2第二章中药制剂分析鉴别解析.ppt

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1、第三章 中药制剂的鉴别【目的要求】掌握中药制剂的常用鉴别方法和鉴别依据熟悉中药制剂鉴别工作的基本程序。了解中药制剂鉴别的目的、意义以及在中药制剂质量控制与质量评价中的作用。思考题中药制剂的性状应该如何描述？描述的内容有哪些？中药制剂的显微鉴别与单味药材的粉末鉴别有何异同?下列哪些制剂可以使用显微鉴别法？各制剂相关药味显微鉴别特征是什么？六味地黄丸，口炎清颗粒，归芍地黄丸，牛黄解毒片，小建中合剂，七厘散思考题中药制剂常用的鉴别方法有哪些？为什么对一个药品的鉴别试验常采用几种鉴别方法？试阐述中药对照品、对照药材和对照提取物在中药制剂鉴别中的作用和意义。影响中药成方薄层色谱行为的主要因素有哪些？如何

2、考察薄层色谱方法的专属性、重现性和耐用性？基本概念中药制剂定性鉴别 利用中药制剂中各单味药材的形态、组织学特征及所含化学成分的结构特征、化学反应、光谱特征、色谱特征及某些物理化学常数来鉴别中药制剂各单味药材的真伪及存在与否的分析方法。第二节第二节 鉴别鉴别中药制剂的鉴别药味的选取原则如下中药制剂的鉴别药味的选取原则如下单味制剂；复方制剂，按照君臣佐使依次选择药味药味较多时，应首选君、臣药、贵重药、毒药鉴别处方中每一药味均鉴别，选择尽量多的药味写入质量标准，不少于处方1/3药味。生物鉴别生物鉴别 鉴鉴 别别 方方 法法理化鉴别法理化鉴别法显微鉴别法显微鉴别法化学反应法 微量升华法 毛细管电泳法

3、光谱法色谱分析法 性状鉴别法性状鉴别法 颜色形态形状气味其他Cycle nameAdd Your Text第一节 性状鉴别（DescriptionDescription）一、基本内容主要中药剂型的性状要求 大山楂大山楂丸丸本品为棕红色或褐色的大蜜丸；味酸、甜。本品为棕红色或褐色的大蜜丸；味酸、甜。三黄三黄片片本品为本品为糖衣片糖衣片，除去糖衣后显棕色，味苦，微涩。，除去糖衣后显棕色，味苦，微涩。小儿化毒小儿化毒散散本品为杏黄色至棕黄色的粉末；味苦，有清凉本品为杏黄色至棕黄色的粉末；味苦，有清凉感。感。正骨正骨水水本品为棕红色的澄清液体，气芳香。本品为棕红色的澄清液体，气芳香。金刚藤金刚藤胶囊胶

4、囊本品为胶囊剂，本品为胶囊剂，内容物内容物为棕黄色或棕褐色的颗粒，为棕黄色或棕褐色的颗粒，气微香，味苦、涩。气微香，味苦、涩。第一节 性状鉴别（Description）折光率旋光度比旋度熔 点凝 点相对密度反映药物的纯净程度二、物理常数第一节 性状鉴别（Description）折光率折光率：2020，用钠光谱的，用钠光谱的DD线线(589.3nm)(589.3nm)测测定供试品相对于空气的折光率。定供试品相对于空气的折光率。区区 分不同的油类或检查药品的纯杂程度分不同的油类或检查药品的纯杂程度旋光度和比旋度旋光度和比旋度：2020，用钠光谱的，用钠光谱的DD线线(589.3nm)(589.3n

5、m)测定旋光度，除另有规定外，测定测定旋光度，除另有规定外，测定管长度为管长度为1dm1dm。比旋度 为测得的旋光度为测得的旋光度 L L 为测定管长度为测定管长度dm dm d d 为液体的相对密度为液体的相对密度 区分或检查药品的纯杂程度，或测定含量 例：薄荷油例：薄荷油“折光率折光率 应为应为1.456-1.4661.456-1.466（附录（附录VII F VII F）旋光度旋光度 取本品，依法测定（附录取本品，依法测定（附录VII EVII E），旋光度应），旋光度应为为-17-17至至-24-24”第一节 性状鉴别（Description）相对密度：比重瓶法（液体）韦氏比重秤法（易

