应用响应面法优化桑叶多糖_黄酮和生物碱联合提取工艺条.pdf

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1、Science of Sericulture蚕业科学收稿日期:2013 03 17接受日期:2013 03 25资助项目:现代农业产业技术体系专项(CARS-22)，国家自然科学基金项目(No 31071534)，广东省自然科学基金团队项目(No9351064001000002)，广东省科技计划项目(No 2011-A030100003)，广州市科技计划重大专项(No 2011Y2-00009)，广州市珠江科技新星专项(穗科信字 2013 6 号)。第一作者信息:刘凡(1983 )，男，博士，助理研究员。E-mail:liufan1234126 com通信作者信息:廖森泰，研究员，硕士生导师。

2、E-mail:liaost163 com*Corresponding author E-mail:liaost163 com2013，39(3):0568 0575ISSN 0257 4799;CN 32 1115/SE-mail:CYKE chinajournal net cn应用响应面法优化桑叶多糖、黄酮和生物碱联合提取工艺条件刘凡黄勇廖森泰肖更生邹宇晓施英穆利霞刘军沈维治(广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广东省农产品加工重点实验室，广州510610)摘要为了高效提取桑叶活性物质，采用热水浸提桑叶中的多糖和黄酮后，再用乙醇-盐酸溶液进一步提取桑叶生物碱，并通过响应面法优化3 类桑叶

3、生物活性物质的联合提取工艺条件。优化后的桑叶多糖和黄酮提取工艺条件为提取时间93 min、提取温度 81、料液质量浓度 0.05 g/mL、提取次数 4 次，在此条件下实测桑叶多糖和黄酮的提取得率分别为 15.574%、2.693%;优化后的桑叶生物碱提取工艺条件为提取时间 142 min、料液质量浓度 0.04 g/mL、乙醇体积分数 26.0%、提取次数3 次，在此条件下实测桑叶生物碱的提取得率为 0.398%。建立的回归模型拟合性好，可用于预测桑叶活性物质提取得率。关键词桑叶;多糖;黄酮;生物碱;工艺条件;响应面法中图分类号S888;S886 9;R284 2文献标识码B文章编号0257

4、 4799(2013)03 0568 08Process Optimization for Combined Extraction of Polysaccharide，Flavones and Alkaloid from Mulberry Leaves by Response SurfaceMethodologyLIU FanHUANG YongLIAO Sen-Tai*XIAO Geng-ShengZOU Yu-XiaoSHI YingMU Li-XiaLIU JunSHEN Wei-Zhi(Sericulture Agri-food Research Institute，Guangdong

5、 Academy of Agricultural Sciences，Key Laboratory of Agro-foodScience and Technology of Guangdong，Guangzhou 510610，China)AbstractTo obtain active substances from mulberry leaves efficiently，we first extracted polysaccharide and flavonesfrom mulberry leaf by hot water method，and then extracted alkaloi

6、d from mulberry leaf using ethanol-hydrochloric acidsolution The combined process for extracting these three active substances from mulberry leaf was optimized by re-sponse surface methodology The optimized condition for extracting polysaccharide and flavones from mulberry leaf wasextraction time 93

7、 min，extraction temperature 81，mass concentration of raw material 0.05 g/mL，and 4 times of ex-traction Under this condition，the actual extraction yield of polysaccharide and flavones was 5.574%and 2.693%，re-spectively The optimized condition for extracting alkaloid from mulberry leaf was extraction

8、time 142 min，mass concen-tration of raw material 0.04 g/mL，volume fraction of ethanol 26.0%，and 3 times of extraction Under this condition，theactual extraction yield of mulberry leaf alkaloid was 0.398%The result indicated that the established model had good fit-ting performance，and could be used to

9、 predict theextraction yield of active substances from mulberry leavesKey wordsMulberry leaf;Polysaccharide;Flavones;Al-kaloid;Technological condition;Response surface meth-odology桑叶是我国传统的中药材，也是国家卫生部公布的药食两用资源，其药用价值早在神农本草经中就有记载1。桑叶具有降血糖等多种药理活性，第 3 期刘凡等:应用响应面法优化桑叶多糖、黄酮和生物碱联合提取工艺条件569中医一直把桑叶作为糖尿病治疗药方的重

