发酵工程下游加工过程概论.pptx

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1、第十二章第十二章 发酵工程下游加工过程简介发酵工程下游加工过程简介一、发酵工程下游加工过程概论一、发酵工程下游加工过程概论 1、发酵工程下游加工过程的特点、发酵工程下游加工过程的特点 1 1）所需产物在培养液中浓度较低，且稳定性差）所需产物在培养液中浓度较低，且稳定性差2 2）普遍存在下游工程代价高，回收率较低等问题）普遍存在下游工程代价高，回收率较低等问题发酵液发酵液是复杂的多相系统是复杂的多相系统2、发酵工程下游加工过程的一般程序成品加工发酵液的预处理和过滤提取精制采用凝聚和絮凝技术加速固、采用凝聚和絮凝技术加速固、液分离；如产物在细胞内，还液分离；如产物在细胞内，还要进行细胞破碎要进行细

2、胞破碎提取（初步纯化）目的是除去与目标产提取（初步纯化）目的是除去与目标产物性质差异大的杂质物性质差异大的杂质精制（高度纯化）是采用对产品有高度精制（高度纯化）是采用对产品有高度选择性的分离技术，除去与产物化学性选择性的分离技术，除去与产物化学性质和物理性质相近的杂质质和物理性质相近的杂质最终获得质量合格的产品最终获得质量合格的产品3、主要操作单元：絮凝絮凝离心离心过滤过滤细胞破碎细胞破碎萃取萃取沉淀沉淀层析层析结晶结晶干燥干燥二、发酵液预处理和过滤二、发酵液预处理和过滤为什么要对发酵液进行预处理？为什么要对发酵液进行预处理？预处理的目的是什么？预处理的目的是什么？发酵液的基本特性发酵液的基本

3、特性 产物浓度低产物浓度低 具有极性具有极性 黏度大黏度大 表面张力大表面张力大 性质不稳定性质不稳定一）发酵液的预处理1、目的：发酵液中杂质多且成分复杂，其中对纯化影响最大的发酵液中杂质多且成分复杂，其中对纯化影响最大的是高价是高价无机离子无机离子(Ca(Ca 2+2+、Mg Mg 2+2+、Fe Fe 3+3+等等)和和杂蛋白杂蛋白等等改变发酵液的物理性质，加快悬浮液中固形物沉降的速度；改变发酵液的物理性质，加快悬浮液中固形物沉降的速度；尽可能使产物转入便于以后处理的相中；（一般为液相）尽可能使产物转入便于以后处理的相中；（一般为液相）能够除去部分杂质。能够除去部分杂质。2、高价无机离子的

4、去除镁离子的去除：镁离子的去除：常用草酸常用草酸 与钙离子生成草酸钙沉淀与钙离子生成草酸钙沉淀 草酸为弱酸，对发酵产物的破坏较小，草酸钙沉淀草酸为弱酸，对发酵产物的破坏较小，草酸钙沉淀还能促进蛋白质凝固，有利于提高滤液的过滤速度；还能促进蛋白质凝固，有利于提高滤液的过滤速度；草酸的溶解度较小，需大用量时，可用草酸钠取代；草酸的溶解度较小，需大用量时，可用草酸钠取代；草酸价格较高，生产上一般需回收草酸价格较高，生产上一般需回收钙离子的去除：钙离子的去除：铁离子的去除铁离子的去除：常用三聚磷酸钠常用三聚磷酸钠 与镁离子形成可溶性络合物与镁离子形成可溶性络合物 Na Na5 5P P3 3O O10

5、10+Mg +Mg 2+2+=MgNa =MgNa3 3P P3 3O O1010+2Na+2Na+常用黄血盐常用黄血盐 与铁离子形成普鲁氏蓝沉淀与铁离子形成普鲁氏蓝沉淀3K3K4 4Fe(CN)Fe(CN)6 6+4Fe +4Fe 3+3+=Fe =Fe4 4Fe(CN)Fe(CN)6 6 3 3+12K+12K+3、可溶性杂蛋白的去除 杂蛋白的存在会降低离子交换树脂和大网格树脂的吸附杂蛋白的存在会降低离子交换树脂和大网格树脂的吸附量，如采用溶剂萃取，会发生乳化，影响两相分离。此外，量，如采用溶剂萃取，会发生乳化，影响两相分离。此外，在常规过滤和膜过滤时，还会使滤速下降，使膜受到污染在常规过

