实验动物基本操作技术.ppt

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1、动物实验基本操作技术实验动物的抓取与固定性别鉴定年龄的大致判断妊娠检查分组与编号本章主要内容本章主要内容本章主要内容本章主要内容常规采血方法麻醉方法处死方法3/2/20231一、大、小鼠的抓取固定第一节 实验动物的抓取与固定3/2/20232小鼠固定盒固定3/2/20233大鼠固定盒固定3/2/20234二、豚鼠的抓取固定法3/2/20235三、家兔的抓取固定法3/2/202363/2/20237一、大、小鼠的性别鉴定第二节 性别鉴定3/2/20238Female Male 二、兔的性别鉴定3/2/20239婚垫婚垫雄蟾雄蟾雄蟾雄蟾雌蟾雌蟾三、蟾蜍的性别鉴定3/2/202310一、大、小鼠一、

2、大、小鼠 1.1.根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）第三节 年龄的大致判断3/2/2023113/2/2023123/2/2023133/2/2023143/2/2023153/2/202316 2.2.根据体重鉴定日龄根据体重鉴定日龄 小鼠日龄与体重的对应小鼠日龄与体重的对应日龄/d初生初生 5 10 15 20 25 305 10 15 20 25 30体重/g 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 21.021.03/2/202317 大鼠日龄与体重的对应大鼠日龄与体重的对应日

3、龄/d初生 10 20 30 40 体重/g67 1725 3550 5590 100150日龄/d 50 60 70 80体重/g150210 170240 210270 2403203/2/202318 二、豚鼠 老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。同样，也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。日龄/d 初生 7 20 30 60 体重/g6080 100120 150200 170220

4、240300日龄/d 90 120 180体重/g330400 400470 5206003/2/202319 三、家兔 门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家兔红色与白色长度相等；1岁以下，红多于白；1岁以上，白多于红。还可根据趾爪的长度与弯曲度来区别。青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。3/2/202320第四节 妊娠检查 雌性

5、动物妊娠后会发生一系列的复杂变化。为了在配种以后能及时掌握雌性动物是否妊娠、妊娠的时间及胎儿和生殖器官的异常情况，采用临床和实验室的方法进行检查，称为妊娠检查，又称妊娠诊断(pregnancy diagnosis)。通过妊娠检查，可以及时地对雌性动物加强护理或再次配种，以保护母体和胎儿的正常发育，避免胎儿早期死亡和流产及减少繁育时间的损失。3/2/202321外部检查法外部检查法摸胎法摸胎法阴道检查法阴道检查法直肠检查法直肠检查法超声波检查法超声波检查法孕酮含量测定法孕酮含量测定法妊娠检查方法有3/2/202322第五节 分组与编号 动物实验之前，必须对实验动物进行随机分组和编号标记，这是做好

6、实验和实验记录的前提。一、随机分组 （一）当分为二组时 例：设有雄性Wistar大鼠12只，按体重大小依次编为1，2，3，12号，试用完全随机的方法，分为甲、乙两组。分组方法：假设所产生的点是随机数字表上第21行第31列的78，则从78开始，由上向下抄12个随机数字，如下：3/2/202323 动物编号：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 随机数字：78 38 69 57 91 0 37 45 66 82 65 41 组 别：乙 乙 甲 甲 甲 乙 甲 甲 乙 乙 甲 甲 现在以随机数字的奇数代表甲组，偶数代表乙组，则编号为3、4、5、7、8、11、12号分入甲组，而1、2、

7、6、9、10号分人乙组。因两组数字不等，继续用随机方法将甲组多余的一只调整给乙组，从上面最后一随机数字41，接下去抄一个数为62，以7除之(因甲组原分配7只)得6，即把原分配在甲组的第6个甲(即11号大鼠)调入乙组。3/2/202324 如果甲组多两个，则接下去抄两个数。分别以8，7除之，余数即指要调入乙组的第几个甲，余此类推。最后各组的鼠数就相等了。调整后各组鼠的编号为：组别 鼠的编号 甲组 3 4 5 7 8 12 乙组 1 2 6 9 10 113/2/202325 (二)当分为三组时 例：设有雄性的SD大鼠12只，按体重大小依次编为1，2，3，12号，试用完全随机的方法，分为A、B、C

8、三组。分组方法：假设所定的点是随机数字表第40行17列的08，则从08开始，自左到右抄12个随机数字：动物编号：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 随机数字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69 10 除 3 余数：2 0 1 2 0 2 0 0 1 1 0 1 组 别：B C A B C B C C A A C A 调整组别：B3/2/202326 以3除各随机数字，若余数为l，即该鼠归A组；余数为2，归人B组；余数为3，归入C组。结果A组为4只，B组为3只，C组为5只。C组多一只应调入B组。方法同上。仍采用随机方法；从10后面接着抄，为61。除