10、要配伍之一。本草纲目 对桑叶的记载有“汁煎代茗，能止消渴”、“灸熟煎饮，代茶止渴”，所指消渴症相当于现代医学的糖尿病。现代医药学研究证实桑叶中的多糖、黄酮和生物碱等是桑叶降血糖活性的重要物质基础2 6。桑叶多糖、黄酮和生物碱等活性物质的提取工艺技术已有较多的研究报道7 11，这些研究大部分是针对桑叶中某一种活性物质的提取工艺技术，仅有少数研究是同时提取桑叶中 2 种或 2种以上活性物质。李先佳等12通过正交试验对桑叶黄酮和多糖成分的提取工艺进行优化，结果表明用水提法对桑叶黄酮和多糖进行共同提取是可行的。刘杰等13通过正交试验优化对桑叶黄酮和生物碱的同步提取工艺，结果表明用酸性醇溶液(pH=2)

11、能较好地实现桑叶黄酮和生物碱的共同提取，而且提取率较高。但这些研究均未对提取后的桑叶残渣进行处理，未能实现桑叶资源的充分利用。本研究以桑叶粉为原料，采用热水浸提桑叶多糖和黄酮，再用乙醇-稀盐酸溶液从桑叶残渣中提取生物碱，并应用响应面法(response surfacemethodolo-gy，RSM)对联合提取桑叶中 3 类活性物质的工艺条件进行优化，实现高效提取桑叶活性物质的目的。1材料与方法1 1材料及主要试剂和仪器供试桑品种为大 10，栽植于广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所国家桑树种质资源华南分圃。采摘供试桑品种5 年生植株的 7 17 位叶，新鲜桑叶于60 烘干至恒重，粉碎过60

12、 目筛，备用。葡萄糖，芦丁，4-羟基哌啶，重蒸苯酚，硫酸，硝酸铝，亚硝酸钠，氢氧化钠，丙酮，盐酸，乙醇，皆为国产分析纯。HWS26 型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)，UV21700 紫外分光光度计(日本岛津)，EYELA N21001 旋转蒸发仪(日本东京理化器械株式会社)。1 2桑叶多糖、黄酮和生物碱的联合提取工艺流程取适量桑叶粉用热水浸提得到含有桑叶多糖和黄酮的水溶液，桑叶残渣用乙醇-盐酸溶液提取得到含有桑叶生物碱的乙醇-盐酸溶液。提取工艺流程如图 1 所示。图 1桑叶多糖、黄酮和生物碱的联合提取工艺流程示意图Fig 1Flow chart of combined extrac

13、tion technological process for polysaccharide，flavones and alkaloid from mulberry leaves1 3提取工艺条件的单因素试验13 1桑叶多糖和黄酮提取工艺条件分别以桑叶多糖和黄酮提取得率为考察指标，各因素基本设置为提取时间 60 min、提取温度 70、料液质量浓度 0.050 g/mL、提取次数 1 次，分别对其中某一个因素做调整进行单因素试验。提取时间分别调整为 30、60、90、120、150、180 min，提取温度分别调整为 50、60、70、80、90，料液质量浓度分别调整为 0.033、0.040、

14、0.050、0.067、0.100 g/mL，提取次数分别调整为 1、2、3、4、5 次，考察各单因素对桑叶多糖和黄酮提取得率的影响。每个处理重复 3 次。13 2桑叶生物碱提取工艺条件以桑叶生物碱提取得率为考察指标，基本设置为提取时间60 min、料液质量浓度 0.05 g/mL、乙醇体积分数 25%(用0.05 mol/L 盐酸溶液配制)、提取次数 1 次，分别对570蚕业科学2013;39(3)其中某一个因素做调整进行单因素试验。提取时间分别调整为 30、60、90、120、150、180 min，料液质量浓度分别调整为 0.033、0.040、0.050、0.067、0.100g/mL

15、，乙醇体积分数分别调整为 15%、20%、25%、30%、35%、40%，提取次数分别调整为 1、2、3、4、5次，考察各单因素对桑叶生物碱提取得率的影响。每个处理重复 3 次。1 4提取工艺条件的优化试验在桑叶多糖和黄酮与生物碱提取工艺条件的单因素试验基础上，确定 Box-Behnken 设计的中心点，分别选取 4 因素 3 水平设计试验，对桑叶多糖和黄酮与生物碱的提取工艺条件通过响应面分析法进行优化，并按优化条件进行验证试验。每个处理重复3 次。1 5活性成分含量测定与提取得率计算方法1 5 1桑叶多糖含量测定采用改进的苯酚-硫酸法14 测定。以葡萄糖为标准品，利用葡萄糖标准曲线计算桑叶多