6、挥发液体）熔点：毛细管测定法毛细管法测定熔点熔点第一节 性状鉴别（Description）鉴别内容 粉末组织、细胞或内含物等生物学特征由药材粉末直接制成的制剂或 添加有部分药材粉末的制剂主要药味化学成分不清楚或尚 无化学鉴别 第二节 显微鉴别(microscopic identification)显微定性鉴别的特点复杂、相互干扰。重现性差根据制剂特点进行预处理。根据制剂特点进行预处理。原中药粉末的显微特征，不一定能作该原中药粉末的显微特征，不一定能作该 制剂的鉴别特征。制剂的鉴别特征。选择各原料药中较具专属性的显微特征作为选择各原料药中较具专属性的显微特征作为 鉴别依据。鉴别依据。第二节 显微

7、鉴别显微定性鉴别的方法1.了解制剂处方，制法及可进行显微鉴别的药材了解制剂处方，制法及可进行显微鉴别的药材品种，对比分析其中各药味的粉末特征。品种，对比分析其中各药味的粉末特征。2.排除交叉干扰，明确专属特征。排除交叉干扰，明确专属特征。要求：显微特征在处方中和处方外均具有专属性要求：显微特征在处方中和处方外均具有专属性第二节 显微鉴别牛黄解毒片中大黄的显微鉴别1.所用器材显微镜：光学显微镜、电子显微镜、扫描电镜等。1.注意事项 显微特征明显，易查见，否则可能做出假阴性的判定。取样注意代表性。第二节 显微鉴别第二节 显微鉴别一、制片方法1 1散剂、胶囊剂散剂、胶囊剂 取粉末，直接加水或水合氯醛

8、透化装片。取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。2 2片剂片剂 用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品透化装片。量样品透化装片。3 3水丸、锭剂水丸、锭剂 研成粉末后取少量直接透化装片。研成粉末后取少量直接透化装片。4 4蜜丸蜜丸 由于蜂蜜粘结药材粉末的细胞核组织，难于观察，由于蜂蜜粘结药材粉末的细胞核组织，难于观察，需去除粘结使解离，方法有：水洗后离心法。需去除粘结使解离，方法有：水洗后离心法。第二节 显微鉴别一、制片方法5.解离组织制片（1）氢氧化钾法；（2）硝铬酸法；（3）氯酸钾法。样品中含有木化组织较多或集成较大群束，不易进行观察。

9、样品中含有木化组织较多或集成较大群束，不易进行观察。第二节 显微鉴别若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片 1.淀粉粒淀粉粒 水或甘油醋酸试液；水或甘油醋酸试液；2.糊粉粒糊粉粒 甘油；甘油；3.水溶性内含物水溶性内含物 乙醇或水合氯醛试液乙醇或水合氯醛试液(不加热不加热)第二节 显微鉴别(一)根及根茎类1.原生木质部；2.皮层；3.维管束；4.石细胞；5.淀粉粒；6.草酸钙结晶。茎类皮类木类表皮细胞、表皮细胞、垂周壁垂周壁的形状，的形状，气孔气孔，毛毛茸；导管；茸；导管；管胞；管胞；纤维；纤维；草酸钙结草酸钙结晶晶。薄壁组织碎片、薄壁组织碎片、石细胞石细胞。不应含有木质部组不应含有木质部组

10、织，如织，如导管、管胞导管、管胞等。等。纤维、石细胞、纤维、石细胞、草酸钙簇晶草酸钙簇晶细胞壁通常均木化。细胞壁通常均木化。不应有木栓细胞不应有木栓细胞及绿色组织等及绿色组织等导管、管胞、木纤导管、管胞、木纤维、木射线及木维、木射线及木薄壁细胞薄壁细胞。第二节 显微鉴别(二)茎木类第二节 显微鉴别(三)叶类 1表皮 2气孔 3毛茸 注意毛茸的种类。第二节 显微鉴别(四)花类 1苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸 2花冠 上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，下表皮细胞常不呈乳头状，下表皮细胞常不呈乳头状，细胞壁微波状弯曲。细胞壁微波状

11、弯曲。维管束组织细小。维管束组织细小。第二节 显微鉴别3雄蕊 1 1）花粉囊内壁花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、环纹状及点状等；螺旋状、环纹状及点状等；2 2）花粉粒花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。具圆形、长圆形或多面形等多种形状。通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。4雌蕊 柱头的表皮细胞柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状呈乳头状突起，或分化成绒毛状第二节 显微鉴别(五)果实类 1果皮细胞的形状、大小。2外果皮上可能有非腺毛及腺毛。3中果皮内的分泌组织 4内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为