6、滤和膜过滤时，还会使滤速下降，使膜受到污染。1 1）沉淀法）沉淀法 调等电点 因羧基的电离度比氨基大，所以大多数蛋白质的等电点因羧基的电离度比氨基大，所以大多数蛋白质的等电点都在酸性范围都在酸性范围(pH4.0-5.5)(pH4.0-5.5)但仅靠调等电点还不能使大部分蛋白质沉淀蛋白质是两性物质，在酸性溶液中，能与一些阴离子物质蛋白质是两性物质，在酸性溶液中，能与一些阴离子物质如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐和如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐和过氯酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子如过氯酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子如AgAg+、Cu C

7、u 2+2+、Zn Zn 2+2+、Fe Fe 3+3+、Pb Pb 2+2+等等 形成沉淀形成沉淀2 2）变性法）变性法 变性蛋白溶解度较小 最常用加热法 加热不仅能使蛋白变性，还可降低液体黏度，提高过滤速率；加热不仅能使蛋白变性，还可降低液体黏度，提高过滤速率；其他方法：大幅度调节大幅度调节pHpH，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂 变性法存在一定的局限 如加热法只适用于对热较稳定的目的产物；极端如加热法只适用于对热较稳定的目的产物；极端pHpH也会导致某些目也会导致某些目的产物失活，且需消耗大量酸碱，而有机溶剂法通常只适用于所处理的的产物失活，且需消

8、耗大量酸碱，而有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。液体数量较少的场合。3 3）吸附法）吸附法 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白而将其除去 如四环素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚如四环素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化钾的胶状沉淀来吸附蛋白；铁氰化钾的胶状沉淀来吸附蛋白；在枯草芽孢杆菌发酵中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者在枯草芽孢杆菌发酵中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去包裹在其中而除去 凝凝聚聚和和絮絮凝凝都都是是发发酵酵液液预预处处理

9、理的的重重要要方方法法，其其处处理理过过程程就就是是将将化化学学药药剂剂预预先先投投加加到到悬悬浮浮液液中中，改改变变细细胞胞、菌菌体体和和蛋蛋白白质质等等粒粒子子的的分分散散状状态态，破破坏坏其其稳稳定定性性，使使它它们们聚聚集集成成可可分分离的絮凝体，再进行分离。离的絮凝体，再进行分离。发酵液预处理的方法发酵液预处理的方法凝聚和絮凝凝聚和絮凝 凝凝聚聚指指在在投投加加的的化化学学物物质质（如如水水解解的的凝凝聚聚剂剂：铝铝、铁铁的的盐盐类类或或石石灰灰等等）作作用用下下，胶胶体体脱脱稳稳并并使使粒粒子子相相互互聚聚集集成成1mm大大小小块块状状凝凝聚聚体体的的过程。过程。电电解解质质的的凝

10、凝聚聚能能力力可可用用凝凝聚聚值值表表示示，即即使使胶胶粒粒发发生生凝聚作用的最小电解质浓度（凝聚作用的最小电解质浓度（mmol/L）。）。一一般般反反离离子子的的价价数数越越高高，凝凝聚聚值值越越小小，即即凝凝聚聚能能力力越强。越强。如如 Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+絮絮凝凝指指使使用用絮絮凝凝剂剂（通通常常是是天天然然或或合合成成的的大大分分子子量量聚聚电电解解质质）将将胶胶体体粒粒子子交交联联成成网网，形形成成10mm10mm大小絮凝团的过程。大小絮凝团的过程。其其中中絮絮凝凝剂剂主主要要起起架架桥桥作作用用，工工业业上上使使用用到到的的有有聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺类