16、糖含量。以葡萄糖溶液质量浓度(g/mL)为横坐标，D(490 nm)为纵坐标，得标准曲线方程:y=0.011 4x+0.026 7，R2=0.999 2。1 5 2桑叶黄酮含量测定采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法15 测定。以芦丁为标准品，利用芦丁标准曲线计 算 桑 叶 黄 酮 含 量。以 芦 丁 溶 液 质 量 浓 度(g/mL)为横坐标，D(510 nm)为纵坐标，得标准曲线方程:y=0.006 3x 0.007 6，R2=0.999 3。1 5 3桑叶生物碱含量测定采用雷氏盐比色法11 测定。以 4-羟基哌啶为标准品，利用 4-羟基哌啶标准曲线计算桑叶生物碱含量。以 4-羟基哌啶溶液浓度(mo

17、l/L)为横坐标，D(523 nm)为纵坐标，得标准曲线方程:y=21.154 0 x+0.007 5，R2=0.999 8。15 4活性物质提取得率的计算准确称取桑叶粉样品(10.00 g/份)，按“1 2”中的方法提取获得桑叶多糖、黄酮和生物碱提取液。将提取液适度稀释后，分别按“1 5 1”、“1 5 2”和“1 5 3”的方法测定桑叶多糖、黄酮、生物碱溶液的吸光度，利用回归方程计算多糖、黄酮的质量浓度()和生物碱浓度(c)，再按公式(1)计算桑叶多糖、黄酮的提取得率，按公式(2)计算桑叶生物碱的提取得率。多糖和黄酮的提取得率=D VW 106 100%(1)。式中:为从回归方程中求得的多

18、糖和黄酮的质量浓度(g/mL)，D 为稀释因子，V 为溶液总体积(mL)，W 为 样 品 质 量(g)。生 物 碱 的 提 取 得 率=c D V MW 103 100%(2)。式中:c 为从回归方程中求得的生物碱浓度(mol/L)，D 为稀释因子，V 为溶液总体积(mL)，M 为 4-羟基吡啶的摩尔质量(g/mol)，W 为样品质量(g)。1 6数据统计分析采用 SAS v9.1 和 SPSS v16.0 软件对试验数据进行统计分析，处理间差异采用 LSD 法(Least Sig-nificant Difference)比较，显著性水平 P 0.05。2结果与分析21提取工艺各个因素对 3

19、类桑叶生物活性物质提取效果的影响21 1对桑叶多糖和黄酮提取效果的影响在桑叶多糖和黄酮提取工艺条件的单因素试验中，提取时间、提取温度、料液质量浓度和提取次数对桑叶中多糖和黄酮的提取效果的影响见图 2。结果显示，当提取时间为 90 min 时，桑叶多糖和黄酮的提取得率相对较高，继续延长提取时间对其提取得率的影响不明显;当提取温度为 80 时，桑叶多糖和黄酮的提取得率达到峰值，升高或降低提取温度均会明显影响提取效果;当原料质量浓度为0.05 g/mL 时，桑叶黄酮的提取得率最高，同时桑叶多糖的提取得率也相对较高，继续降低原料质量浓度(即增加提取溶剂用量)对多糖提取效果无显著影响;而提取次数为 3

20、次时，桑叶多糖和黄酮的提取得率均达到较高水平，继续增加提取次数对提取效果无显著影响。确定共同提取桑叶多糖和黄酮的单因素适宜条件为:提取时间90 min，提取温度80，原料质量浓度 0.05 g/mL，提取次数 3 次。21 2对桑叶生物碱提取效果的影响在桑叶生物碱的提取工艺条件的单因素试验中，提取时间、料液质量浓度、乙醇体积分数和提取次数对桑叶中生物碱的提取效果的影响见图 2。结果显示，在提取时间为 120 min、料液质量浓度为 0.05 g/mL、乙醇体积分数为 25%、提取次数为 2 次时桑叶生物碱的提取得率相对较高。确定提取桑叶生物碱的单因素适宜条件为:提取时间 120 min，料液质