12、镶嵌层，则应注意其排列形式。有无分泌组织及细胞的内有无分泌组织及细胞的内含物。含物。-细胞大小、形状、壁厚、细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物色泽、细胞内含物-表皮毛的形表皮毛的形状、细胞壁状、细胞壁的厚薄、是的厚薄、是否木化、有无纹理；否木化、有无纹理；石细胞形状、大石细胞形状、大小、色泽散布及细小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。胞壁的增厚情况。栅状细胞及油细胞。栅状细胞及油细胞。-细胞形状、细胞形状、厚度、内含厚度、内含物。物。种皮种皮内胚内胚乳乳外胚乳外胚乳子叶子叶第二节 显微鉴别(七)种子类 第二节 显微鉴别应用实例 1 1 牛黄解毒丸显微鉴别牛黄解毒丸显微鉴别 处方：处方：牛黄、雄

13、黄、石膏、牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草。冰片、甘草。2.九分散显微鉴别处方：处方：马钱子粉、麻黄、乳香马钱子粉、麻黄、乳香（制）、没药（制）（制）、没药（制）第二节 显微鉴别作业：作业：1.1.六味地黄丸的显微定六味地黄丸的显微定性鉴别性鉴别熟地黄；熟地黄；山茱萸山茱萸 ；山药；山药；牡丹皮；牡丹皮；茯苓；茯苓；泽泻。泽泻。块块 根根果果 实实根根 茎茎 皮皮 类类菌菌 核核根及根茎根及根茎作业2.银翘解毒片：金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子（制）、桔梗、淡竹叶、甘草牛蒡子（制）、桔梗、淡竹叶、甘草 金银花、桔梗以生

14、药粉投料，可显微鉴别金银花、桔梗以生药粉投料，可显微鉴别3.蛇胆川贝散：蛇胆汁、川贝母。蛇胆汁、川贝母。川贝母粉碎成细粉入药，可显微鉴别川贝母粉碎成细粉入药，可显微鉴别4.小儿惊风散：全蝎、僵蚕、雄黄、朱砂、甘草。全蝎、僵蚕、雄黄、朱砂、甘草。五味药以生药粉投料，均可显微鉴别。五味药以生药粉投料，均可显微鉴别。显微化学鉴别法升华法（Sublimation）(一)原理 利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。化性质作为制剂鉴别的依据。（二）特点

15、 升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法专属性亦较好。该法专属性亦较好。升华法（Sublimation）对升华物可：1.在显微镜下观察其晶形。2.在可见或紫外光下观察其颜色或荧光。3.加入一定试剂处理后显出不同颜色或荧光。升华法-实例中药制剂中常见的具有升华性的成分有冰片、大黄中蒽醌类成分；牡丹皮中丹皮酚、薄荷中薄荷醇；斑蝥中斑蟊素等。显微化学鉴别法实例升华法 万应锭中冰片的鉴别：取制剂粉末，进行微量升华，收集冰片升华物，取制剂粉末，进行微量升华，收集冰片升华物

16、，显微镜检升华物的结晶性状后，加入香草醛硫酸显微镜检升华物的结晶性状后，加入香草醛硫酸溶液，白色结晶发生化学反应呈现紫红色溶液，白色结晶发生化学反应呈现紫红色第二节 显微鉴别显微化学鉴别法作业 1.牛黄解毒丸中冰片、大黄微量升华鉴别。2.明目地黄丸的升华鉴别。3.养阴清肺膏的微量升华鉴别。第三节第三节 理化鉴别理化鉴别（Physicochemical IdentificationPhysicochemical Identification）一、理化鉴别的概念和意义 利用制剂所含化学成分的理化性质，通过化学反应法，光谱法和色谱法等分析方法和技术来判断真伪的分析方法。根据中药制剂配伍，首选根据中药

17、制剂配伍，首选君药、臣药、毒剧药和君药、臣药、毒剧药和贵重药贵重药进行理化鉴别。进行理化鉴别。关键：专属、灵敏、快速、准确关键：专属、灵敏、快速、准确第三节 理化鉴别目前中国药典收载的理化鉴别方法有：1.化学反应法（多为试管反应）2.色谱法：薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法3.毛细管电泳法4.光谱法：荧光鉴别法、分光光度法（紫外、红外）一、化学反应法（General Chemical Reaction）（一）原理：（一）原理：利用检测试剂与制剂中的所含化学成分（利用检测试剂与制剂中的所含化学成分（有效成分有效成分或指标性成分或成分群或指标性成分或成分群）发生化学反应，根据所发生化学反应，