11、类衍衍生生物物、聚聚合合铝铝盐盐、海海藻藻酸酸钠钠、壳聚糖等，目前最常用的是聚丙烯酰胺类衍生物。壳聚糖等，目前最常用的是聚丙烯酰胺类衍生物。1）板框(plate and frame)压滤机板框过滤机结构图板框过滤机结构图 1-1-尾板尾板 2-2-滤框滤框 3-3-滤板滤板 4-4-主梁主梁 5-5-头板头板 6-6-紧压装置紧压装置二）发酵液过滤常用设备板框过滤机板框过滤机Plate shifter1500 x 1500 Filter Press Cloth washing1）板框(plate and frame)压滤机2）带式压滤机二）发酵液过滤常用设备 发酵后期要少加消泡剂和少进行补料，

12、防止消泡剂和发酵后期要少加消泡剂和少进行补料，防止消泡剂和未用完的培养基增加过滤难度；未用完的培养基增加过滤难度；菌体自溶前放罐可防止因菌体自溶释放出的代谢产物菌体自溶前放罐可防止因菌体自溶释放出的代谢产物增加发酵液黏度增加发酵液黏度影响发酵液过滤的因素影响发酵液过滤的因素1 1）菌体细胞体积）菌体细胞体积 真菌菌丝体较粗大，发酵液不需特殊处理，易过滤；真菌菌丝体较粗大，发酵液不需特殊处理，易过滤；放线菌菌丝细而分支，交织成网格状，较难过滤，放线菌菌丝细而分支，交织成网格状，较难过滤，发酵液需经预处理，凝固蛋白质等胶体物质，提高过滤发酵液需经预处理，凝固蛋白质等胶体物质，提高过滤速度；速度；细

13、菌菌体更小，发酵液如不经絮凝等预处理，很难用细菌菌体更小，发酵液如不经絮凝等预处理，很难用常规过滤设备进行过滤操作。常规过滤设备进行过滤操作。2 2）培养基组成）培养基组成黄豆饼粉、花生饼粉等会增加过滤难度黄豆饼粉、花生饼粉等会增加过滤难度3 3）放罐时机）放罐时机当发酵液中有不溶性多糖时，会使发酵液的黏度增大而影响当发酵液中有不溶性多糖时，会使发酵液的黏度增大而影响过滤速度；可用酶将其转化成可溶性单糖，提高滤速。过滤速度；可用酶将其转化成可溶性单糖，提高滤速。提高过滤性能的方法提高过滤性能的方法1 1）加助滤剂）加助滤剂 助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，能使滤饼疏松，从助滤剂是一种不可压缩的

14、多孔微粒，能使滤饼疏松，从而增加滤速；而增加滤速；常用硅藻土、珍珠岩等；常用硅藻土、珍珠岩等；加入方法有两种：加入方法有两种：a)a)预先在滤布上铺上一层预先在滤布上铺上一层1-2mm1-2mm厚的厚的助滤剂；助滤剂；b)b)直接把助滤剂加入发酵液中。直接把助滤剂加入发酵液中。2 2）添加填充凝固剂）添加填充凝固剂如如CaSOCaSO4 4、AlPOAlPO4 4等本身就是助滤剂，且能使胶状物和等本身就是助滤剂，且能使胶状物和悬浮物凝固悬浮物凝固3 3）酶解法）酶解法（沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶）（沉淀、吸附、萃取、超滤、结晶）发酵液发酵液初步纯化初步纯化细胞碎片分离细胞碎片分离细胞破碎细胞

15、破碎细胞分离细胞分离高度纯化高度纯化成品加工成品加工预处理预处理胞外产物胞外产物（加热、调（加热、调pH、絮凝）、絮凝）（过滤、离心分离、膜分离（过滤、离心分离、膜分离)（匀浆、研磨、酶解）（匀浆、研磨、酶解）（离心分离、双水相萃取、膜分离）（离心分离、双水相萃取、膜分离）（重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离）（重结晶、离子交换、色谱分离、膜分离）（浓缩、无菌过滤、干燥、成型）（浓缩、无菌过滤、干燥、成型）胞内产物胞内产物提取提取精制精制产品的收得率和质量控制产品的收得率和质量控制。细胞破碎 目的代谢产物并非都是分泌型的，许多是存目的代谢产物并非都是分泌型的，许多是存在于细胞内的，特别是基因工