21、量浓度 0.05 g/mL，乙醇体积分数 25%，提取次数2 次。第 3 期刘凡等:应用响应面法优化桑叶多糖、黄酮和生物碱联合提取工艺条件571不同字母表示存在显著差异(P 0.05)。Different letters indicate significant difference(P 0.05)图 2提取工艺条件对 3 类桑叶生物活性物质提取得率的影响Fig 2Effect of extraction process conditions on the yield of three kinds of active substances from mulberry leaves572蚕业科学

22、2013;39(3)2 23 类桑叶生物活性物质联合提取工艺条件的优化22 1多糖和黄酮提取工艺条件优化按照单因素试验结果，确定 Box-Behnken 设计的因素与水平(表 1)。桑叶多糖和黄酮提取工艺条件的优化设计及试验结果列于表 2。根据表 2 的数据，计算各项回归系数，分别建立 2 种物质提取得率与 4 个提取工艺条件因素的数学回归模型:Y1(多糖提取得率)=91.551+0.211X1+1.566X2+849.033X3+6.100X4 0.001X1X1+0.022X1X3 0.001X2X20.187X2X3+0.009X2X48 512.083X3X3+2.800X3X40.8

23、18X4X4;Y2(黄 酮 提 取 得 率)=21.079+0.027X1+0.431X2+138.842X3+0.677X40.013X1X30.003X2X2+0.078X2X31 457.500X3X3+1.500X3X40.083X4X4。表 1桑叶多糖、黄酮提取工艺优化试验设计的因素与水平Table 1Design of factors and levels for process optimization ofextracting polysaccharide and flavones from mulberry leaves水平Level提取时间/minExtractiontim

24、e(X1)提取温度/Extractiontemperature(X2)料液质量浓度/(g mL1)Mass concentrationof raw materials(X3)提取次数/次Extractiontimes(X4)1607000420908000531120900064表 2桑叶多糖和黄酮提取工艺条件的优化试验结果Table 2Experimental results from process optimization for extracting polysaccharide and flavones from mulberry leaves处理Treatment提取时间Extra

25、ctiontime(X1)提取温度Extractiontemperature(X2)料液质量浓度Mass concentrationof raw material(X3)提取次数Extractiontimes(X4)多糖提取得率/%Yield ofpolysaccharide(Y1)黄酮提取得率/%Yield offlavones(Y2)1110012437211821100126902089311001241221634110012588211850011108301970600111506525347001110566201480011149132638910011083320741010

26、01148872534111001111932104121001152922564130110129932044140110129422073150110131702133160110130442193171010123612148181010122352193191010135492208201010134492237210101107971761220101149132400230101108021821240101152912474250000146852460260000148372519270000146102533第 3 期刘凡等:应用响应面法优化桑叶多糖、黄酮和生物碱联合提取工艺

27、条件57322 2生物碱提取工艺条件优化按照上述试验得到桑叶生物碱的最佳单因素条件，确定 Box-Be-hnken 设计的因素与水平(表 3)。桑叶生物碱提取工艺条件的优化设计及试验结果列于表 4。根据表4 的数据，计算各项回归系数，建立生物碱提取得率与 4 个提取工艺条件因素的数学回归模型:Y(生物碱提取得率)=1.011+0.008A1+10.017A2+0.040A3+0.121A4 0.022A1A2 111.667A2A20.035A2A3+0.775A2A4 0.001A3A3 0.003A3A40.056A4A4。表 3桑叶生物碱提取工艺优化试验设计的因素与水平Table 3De

28、sign of factors and levels for process optimization ofextracting alkaloid from mulberry leaves水平Level提取时间/minExtractiontime(A1)料液质量浓度/(g mL1)Mass concentrationof raw materials(A2)乙醇体积分数/%Volume fractionof ethanol(A3)提取次数/次Extractiontimes(A4)19000420101200052521150006303表 4桑叶生物碱提取工艺条件的优化试验结果Table 4Ex

29、perimental results from process optimization for extracting alkaloid from mulberry leaves处理Treatment提取时间Extraction time(A1)料液质量浓度Mass concentration of raw material(A2)乙醇体积分数Volume fraction of ethanol(A3)提取次数Extraction times(A4)提取得率/%Yield of alkaloid(Y)111000 315211000 270311000 395411000 3235001102

30、21600110 334700110202800110 3799100102171010010 31911100102061210010 3611301100 3681401100 3531501100 3001601100 2781710100 2961810100 2741910100 3382010100 3112101010 2592201010 37223010101832401010 3272500000 3572600000 3682700000 349574蚕业科学2013;39(3)2 33 种桑叶活性物质提取率预测的模型方程建立及显著性检验利用统计软件 SAS v9.1 对