18、根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。分或某些药味的有无。一般化学反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应一般化学反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应等（试管反应）。等（试管反应）。一、化学反应法（General Chemical Reaction）特点：专属性差，操作简单。适用对象：多用于中药制剂中多用于中药制剂中矿物药矿物药的的无机成分无机成分、动物的、动物的蛋蛋白质类成分白质类成分以及处方单一或组方简单的制剂中植以及处方单一或组方简单的制剂中植物性药材物性药材成分类群成分类群的鉴别。的鉴别。马钱子散中生物碱的鉴别 化学反

19、应法常鉴别的成分化学反应法常鉴别的成分化学反应法主要用于鉴别制剂中的化学反应法主要用于鉴别制剂中的：1.生物碱类；2.黄酮类；3.蒽醌类；4.香豆素、内酯类；5.皂苷类；6.氨基酸、多糖类 7.各种矿物类成分：砷、汞等。生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂BorntragerBorntrager反应反应反应反应盐酸盐酸盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应镁粉反应镁粉反应GibbsGibbs反应；异羟肟酸铁反应反应；异羟肟酸铁反应反应；异羟肟酸铁反应反应；异羟肟酸铁反应 Liebermann-BurchardLiebermann-Burchard反应反应反应反应-萘酚萘酚萘酚萘酚-浓硫

20、酸反应浓硫酸反应浓硫酸反应浓硫酸反应（二）前处理提取酸性乙醇回流提取，检验酸性乙醇回流提取，检验酚类、有机酸、生物碱酚类、有机酸、生物碱等。等。水室温浸泡提取，检验水室温浸泡提取，检验氨基酸、蛋白质氨基酸、蛋白质等。等。6060热水浸泡，检验热水浸泡，检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及单糖、多糖、皂苷、鞣质及其他苷类成分。其他苷类成分。乙醚提取，检验乙醚提取，检验醌、内酯、苷醌、内酯、苷元；药渣挥去乙醚元；药渣挥去乙醚后，用甲醇回流提取，检查各种后，用甲醇回流提取，检查各种苷苷类。类。升华法，用于提取和检查能升华的成分。升华法，用于提取和检查能升华的成分。水蒸气蒸馏法，用于提取和检查水蒸气蒸馏法，用

21、于提取和检查挥发性挥发性成分。成分。1.生物碱 1.1.碘化铋钾反应碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀产生红棕色沉淀 2.2.碘化汞钾反应碘化汞钾反应 产生类白色沉淀产生类白色沉淀 3.3.硅钨酸反应硅钨酸反应 产生白色沉淀产生白色沉淀 4.4.苦味酸反应苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行，注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。化学反应法常鉴别的成分化学反应法常鉴别的成分2.黄酮类化合物 盐酸-镁粉反应 呈紫红色。大山楂丸（山楂）抗骨增生丸（淫羊藿）参茸保大山楂丸（山楂）抗骨增生丸（淫羊藿）参茸保胎丸（黄芩）等。

22、此外，黄芩提取物采用二氯氧胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆锆-盐酸显色反应进行检识。盐酸显色反应进行检识。3.3.蒽醌类化合物蒽醌类化合物 主要采用主要采用碱液反应（碱液反应（BorntragerBorntrager反应），反应），阳性阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。浸膏。化学反应法常鉴别的成分4.香豆素、内酯类和酚类 常用的检识反应有：氯亚氨基-2,6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。异羟肟酸铁反应 呈红色 应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。5.5.皂苷皂苷 常用的定性鉴别反应有

23、：常用的定性鉴别反应有：泡沫反泡沫反应应 样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。醋酐醋酐-浓硫酸反应（浓硫酸反应（Liebermann-Burchard）甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。浓硫酸反应浓硫酸反应 呈现红、红紫色。呈现红、红紫色。地奥心血康胶囊地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。7.7.矿物药矿物药 朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.1.朱砂（主含朱

24、砂（主含HgSHgS）主要采用）主要采用铜片铜片反应反应 天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定2.2.石膏、牡蛎、海螵蛸石膏、牡蛎、海螵蛸 此类药物均富含钙盐，主要此类药物均富含钙盐，主要采用采用草酸铵草酸铵反应反应止咳桔红口服液（石膏）、止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸安胃片（海螵蛸 ）龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）8.挥发性成分 主要使用香草醛-浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。养心定悸膏（桂枝、生姜）等。

25、牡荆油胶丸则采用溴牡荆油胶丸则采用溴-三氯甲烷反应鉴别之。三氯甲烷反应鉴别之。化学反应鉴别实例1 马钱子散中马钱子鉴定“取本品取本品10g,10g,加浓氨试液数滴及氯仿加浓氨试液数滴及氯仿10ml,10ml,浸泡数浸泡数小时小时,滤过滤过,取滤液取滤液1ml1ml蒸干蒸干,残渣加稀盐酸残渣加稀盐酸1ml1ml使溶使溶解解,加碘化铋钾试液加碘化铋钾试液1-21-2滴滴,即生成黄棕色沉淀。即生成黄棕色沉淀。”1.浓氨水的作用？2.稀盐酸的作用？3.地龙的排除？牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应 取本品取本品6 6片片(去包衣去包衣)，研细，加乙醇，研细，加乙醇

