所需要的基因,要有几个切口?产生几个末端?几个末端?2、DNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”看图思考:看图思考:DNA连接酶连接的是什么结构?连接酶连接的是什么结构?请你说出请你说出DNA连接酶和连接酶和DNA聚合酶聚合酶的差异。的差异。根据酶的来源不同,可以将根据酶的来源不同,可以将DNA连接酶分为
8、两类:连接酶分为两类:从大肠杆菌中分离得到:从大肠杆菌中分离得到:E.coliDNA连接酶,只能将双链连接酶,只能将双链DNA片段互补的粘性片段互补的粘性末端之间连接。末端之间连接。从从T4噬菌体中分离到:噬菌体中分离到:T4连接酶,连接酶,既可以既可以“缝合缝合”双链双链DNA片段互补的粘性片段互补的粘性末端,又可以末端,又可以“缝合缝合”双链双链DNA片段的平片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低。末端,但连接平末端之间的效率比较低。3、基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体“分子运输车分子运输车”阅读课本相关内容,回答问题:阅读课本相关内容,回答问题:(1)运载体的化学本质是什
9、么?)运载体的化学本质是什么?(2)运载体要具备哪些条件?)运载体要具备哪些条件?(3)常使用的运载体有哪些?)常使用的运载体有哪些?(4)最常用的运载体是什么?它)最常用的运载体是什么?它存在于哪些细胞中?存在于哪些细胞中?(1)运载体具备的条件)运载体具备的条件 能够在宿主细胞中复制并保持稳能够在宿主细胞中复制并保持稳定;定;具有多个限制酶的切点,以便与具有多个限制酶的切点,以便与外源基因连接;外源基因连接;具有某些标记基因,便于筛选:具有某些标记基因,便于筛选:对受体细胞无害、易分离。对受体细胞无害、易分离。(2)常使用的运载体)常使用的运载体 质粒、噬菌体、动植物病毒等;质粒、噬菌体、
10、动植物病毒等;其中,质粒是最常用的运载体。其中,质粒是最常用的运载体。(3)质粒)质粒 本质:细胞染色体(或拟核本质:细胞染色体(或拟核DNA分子)分子)外能自主复制的小型环状外能自主复制的小型环状DNA分子;分子;质粒的存在对宿主细胞无影响;质粒的存在对宿主细胞无影响;质粒的复制只能在宿主细胞内完成。质粒的复制只能在宿主细胞内完成。判断:判断:质粒只存在于原核细胞中。质粒只存在于原核细胞中。思考:思考:基因工程用到的工具酶有哪些?基因工程用到的工具酶有哪些?1.1.以下说法正确的是以下说法正确的是 ()A A、所所有有的的限限制制酶酶只只能能识识别别一一种种特特定定的的核核苷酸序列苷酸序列
11、B B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 C C、运运载载体体必必须须具具备备的的条条件件之之一一是是:具具有有多个限制酶切点,以便与外源基因连接多个限制酶切点,以便与外源基因连接 D D、DNADNA连连接接酶酶使使黏黏性性末末段段的的碱碱基基之之间间形成氢键形成氢键C 练习练习2.2.不属于质粒被选为基因运载体不属于质粒被选为基因运载体的理由是的理由是 ()A A、能复制、能复制 B B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点 C C、具有标记基因、具有标记基因 D D、它是环状、它是环状DNADNAD3.3.有有关关基基因因工工程程的的叙叙述述中中,错错误误的的是是
12、(多选)(多选)()A A、基基因因工工程程技技术术能能定定向向地地改改造造生生物物的遗传性状,培育生物新品种的遗传性状,培育生物新品种 B B、重组、重组DNADNA的形成在细胞内完成的形成在细胞内完成 C C、目目的的基基因因须须由由运运载载体体导导入入受受体体细细胞胞 D D、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体B D4、在基因工程中,切割运载体和、在基因工程中,切割运载体和含有目的基因的含有目的基因的DNA片段,需使用片段,需使用 ()A.同种限制酶同种限制酶 B.两种限制酶两种限制酶C.同种连接酶同种连接酶 D.两种连接酶两种连接酶A 你认为基因工你认为基因工程可分为哪几步?程可分
13、为哪几步?1、目的基因的获取、目的基因的获取2、基因表达载体的、基因表达载体的构建构建3、将目的基因导入、将目的基因导入受体细胞受体细胞4、目的基因的检测、目的基因的检测与鉴定与鉴定一、提取目的基因一、提取目的基因 目的基因主要是指编码蛋白质的目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因。结构基因。例如,与生物抗逆性相关的基因、例如,与生物抗逆性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因,以及与工业所需用酶相关关的基因,以及与工业所需用酶相关的基因等,也可以是具有一些具有调的基因等,也可以是具有一
14、些具有调控作用的因子。控作用的因子。(一)将需要的基因直接从供体生物(一)将需要的基因直接从供体生物的细胞内提取出来。的细胞内提取出来。供体生物细胞供体生物细胞取出取出DNADNA用限制酶剪用限制酶剪去多余部分去多余部分目的基因目的基因限制酶限制酶目前被较广泛提取目前被较广泛提取使用的目的基因有:苏使用的目的基因有:苏云金杆菌抗虫基因、人云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。因、植物抗病基因等。(二)从基因文库中获取目(二)从基因文库中获取目的基因的基因什么是基因文库?什么是基因文库?什么是部分基因文库?什么是部
15、分基因文库?基因文库是怎样建立的?基因文库是怎样建立的?怎样从基因文库中得到我们所需的目怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因?的基因?目的基因的有关信息与什么相联系?目的基因的有关信息与什么相联系?(三)人工合成基因法(三)人工合成基因法PCRPCR扩扩增技术增技术PCR (polymerase chain reaction)聚合酶链式反应聚合酶链式反应是一项在生物体外复制特定是一项在生物体外复制特定DNADNA片段的核酸合成技术。通过此技术,片段的核酸合成技术。通过此技术,可获取大量的目的基因。可获取大量的目的基因。基因工程全部课件人教版基因工程全部课件人教版原理:原理:前提:前提:过程:
16、过程:PCR扩增仪扩增仪DNA双链复制的基本原理双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列1.目的基因目的基因DNA受热变性,解链;受热变性,解链;2.引物与单链互补结合;引物与单链互补结合;3.合成链在合成链在DNA聚合酶作用下进聚合酶作用下进行延伸。行延伸。(四)化学合成法(四)化学合成法 适用范围:适用范围:已知核苷酸序列,基因的核苷酸数量已知核苷酸序列,基因的核苷酸数量较少。较少。过程:过程:根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的核苷酸序列,然后按碱基互补配测出相应的核苷酸序列,然后按碱基互补配对的原则,推测出它的结构
17、基因的核苷酸序对的原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,在通过化学方法,以单核苷酸为原料合列,在通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。成目的基因。基因工程全部课件人教版基因工程全部课件人教版 基因表达载体的构建是实施基基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步,也是基因工程的因工程的第二步,也是基因工程的核心。核心。(一)目的(一)目的 使目的基因在受体细胞内稳定存使目的基因在受体细胞内稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。目的基因能够表达和发挥作用。1 1、基因表达载体的组成:、基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子、目的
18、基因、启动子、终止子、标记基因。标记基因。编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点2 2、启动子、启动子:一段有特殊结构的一段有特殊结构的DNADNA片段,位片段,位于基因的首端,是于基因的首端,是RNARNA聚合酶识别和聚合酶识别和结合的部位结合的部位。3 3、终止子、终止子:位于基因的尾端,也是一段有特位于基因的尾端,也是一段有特殊结构的殊结构的DNADNA片段,使转录在所需要片段,使转录在所需要的地方停止下来。的地方停止下来。4 4、标记基因、标记基因:为了鉴别受体细胞中是否含有为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的目的基
19、因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。细胞筛选出来。思考:思考:你认为目的基因与运载体的结你认为目的基因与运载体的结合操作过程的怎样进行的?合操作过程的怎样进行的?用同一种限制性内切酶处理运载用同一种限制性内切酶处理运载体和质粒,得到相同的黏性末端;再将体和质粒,得到相同的黏性末端;再将目的基因和运载体,在目的基因和运载体,在DNA连接酶在连接酶在作用下进行连接,形成了一个重组的作用下进行连接,形成了一个重组的DNA分子。分子。思考:思考:不同生物的不同生物的DNA分子连接成功分子连接成功的基础是什么?的基础是什么?思考:思考:如果用同一种限制性内切酶,如果用同一种限制性内切酶,处理质粒和目的
20、基因,并将产物处理质粒和目的基因,并将产物放在一起用连接酶连接它们,最放在一起用连接酶连接它们,最后可以产生多少种环状的后可以产生多少种环状的DNA分分子?子?你认为它们是怎么组成的?你认为它们是怎么组成的?三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞有哪些?常用的受体细胞有哪些?什么叫转化?什么叫转化?怎样才能将目的基因导到受体细胞怎样才能将目的基因导到受体细胞中呢?中呢?(一)常用的受体细胞有:(一)常用的受体细胞有:动物、植物、微生物。动物、植物、微生物。(二)转化:(二)转化:目的基因目的基因进入进入受体细胞内,并且受体细胞内,并且在受体细胞内维持在受体细胞内维
21、持稳定稳定和和表达表达的过程。的过程。基因工程全部课件人教版基因工程全部课件人教版 1 1、常用方法:、常用方法:-农杆菌转化法农杆菌转化法 适用范围:适用范围:双子叶植物和裸子植物;双子叶植物和裸子植物;具体做法:具体做法:将目的基因插入到农杆菌的将目的基因插入到农杆菌的TiTi质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA中,利用农杆菌的转化作用(当植物中,利用农杆菌的转化作用(当植物体受损时,伤口处的细胞会分泌大量的酚类体受损时,伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农杆菌的杆菌的TiTi质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA可转移至受
22、体细胞)可转移至受体细胞),就可以使目的基因进入植物细胞,并将其,就可以使目的基因进入植物细胞,并将其插入植物细胞中的染色体插入植物细胞中的染色体DNADNA上,使目的基上,使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。因的遗传特性得以稳定维持和表达。2 2、其他方法:、其他方法:基因枪法;基因枪法;花粉管通道法;花粉管通道法;说出三种方法的优缺点。说出三种方法的优缺点。(二)将目的基因导入动物细胞(二)将目的基因导入动物细胞显微注射技术:显微注射技术:具体做法:具体做法:基因工程全部课件人教版基因工程全部课件人教版 早期的基因工程,常用大肠杆菌做早期的基因工程,常用大肠杆菌做受体细胞的原因:受体细
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