31、表 2 和表 4 的数据进行回归分析，分别得到 3 类桑叶活性物质提取得率预测的回归模型方差分析结果(表 5)。三者的模型回归都极显著，且失拟项不显著，说明方程对试验结果的拟合效果很好。桑叶多糖、黄酮、生物碱提取得率预测模型的校正决定系数 Radj2分别为 0.9527、0.925 8、0.931 9，说明模型能解释约 97%、93%和 93%的响应值的变化，仅有 3%、7%、7%的总变异不能用该模型解释;决定系数 R2分别为0.978 2、0.965 7、0.968 6，说明模型拟和程度良好，试验误差小，可用建立的模型来分析和预测桑叶中多糖、黄酮、生物碱3 类活性物质的提取得率。表 53 类

32、桑叶活性物质提取得率预测的回归模型方差分析Table 5Analysis of variance for regression equation of predicted extraction yield of three kinds of active substances frommulberry leaves名称方差来源Source of variancev平方和Sum of squares均方Mean squareF 值F valueP 值P value多糖Polysaccharide模型Model14635604540383720 000 1 线性部分Linear part45443

33、513 6091150210 000 1 二次项Quadratic490842271191930 000 1 交叉项Cross60041000700580999失拟项Lack of fit1013930139104140091总变异Total variance2664979 63R2=0.978 2Radj2=0.952 7黄酮Flavones模型Model1413990099241660 000 1 线性部分Linear part409820245593620 000 1 二次项Quadratic4041601042513900001 交叉项Cross600010000 200530999失

34、拟项Lack of fit100047000531070268总变异Total variance261449R2=0.965 7Radj2=0.925 8生物碱Alkaloid模型Model1400910006264050 000 1 线性部分Linear part400710018720120 000 1 二次项Quadratic400180004182150 000 1 交叉项Cross600020000 314620271失拟项Lack of fit1000030000 230590271总变异Total variance260094R2=0.968 6Radj2=0.931 9*为在

35、0.05 水平上差异显著，为在 0.01 水平上差异显著。*means significant difference at 0.05 level means significant difference at 0.01 level2 43 类桑叶生物活性物质的最佳提取工艺条件利用统计软件 SAS v9.1 预测桑叶多糖和黄酮提取得率，得到的优化提取工艺条件为:提取时间93.2 min，提取温度 80.8，料液质量浓度 0.05g/mL，提取次数 4.4 次。预测在此优化工艺条件下桑叶多糖和黄酮的提取得率分别为 16.103%和2.752%。修正提取工艺条件为:提取时间 93 min，提取温度

36、81，料液质量浓度 0.05 g/mL，提取次数 4 次。为了证实预测结果，采用上述工艺条件进行桑叶多糖和黄酮的提取试验，实测桑叶多糖和黄酮提取得率分别为 15.574%和 2.693%，相对误差分别为 3.28%和 2.14%。利用统计软件 SAS v9.1 预测桑叶生物碱提取得率，得到的优化提取工艺条件为:提取时间 141.8第 3 期刘凡等:应用响应面法优化桑叶多糖、黄酮和生物碱联合提取工艺条件575min，料液质量浓度 0.036 g/mL，乙醇体积分数25.7%，提取次数 2.6 次。预测在此工艺条件下桑叶生物碱的提取得率为 0.408%。从实际操作考虑，修正提取工艺条件为:提取时间

37、142 min，料液质量浓度 0.04 g/mL，乙醇体积分数 26.0%，提取次数3 次。采用上述工艺条件进行桑叶生物碱的提取试验，实测桑叶生物碱提取得率为 0.398%，相对误差为 2.45%。3讨论本研究采用响应面分析法优化连续提取桑叶多糖、黄酮和生物碱的提取工艺，建立了 3 类活性物质提取得率的预测模型，得到了桑叶多糖和黄酮与桑叶生物碱联合提取的最佳工艺条件。在优化的工艺条件下，桑叶多糖和黄酮与桑叶生物碱的实际提取得率分别为 15.574%、2.693%、0.398%，与模型预测值误差在 5%以内。结果表明，建立的预测模型拟合性好，可用于 3 类桑叶活性物质提取得率的分析、预测。本试验