26、10ml10ml，温热，温热1010分钟，分钟，过滤，滤液作如下反应：过滤，滤液作如下反应：(1)(1)取滤液取滤液5ml5ml，加镁粉少量与盐酸，加镁粉少量与盐酸0.5ml0.5ml，加热，即显红色，加热，即显红色(2)(2)另取滤液另取滤液4ml4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加，加氢氧化钠试液，显红色，再加3030过过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。为黄色。化学反应鉴别实例化学反应鉴别实例2 2黄芩中有大量黄酮黄芩中有大量黄酮大黄中含有羟基蒽醌大黄中含有羟基蒽醌蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应（牙痛一粒丸）(1)

27、(1)取取本本品品约约0.1 0.1 g g，研研细细，加加氯氯仿仿5ml5ml，浸浸泡泡1 1小小时时，滤滤过过，滤滤液液蒸蒸干干，残残渣渣加加醋醋酐酐少少量量使使溶溶解解，再再滴滴加加硫硫酸酸，初初显显蓝蓝紫色，渐变为蓝绿色。紫色，渐变为蓝绿色。(2)(2)取取本本品品约约0.2g0.2g，研研细细，加加水水湿湿润润后后，加加氯氯酸酸钾钾的的硝硝酸酸饱饱和和溶溶液液2ml2ml，振振摇摇，放放冷冷，离离心心，取取上上清清液液，加加氯氯化化钡钡试试液液0.5ml0.5ml，摇摇匀匀，溶溶液液呈呈白白色色浑浑浊浊，离离心心，弃弃去去上上层层酸酸液液，再加水再加水2ml2ml，振摇，沉淀不溶解。

28、，振摇，沉淀不溶解。(3)3)取取本本品品适适量量，研研细细，用用盐盐酸酸湿湿润润后后，在在光光洁洁的的铜铜片片上上摩摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失蟾蜍蟾蜍雄黄雄黄朱砂朱砂一、化学反应法（General Chemical Reaction）(1)(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。(2)(2)分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。(3)(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。一般化学反应法用于中药制剂鉴别应

29、注意：一般化学反应法用于中药制剂鉴别应注意：一、化学反应法（General Chemical Reaction）1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强等特点。2.专属性较差。否定大于肯定，某些一般化学反应法已被专属性较强的薄层鉴别法取代。20052005年版年版中国药典中国药典在鉴别制剂中的大黄。决明子、在鉴别制剂中的大黄。决明子、何首乌等药味时，已不再采用蒽醌类化合物的颜色反应，何首乌等药味时，已不再采用蒽醌类化合物的颜色反应，而收载了薄层鉴别法而收载了薄层鉴别法。二、光谱法1.紫外光谱法2.荧光法3.红外分光谱法4.近红外光谱法（一）紫外光谱法问题：1.为什么可以在紫外光区有特征吸收？

30、2.哪些化学成分具有紫外光谱特征？紫外光谱鉴别的特点：1.操作简单，快速，样品用量少；2.特征性和专属性较差；3.测定前需作纯化处理。（一）紫外光谱法2.2.2.比较紫外光谱参数的一致性比较紫外光谱参数的一致性比较紫外光谱参数的一致性1.1.1.比较光谱的一致性比较光谱的一致性比较光谱的一致性3.3.3.紫外光谱谱线组法紫外光谱谱线组法紫外光谱谱线组法4.4.紫外导数光谱法紫外导数光谱法紫外光谱鉴别法有：荧光鉴别法（Fluorescence）原理：利用某些具有紫外吸收特征的化学成分，在受激发光照射后可发射荧光的特性进行中药制剂鉴别的方法。特点：1 操作简单、灵敏度高 2 易受拉曼峰和散射光等背

31、景的影响以及受共存组分的干扰，专属性差。荧光鉴别法（Fluorescence）1.荧光鉴别法适合检测成分为：黄酮类、蒽醌类、香豆精类、鞣质类、酚酸类和某些生物碱类成分。2.有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。3.检测波长254nm或365nm实例l天王补心丹中当归的鉴别 彩图（2）红外光谱法存在问题：存在问题：中药材目前尚缺乏标准红外光谱图，需要做大量中药材目前尚缺乏标准红外光谱图，需要做大量的研究工作。的研究工作。中药制剂的生产中药制剂的生产 中药制剂经适当前处理，通过与计算机软件连接中药制剂经适当前处理，通过与计算机软件连接处理数据，建立模