9、以5，余数为1，则将第一个C，即第2号鼠调入B组。调整后各组鼠的编号如下：组别 鼠的编号 A组 3 9 10 12 B组 l 2 4 6 C组 5 7 8 11 对于将动物随机分为四组或更多组原理基本一致3/2/202327 二、编号标记方法 实验动物分组后，为了区分、观察并记录每个个体的反应情况，必须给每只动物进行编号标记。1体表颜料着色法 一般对短期试验的白色动物可用颜料涂搽被毛的方法标记。常用的涂染化学药品有：红色：0.5中性红或品红溶液；黄色：35苦味酸溶液或8090苦味酸酒精饱和液；咖啡色：2硝酸银溶液；黑色：煤焦油酒精溶液。3/2/202328 左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为

10、3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。红色表示十位数,用黄色表示个位数。3/2/202329 2个体耳号标记法 3.个体断趾标记法 4.耳号钳标记法 5.挂牌法3/2/202330第六节 常规采血方法 一、大、小鼠的采血方法 1颈静脉或颈动脉采血 2股静脉或股动脉采血 3心脏采血 4尾部采血 5眼眶采血 6断头取血3/2/202331颈静脉或颈动脉采血尾部采血3/2/202332心脏采血3/2/202333二、家兔的采血方法 1心脏采血 2耳中央动脉采血 3耳静脉采血3/2/202334 采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白

11、细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。3/2/202335采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。采血时要注意3/2/202336 部 位 动

12、物种类尾静脉大鼠、小鼠耳静脉兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊眼底静脉丛兔、大鼠、小鼠 d舌下静脉兔 e腹壁静脉青蛙、蟾蜍 f冠、脚蹼皮下静脉 鸡、鸭、鹅取少量血3/2/202337 部 位 动物种类动物种类后肢外侧皮下小隐静脉狗、猴、猫前肢内侧皮下头静脉狗、猴、猫耳中央动脉兔颈静脉狗、猫、兔心脏豚鼠、大鼠、小鼠断头大鼠、小鼠翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅取中量血3/2/202338 部 位 动物种类股动脉、颈动脉狗、猴、猫、兔心脏狗、猴、猫、兔颈静脉马、牛、山羊、绵羊摘眼球大鼠、小鼠取大量血3/2/202339动物种类最大安全采血量 (ml)最小致死采血量 (ml)小鼠0.20.3大鼠1

13、2豚鼠510兔1040狼狗100500猎狗50200猴15604.最大安全采血量与最小致死采血量3/2/202340急 救 措 施 动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象，此时应立即进行急救处理措施。急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因（如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施急救措施。3/2/202341 一、呼吸、心跳（血压）的改变 动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指标，二者是实验动物状态的主要指征。尤其对呼吸的观察，因为动物的死亡首先是呼吸的停止。（一

14、）诱发原因 1麻醉给药速度过快或过量：实施静脉给药麻醉，可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此，为防止麻醉剂过量，注射速度一定不要过快，严密观察动物状况，若需追加麻醉剂，一次不宜超过总量的1/5。3/2/202342 2气道不畅或堵塞：常见于麻醉后，因为气管分泌物增多或气管切口的出血凝块堵塞气管，动物呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息。3大失血：如因大动脉插管的松脱所造成的大失血。4实验药物的作用：如静脉注射乙酰胆碱过量或动物对其反应过强，引起心搏减弱减慢，继而出现呼吸、心跳的停止。3/2/202343 （二）急救措施 1迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清除干净气管、气管插管内的分泌物及

15、血凝块。必要时拔出气管插管冲洗后再行气管插管术。2根据下列不同情况采取相应的急救措施：（1）呼吸极慢、不规则，但心跳正常时：给予人工呼吸-压胸法，适当给予苏醒剂。（2）呼吸停止仍有心跳时：实施人工呼吸，必要时可使用人工呼吸机或吸氧（吸入气中O2占95%，CO2占5）；注射50葡萄糖液510ml；给肾上腺素及苏醒剂。（3）呼吸、心跳均停止时：用l：10000肾上腺素溶液心内注射，其余同（2）。3/2/202344 二、大失血 （一）诱发原因 多因动脉插管结扎不牢、动物挣扎，导致大动脉插管的松脱，或在进行动脉插管术时，因未放置动脉夹或动脉夹夹闭不全而剪切动脉引起。（二）急救措施 1立即止血：应迅速手指压迫或捏住出血处（尽量不要用止血钳，以防损伤动脉和神经），然后仔细检查分离出血点，于近心端放置动脉夹，再行动脉插管术。2补充血容量：若失血太多，适当加快输液(生理盐水)速度，增加血容量。3注射强心剂：静脉注射110000肾上腺素0.5ml。3/2/202345