16、程菌在细胞内形成在于细胞内的，特别是基因工程菌在细胞内形成的包含体是不分泌的，故需进行细胞破碎。的包含体是不分泌的，故需进行细胞破碎。大规模破碎细胞常用方法；大规模破碎细胞常用方法；利用高压使细胞悬液通过针型阀，由于突然减压和高利用高压使细胞悬液通过针型阀，由于突然减压和高速冲击撞击环，造成细胞破碎。速冲击撞击环，造成细胞破碎。影响破碎的主要因素是压力、温度和循环次数影响破碎的主要因素是压力、温度和循环次数1 1）高压匀浆法）高压匀浆法高压匀浆器排出阀高压匀浆器排出阀2 2）高速球磨法）高速球磨法高速球磨机高速球磨机1-物料进口物料进口 2-物料出口物料出口 3、4-冷却水进、出口冷却水进、出

17、口 5、6-夹套冷却水进、出口夹套冷却水进、出口由于圆盘的高速旋转，细胞悬浮液与极细的玻璃由于圆盘的高速旋转，细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使细胞得以破碎。细胞得以破碎。3 3）超声波法）超声波法 常用超声波频率常用超声波频率15-25kHz15-25kHz；原理：由于超声波产生极为强烈的冲击波压力，引起原理：由于超声波产生极为强烈的冲击波压力，引起黏滞性旋涡在介质中的细胞上造成了剪切力，促使细胞内黏滞性旋涡在介质中的细胞上造成了剪切力，促使细胞内液体发生流动，造成细胞破碎；液体发生流动，造成细胞破碎；超声波振荡易引起温

18、度的剧烈上升，操作时需冷却；超声波振荡易引起温度的剧烈上升，操作时需冷却；通常杆菌比球菌易破，阴性菌比阳性菌易破通常杆菌比球菌易破，阴性菌比阳性菌易破4 4）酶解法）酶解法 专一性强，条件温和；但费用较高 酶解法的另一方式是利用微生物的自溶作用大多数微生物都能产生一种可以水解自身细胞壁的酶；当大多数微生物都能产生一种可以水解自身细胞壁的酶；当改变一定的环境条件，可诱发这种酶的过量产生或激发其改变一定的环境条件，可诱发这种酶的过量产生或激发其他自溶酶产生，而发生自溶现象。他自溶酶产生，而发生自溶现象。5 5）渗透压冲击法）渗透压冲击法 将细胞先放入高渗透压的介质中，如高浓度的甘油或蔗将细胞先放入

19、高渗透压的介质中，如高浓度的甘油或蔗糖液，在达到平衡后，介质突然被稀释，或将细胞转入水糖液，在达到平衡后，介质突然被稀释，或将细胞转入水或缓冲液中，水就会迅速进入细胞内，致使细胞膨胀，引或缓冲液中，水就会迅速进入细胞内，致使细胞膨胀，引起细胞壁的破裂；起细胞壁的破裂；此法适用于细胞壁较脆弱的，或者细胞壁预先用酶处理此法适用于细胞壁较脆弱的，或者细胞壁预先用酶处理的，或细胞壁合成受到抑制的微生物；的，或细胞壁合成受到抑制的微生物；6 6）反复冻结）反复冻结-融化法融化法 将细胞反复在低温下突然冷冻后在室温下融化，引起将细胞反复在低温下突然冷冻后在室温下融化，引起细胞破裂；低温冷冻一方面能使细胞膜