32、式制剂标准红外图谱。用于中处理数据，建立模式制剂标准红外图谱。用于中药制剂真伪鉴别和制剂生产过程的快速在线检测。药制剂真伪鉴别和制剂生产过程的快速在线检测。六味地黄丸生产过程的监控。六味地黄丸生产过程的监控。1.波长范围波长范围0.75-2.50.75-2.5 mm,该区域主要是含氢基团该区域主要是含氢基团（、）（、）的倍频和合频吸收。的倍频和合频吸收。2.吸收强度低，需样本量大，并且数据难以处理。吸收强度低，需样本量大，并且数据难以处理。3.傅里叶变换光谱学和计算机技术发展。傅里叶变换光谱学和计算机技术发展。4.中药的傅里叶变换近红外漫反射光谱包含了样中药的傅里叶变换近红外漫反射光谱包含了样

33、品极为丰富的组成信息。品极为丰富的组成信息。5.操作简单，无需处理即可操作简单，无需处理即可 分析，简便快速，完成一次样分析，简便快速，完成一次样品采集，即可实现多项性能指品采集，即可实现多项性能指标测定。标测定。近红外光谱法(Near-Infrared spectrophotometry)近红外光谱法(Near-Infrared spectrophotometry)三、色谱法（chromatography）（一）薄层色谱法（TLC）（二）纸色谱法（PC）（三）高效液相色谱法（HPLC）（四）气相色谱法（GC）三、色谱法（chromatography）(一)薄层色谱法（TLC）使用本法鉴定中药

34、制剂，使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物，采入样品和适宜的对照物，采用同一条件依法层析展开，用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作所得的色谱图进行对比，作出鉴定。出鉴定。薄层色谱法操作方法薄层板制备1.常用固定相材料、颗粒大小2.薄层板类型3.操作要求薄层色谱法操作方法（一）薄层色谱3.显色与检视方法可见光有颜色，直接检视自身有荧光或加入试剂可激发荧光的成分，在365或254nm观察。化学显色：通用型和专属性较好的显色剂薄层色谱-生物

35、自显影法影响薄层色谱的因素有哪些？（一）薄层色谱供试品溶液的制备供试品溶液的制备供试品溶液的制备展开剂的选择展开剂的选择展开剂的选择薄层板的选择薄层板的选择薄层板的选择对照物的选择对照物的选择对照物的选择展开剂蒸气饱和展开剂蒸气饱和展开剂蒸气饱和温度和湿度温度和湿度温度和湿度1.薄层色谱供试品预处理根据主要的检测成分选择提取溶剂常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。（一）薄层色谱影响因素固定相选择固定相选择硅胶硅胶G G、硅胶、硅胶GFGF254254生物碱：氧化铝生物碱：氧化铝黄酮类、酚类：聚酰胺黄酮类、酚类：聚酰胺1.薄层色谱（一）薄层色谱1.

36、薄层色谱条件系统适用性试验系统适用性试验三、色谱法（chromatography）展开系统选择展开系统选择RfRf值值0.2-0.80.2-0.8避免拖尾问题避免拖尾问题配比一致配比一致避免边缘效应避免边缘效应低毒溶剂低毒溶剂温度和湿度温度和湿度无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇-苯（苯（苯（苯（1:41:41:41:4）苯苯苯苯-三氯甲烷（三氯甲烷（三氯甲烷（三氯甲烷（1:31:31:31:3）丙酮丙酮丙酮丙酮-甲醇（甲醇（甲醇（甲醇（1:11:11:11:1）极极极极性性性性三、色谱法（chromatography）（一）薄层色谱1.薄层色谱条件注意问题注意问题（一）薄层色谱2.薄层色谱对照

37、物的选择对照提取物对照法对照提取物对照法对照提取物对照法对照提取物对照法对照品对照法对照品对照法对照品对照法对照品对照法对照药材对照法对照药材对照法对照药材对照法对照药材对照法阳性对照法阳性对照法阳性对照法阳性对照法阴性对照法阴性对照法阴性对照法阴性对照法三、色谱法（chromatography）标志着今后以测定一标志着今后以测定一标志着今后以测定一标志着今后以测定一组成分逐渐取代测定组成分逐渐取代测定组成分逐渐取代测定组成分逐渐取代测定单一指标成分单一指标成分单一指标成分单一指标成分（二）纸色谱法PC固定相：水固定相：水流动相：流动相：BAWBAW系统系统 （极性比较大）（极性比较大）载载