38、在前人相关研究12 13 的基础上采用响应面分析法对桑叶 3 类活性物质提取工艺条件做进一步优化，取得了较好的结果。但本研究得到的桑叶多糖、黄酮、生物碱的提取得率与其它研究报道的结果仍存在一定差异，其中桑叶多糖的提取得率高于王芳等16 报道的桑叶多糖热水提取的结果(11.50%)，桑叶黄酮的提取得率低于刘利等17 报道的桑叶总黄酮提取结果(5.679%)，而桑叶生物碱的提取得率与文献 11报道的结果相符。这些试验结果存在差异的原因可能是由于本研究采用了联合提取桑叶中 3 类活性物质的方法及工艺技术，而没有采用提取单一活性物质的工艺流程对桑叶进行前处理。另外，本研究所用桑树品种与其它研究所选桑树

39、品种也不同，而不同桑品种桑叶中的各种活性物质的含量存在差异，有的甚至存在极显著差异18 20，这也可能是造成各类桑叶活性物质提取结果不同的原因。参考文献(References)1高学敏 中药学M 北京:人民卫生出版社，2000:85 86 2丁盈，蒋梅香，周应军，等 桑叶降糖活性成分研究J 中国药物化学杂志，2007，17(6):386 389 3邢东旭，廖森泰，刘吉平，等 热水浸提和微波萃取桑叶多糖的药效比较及降血糖机制初探 J 蚕业科学，2008，34(3):529 533 4原爱红，黄哲，马骏，等 桑叶黄酮的提取及其降糖作用的研究 J 中草药，2004，35(11):1242 1243

40、5陈建国，步文磊，来伟旗，等 桑叶多糖降血糖作用及其机制研究 J 中草药，2011，42(3):515 520 6Asano N，Oseki K，Tomioka E，et al N-containing sugars from Mo-rus alba and their glycosidase inhibitory activitiesJ CarbohydrRes，1994，259(2):243 255 7凌庆枝，高莉莉，袁怀波，等 用响应面分析法优化桑叶水溶性多糖的提取工艺 J 蚕业科学，2009，35(3):666 670 8赵凤琴，李先佳，任丽平 正交试验优选桑叶黄酮及其降糖作用研究 J

41、 安徽农业科学，2009，37(20):9485 9486 9张军，穆莉，檀华蓉，等 桑叶中黄酮化合物的提取工艺及不同品种不同时期的含量变化J 蚕业科学，2006，32(1):142 145 10 沈维治，廖森泰，刘吉平，等 用二次回归正交旋转组合设计优化桑叶多酚的提取工艺 J 蚕业科学，2009，35(3):594 598 11 李凡，裘雅渔，钱文春，等 桑叶中总生物碱和 1-脱氧野尻霉素的含量考察J 中国药学杂志，2008，43(3):176 179 12 李先佳，郁建平，都国栋 桑叶总黄酮和多糖提取工艺优化 J 食品科学，2005，26(6):159 162 13 刘杰，潘见，张文成，等

42、 富含黄酮和生物碱的桑叶提取物的提取工艺研究J 食品科学，2009，30(12):52 56 14 Kodama N，Murata Y，Asakawa A，et al Maitake D-fraction en-hances antitumor effects and reduces immunosuppression by mito-mycin-C in tumor-bearing miceJ Nutrition，2005，21(5):624 629 15 Da Silva S L，Da Silva A，Honrio K M，et al The influence of e-lectroni

43、c，steric and hydrophobic properties of flavonoid compoundsin the inhibition of the xanthine oxidaseJ J Mol Struc，Theo-chem，2004，684(1 3):1 7 16 王芳，郑海雪 桑叶多糖的提取工艺研究J 浙江师范大学学报:自然科学版，2008，31(1):77 83 17 刘利，潘一乐 不同桑种桑叶总黄酮含量分析J 中国农学通报，2008，24(1):488 491 18 廖森泰，邢东旭，邹宇晓，等 广东桑种与其它桑种的桑叶多糖含量比较及影响因素分析J 蚕业科学，2008，34(3):490 493 19 沈维治，廖森泰，邹宇晓，等 桑叶酚类物质含量的变换规律研究 J 中草药，2010，41(11):20 23 20 刘凡，李平平，廖森泰，等98 份不同桑树品种资源的桑叶总生物碱及 1-脱氧野尻霉素含量测定 J 蚕业科学，2012，38(2):185 191