20、的疏水键结构断细胞破裂；低温冷冻一方面能使细胞膜的疏水键结构断裂，从而增加细胞的亲水性能；另一方面胞内水结晶使裂，从而增加细胞的亲水性能；另一方面胞内水结晶使细胞内外溶液浓度发生变化，引起细胞突然膨胀而破裂。细胞内外溶液浓度发生变化，引起细胞突然膨胀而破裂。该法适用于细胞壁较脆弱的细胞该法适用于细胞壁较脆弱的细胞细胞破碎方法二、提取（初步分离）二、提取（初步分离）（一）沉淀法（一）沉淀法（PrecipitationPrecipitation）沉淀是通过改变条件或加入某种沉淀是通过改变条件或加入某种试剂，使溶液中的溶质由液相转变试剂，使溶液中的溶质由液相转变为固相析出的过程。为固相析出的过程。方

21、法简单、成本低、使用广泛，方法简单、成本低、使用广泛，初步分离的常用手段。初步分离的常用手段。盐析法有机溶剂沉淀法等电点沉淀法非离子型聚合物沉淀法聚电解质沉淀法生成盐复合物沉淀法热变性及酸碱变性沉淀法 中性盐的加入能中性盐的加入能破坏蛋白质的胶体性质破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白，使蛋白质的溶解度降低而析出。质的溶解度降低而析出。1.盐析法 (Salting out)破坏了蛋白质在水中存在的两个因素破坏了蛋白质在水中存在的两个因素(水化层和电水化层和电荷荷),),从而使蛋白质沉淀从而使蛋白质沉淀。将大量盐加到蛋白质溶液中，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的高浓度的盐离子（如硫酸

22、铵的SO4SO4和和NH4)NH4)有很强的水化有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水失水”，于是，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。盐溶(salting in)：许多蛋白在低盐浓度下发生盐溶现象许多蛋白在低盐浓度下发生盐溶现象（比在纯水中的溶解度大大增加）；（比在纯水中的溶解度大大增加）；高盐浓度则盐析，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低；高盐浓度则盐析，离子强度越大，蛋白质的溶解度

23、越低；由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。浓度可使各种蛋白质分段沉淀。1 1）蛋白质浓度）蛋白质浓度蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。2 2）离子强度和种类）离

24、子强度和种类3 3）温度）温度 温度是影响溶质溶解度的重要因素，升高温度可以增加温度是影响溶质溶解度的重要因素，升高温度可以增加许多无机盐和小分子有机化合物的溶解度；许多无机盐和小分子有机化合物的溶解度；4 4）pHpH 由于蛋白质在等电点时最易沉淀，故可选择等电点的由于蛋白质在等电点时最易沉淀，故可选择等电点的pHpH作为盐析作为盐析pHpH影响盐析的因素影响盐析的因素2.等电点沉淀法原理：利用两性电解质在电中性时溶解度最低利用两性电解质在电中性时溶解度最低优点：许多蛋白的等电点都在偏酸范围内，而许多无机酸许多蛋白的等电点都在偏酸范围内，而许多无机酸的价格低廉；的价格低廉；缺点：酸化时易引起

25、蛋白失活酸化时易引起蛋白失活 不少蛋白质与金属结合后会发生等电点偏移，如胰岛不少蛋白质与金属结合后会发生等电点偏移，如胰岛素的等电点为素的等电点为5.35.3，在与，在与Zn Zn 2+2+结合形成胰岛素锌盐，其等结合形成胰岛素锌盐，其等电点升为电点升为6.26.2；故加入金属离子后选择等电点沉淀时，要；故加入金属离子后选择等电点沉淀时，要注意调整注意调整pHpH。二、提取（初步分离）二、提取（初步分离）（二）结晶法（二）结晶法（crystallization）物质从液态（液体或熔融体）或气态形成晶体物质从液态（液体或熔融体）或气态形成晶体的过程叫的过程叫结晶。加入能使结晶溶质溶解度降低的物质