38、体：纤维素体：纤维素鉴别范围鉴别范围：氨基酸、动物类药物、多糖等极性组分。氨基酸、动物类药物、多糖等极性组分。鉴别依据：供试品色谱中，在与对照品、对照药材、鉴别依据：供试品色谱中，在与对照品、对照药材、对照药材提取物相应的位置显相同颜色的斑点，对照药材提取物相应的位置显相同颜色的斑点，RfRf值来表示。值来表示。薄层鉴别应用实例1.1.大黄及含大黄的成药大黄及含大黄的成药 1 1）供试液制备）供试液制备 取各样品适量，加甲醇取各样品适量，加甲醇20ml20ml浸渍浸渍1h1h，过滤，过滤，取滤液取滤液5ml5ml，蒸干，加水，蒸干，加水10ml10ml使溶解，再加使溶解，再加HClHCl 1m

39、l 1ml，水浴加热水浴加热30min30min，立即冷却，乙醚提取两次，立即冷却，乙醚提取两次，20ml/20ml/次，次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成1ml1ml。2 2）对照液制备）对照液制备 取大黄对照药材取大黄对照药材0.1g0.1g按供试液制备作为按供试液制备作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成1mg/ml1mg/ml的溶液，作的溶液，作为对照品溶液。为对照品溶液。3 3）薄层板）薄层板 硅胶硅胶HH加加0.30

40、.3CMC-NaCMC-Na溶液的自制板；厚度：溶液的自制板；厚度：300um300um 4 4）点样）点样 分别点样分别点样4uL4uL。5 5）展开剂）展开剂 石油醚石油醚(30(3060)-60)-甲酸乙酯甲酸乙酯-甲酸甲酸(1551)(1551)放置后的上层溶液。放置后的上层溶液。6 6）展开方式）展开方式 上行展开；展距：上行展开；展距：7cm7cm。7 7）显色）显色 置紫外光灯置紫外光灯(365nm)(365nm)下检视。下检视。8 8）色谱识别）色谱识别 紫外光灯紫外光灯(365nm)(365nm)下，供试品色谱中，在与下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五

41、个橙黄色荧光主对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。斑点。9 9）备注）备注 在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 样品：样品：1 1芦荟大黄素；芦荟大黄素；2 2大黄酸；大黄酸；3 3大黄素；大黄素；4 4大黄素甲醚；大黄素甲醚；5 5大黄酚；大黄酚；6 6大黄大黄(掌叶大黄掌叶大黄)对照药材；对照药材；7 7大黄大黄(唐古特大黄唐古特大黄)对照药材

42、；对照药材；8 8大黄流浸膏；大黄流浸膏；9 9小儿化毒散；小儿化毒散；1010槟榔四消丸；槟榔四消丸；1111木香槟榔丸；木香槟榔丸；1212枳实导滞丸；枳实导滞丸；13 13牛黄上清丸；牛黄上清丸；1414清宁丸；清宁丸；1515一捻金；一捻金；1616牛黄解毒片；牛黄解毒片；17 17牛黄解毒丸牛黄解毒丸薄层鉴别应用实例薄层鉴别应用实例2.2.黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药 1 1）供试液制备）供试液制备 取各品种药粉适量，加甲醇取各品种药粉适量，加甲醇5ml5ml，置水浴回流，置水浴回流15min15min，过滤，滤液浓缩至，过滤，滤液浓缩至1ml1ml。

43、2 2）对照液制备）对照液制备 取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非洲防己碱，药根碱，盐酸碱，硫酸表小檗碱，非洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每巴马汀对照品，加甲醇制成每0.5mg/ml0.5mg/ml的溶液，的溶液，作为对照品溶液。作为对照品溶液。3 3）薄层板）薄层板 硅胶硅胶GG自制板；厚度：自制板；厚度：500um500um 4 4）点样）点样 分别点样分别点样1-2ul1-2ul 5 5）展开剂）展开剂 苯苯-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-异丙醇异丙醇-浓氨试液浓氨试液 (631.51.50.5)(631.51.50.5)；另槽中加

44、入与展开剂等；另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液。体积浓氨试液。薄层鉴别应用实例6 6）展开方式）展开方式 展开箱预平衡展开箱预平衡1515分钟；上行展开；展分钟；上行展开；展距：距：8cm8cm7 7）显色）显色 置紫外光灯置紫外光灯(365nm)(365nm)下检视。下检视。8 8）色谱识别）色谱识别 中国药典黄连项下收载有味连，雅连，中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三种，总体分析黄连可见云连三种，总体分析黄连可见4 45 5个主要的黄色个主要的黄色荧光斑点，自下而上，分别为荧光斑点，自下而上，分别为l.l.非洲防己碱非洲防己碱+药根药根碱碱(量少量少)；2.2.巴马汀；巴马汀；3.3

