植物组织培养技术流程.ppt

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1、1 1 实验室仪器设备实验室仪器设备2 2 实验基本操作实验基本操作3 3 植物组织培养流程植物组织培养流程植物组织培养操作流程植物组织培养操作流程1 1 实验室仪器设备实验室仪器设备2 2 实验基本操作实验基本操作一、母液的配制一、母液的配制1.MS1.MS母液的配制母液的配制2.2.激素母液的配制激素母液的配制大量元素大量元素(20(20倍倍)、微量元素、微量元素(1000(1000倍倍)、铁盐、铁盐(100(100倍倍)、有机元素、有机元素(100(100倍倍)6-BA6-BA、KTKT、ZTZT等浓度为等浓度为0.5mg/ml0.5mg/ml；NAANAA浓度为浓度为0.1mg/ml0

2、.1mg/ml二、培养基的配制与灭菌二、培养基的配制与灭菌 MS+6-BA 2 mg/L+MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉琼脂粉 5.5 mg/L+5.5 mg/L+糖糖 30 mg/L 30 mg/L pH 6.0 1LpH 6.0 1L适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。纸等。121 121 维持维持202030min30min注意点：加足水、排尽气、气压降到注意点：加足水、排尽气、气压降到0 0时，才能时，才能开盖。开盖。1.1.培养基配制培养基配制2.2.培养基灭菌培养基灭菌三、外植体的消毒与无菌操作三、外植体的消毒与无菌操

3、作消消 毒毒 剂剂使用浓度使用浓度(%)(%)消毒时间消毒时间(min.)(min.)效效 果果残液去除残液去除难易难易乙醇乙醇70-7570-750.1-30.1-3好好易易新洁尔灭新洁尔灭101020205 53030好好易易氯化汞氯化汞0.10.11 12 21515最好最好最难最难过氧化氢过氧化氢101012125 51515较好较好最易最易抗菌素抗菌素4 450mgl50mgl-1-130306060较好较好较难较难次氯酸钙次氯酸钙/纳纳9 9 10105 53030好好易易1.1.外植体消毒外植体消毒正正 确确 错 误取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用

4、无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。1 1、用、用75%75%的酒精喷洒超净工作台。的酒精喷洒超净工作台。2 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌镊杀菌20min-30min20min-30min。注意：台面上的用品不要放置。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。3 3、关空间紫外灯，过、关空间紫外灯，过5-10min5-10min进入缓冲间，以进入缓冲间，以75%75%洗洗手和手臂，进入接种台。手和手臂，进入接种台。4 4、关闭超净台

5、紫外灯，打开照明灯。、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。5 5、试验操作。、试验操作。6 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。7 7、收拾无菌纸、材料瓶等。、收拾无菌纸、材料瓶等。2.2.无菌操作无菌操作注意（注意（1 1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（太快，以防空气流动，增加污染机会。（2 2）不能用）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3 3）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原为拿取方便，工作台面上的用品

6、要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（侧。（4 4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。接种茎段：注意形接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中学上端露于空气中正正 确确 错 误3.植物组织培养流程植物组织培养流程路路线线一一路路线线二二路路线线三三灭灭菌菌难难，接接种种难难，用用心心都都不不难难身身体体好好，学学习习好好，品品质质更更需需好好