26、，让结晶溶质形成过饱和液；例如卡那霉素不溶于乙醇，向卡那霉素脱色液中加入终浓例如卡那霉素不溶于乙醇，向卡那霉素脱色液中加入终浓度为度为60%-80%60%-80%的乙醇，就结晶析出的乙醇，就结晶析出;在普鲁卡因青霉素结晶时，加入一定量的食盐，可使结晶在普鲁卡因青霉素结晶时，加入一定量的食盐，可使结晶更易析出更易析出结晶方法结晶方法 （过饱和溶液形成的方法）（过饱和溶液形成的方法）1 1）浓缩结晶）浓缩结晶减压蒸发浓缩，达到过饱和减压蒸发浓缩，达到过饱和2 2）冷却结晶）冷却结晶适用于溶解度随温度变化很大的物质；先加适用于溶解度随温度变化很大的物质；先加热使其溶解，然后冷却结晶；热使其溶解，然后

27、冷却结晶；3 3）化学反应结晶）化学反应结晶 加入反应剂或调pH，使生成更低可溶性物质；如在青霉素醋酸丁酯提取液中，加入乙醇如在青霉素醋酸丁酯提取液中，加入乙醇-醋酸钾，因醋酸钾，因形成的青霉素钾盐难溶于醋酸丁酯而结晶析出。形成的青霉素钾盐难溶于醋酸丁酯而结晶析出。4 4）解析结晶（）解析结晶（drowningoutdrowningout）三、精制（高度纯化）三、精制（高度纯化）（一）离子交换法（一）离子交换法 (Ion exchange)离子交换工作原理离子交换工作原理 根据物质的酸碱性、极性不同，在水溶液中所带阴阳离根据物质的酸碱性、极性不同，在水溶液中所带阴阳离子不同，电荷不同的物质对层

28、析柱上的离子交换剂有不同的子不同，电荷不同的物质对层析柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变洗脱液的离子强度或亲和力，改变洗脱液的离子强度或pHpH，不同物质就能依次从，不同物质就能依次从层析柱中分离出来。层析柱中分离出来。在离子交换过程中，离子首先扩散到树脂表面，通过树在离子交换过程中，离子首先扩散到树脂表面，通过树脂扩散到交换位置，在交换位置进行离子交换。被交换的分脂扩散到交换位置，在交换位置进行离子交换。被交换的分子所带电荷越多，它与树脂的结合越紧密，也就越不容易被子所带电荷越多，它与树脂的结合越紧密，也就越不容易被其它离子所取代。被交换的离子扩散到树脂表面，洗脱液通其它离子所取代。被交换

29、的离子扩散到树脂表面，洗脱液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中。过，被交换的离子扩散到外部溶液中。三、精制（高度纯化）三、精制（高度纯化）（二）色谱分离法（二）色谱分离法用微量注射器针头或微细管把样品点一用微量注射器针头或微细管把样品点一小点在层析床的一端。要求层析床必须小点在层析床的一端。要求层析床必须完全干燥，点样之后转入装有展层剂的完全干燥，点样之后转入装有展层剂的玻璃槽中。当展层剂的前沿跑到滤纸全玻璃槽中。当展层剂的前沿跑到滤纸全长的长的80-90时，将层析床取出。时，将层析床取出。纸层析纸层析可以用可以用相对迁移率（相对迁移率（Rf）来表示来表示一种物质的迁移：一种物质的迁移：或者也可以用或者也可以用相对于一种已知迁相对于一种已知迁移率的标准物的迁移（移率的标准物的迁移（Rx）来表示：来表示：待测物移动的距离待测物移动的距离标准物移动的距离标准物移动的距离Rx=组分移动的距离组分移动的距离溶剂移动的距离溶剂移动的距离Rf=薄层扫描仪薄层扫描仪快速；快速；可用腐蚀性试剂显色；可用腐蚀性试剂显色；易于制备少量样品。易于制备少量样品。薄层层析薄层层析十六元环大环内酯类抗生素的薄层色谱图十六元环大环内酯类抗生素的薄层色谱图1:乙酰螺旋霉素乙酰螺旋霉素;2:麦迪霉素麦迪霉素;3:麦白霉素麦白霉素;4:吉他霉素吉他霉素;5:乙酰吉他霉素乙酰吉他霉素