45、.小檗碱；小檗碱；4.4.表小檗碱表小檗碱(云云连不含，雅连含量低连不含，雅连含量低)；5.5.黄连碱黄连碱(味连含量高味连含量高)。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区别。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区别。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 样品：样品：1.1.黄连黄连(味连味连)；2.2.黄连；黄连；3.3.黄连黄连(雅连雅连)；4.4.黄连黄连(云连云连)；5.5.黄连黄连(野连野连)；6.6.黄连黄连(日本黄连日本黄连)；7.7.小儿化毒散；小儿化毒散；8.8.万应锭；万应锭；9.9.大补阴丸；大补阴丸；10.10.木香槟

46、榔丸；木香槟榔丸；11.11.香连丸；香连丸；12.12.黄柏；黄柏；13.13.非洲防己碱；非洲防己碱；14.14.药根碱；药根碱；15.15.巴马汀；巴马汀；16.16.小檗碱；小檗碱；17.17.表小檗碱；表小檗碱；18.18.黄连碱。黄连碱。薄层鉴别应用实例薄层鉴别应用实例理化鉴别(三)高效液相色谱法 主要是利用化合物在特定的色谱柱上，在一定条主要是利用化合物在特定的色谱柱上，在一定条件下的保留值，将某一样品与其对照品在同一条件下的保留值，将某一样品与其对照品在同一条件下，进行保留时间的直接比较作为鉴别依据。件下，进行保留时间的直接比较作为鉴别依据。对于复杂未知成分，也可以加入对照品，

47、观察被对于复杂未知成分，也可以加入对照品，观察被测峰是否增高，以初步作定性结论。测峰是否增高，以初步作定性结论。对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质谱对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质谱联用，先分离后再作定性鉴别。联用，先分离后再作定性鉴别。理化鉴别(四)气相色谱法 气相色谱法的分离效能高，检测器种类多而且灵敏度高，是混合物鉴别的有效方法。该法目前主要是用于含挥发油和挥发性成分的制剂分析。（五）、毛细管电泳法（五）、毛细管电泳法（CECE）弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。中药分析中可以用CE分析

48、的成分包括生物碱、有机酸、酚类、苷类、黄酮类、醌类、香豆素等。（五）、毛细管电泳法（CE）(1)(1)毛细管区带电泳（毛细管区带电泳（CZECZE），用以分析带电溶质），用以分析带电溶质。（生物。（生物碱和酚酸类）碱和酚酸类）(2)(2)毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGECGE），在毛细管中装入单体，引发聚），在毛细管中装入单体，引发聚合形成凝胶，主要用于测定合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、蛋白质、DNADNA等大分子化合等大分子化合物。物。(3)(3)胶束电动毛细管色谱（胶束电动毛细管色谱（MEKCMEKC），在缓冲液中加入离子型），在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠，形成胶

49、束，被分离物质在表面活性剂如十二烷基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和胶束相水相和胶束相(准固定相准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移，达到分离。本模式能用于黄酮及各种苷类管内迁移，达到分离。本模式能用于黄酮及各种苷类五、毛细管电泳法（CE）(4)(4)毛细管等电聚焦电泳（毛细管等电聚焦电泳（CIFECIFE），在充有两性电），在充有两性电解质溶液的毛细管两端加直流电压，管内将建立解质溶液的毛细管两端加直流电压，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的一个由阳极到阴极逐步升高的pHpH梯度，从而使梯度，从而使不同等电点组分在电场作用下迁移至满足其等电不同等电

50、点组分在电场作用下迁移至满足其等电点的点的pHpH位置，形成聚集带而分离。位置，形成聚集带而分离。主要用于蛋白质、肽类等生物大分子的分离与测主要用于蛋白质、肽类等生物大分子的分离与测定、异构体分离、等电点测定等。定、异构体分离、等电点测定等。（五）、毛细管电泳法（CE）（5）毛细管电色谱，是将HPLC的固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂布固定相，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程，此模式兼具电泳和液相色谱的分离机制。（6）毛细管等速电泳，采用先导电解质和后继电解质，使溶质按其电泳倘度不同得以分离。（五）、毛细管电泳法（CE）HPCE在中药鉴别上的应用研究已经积累了较多的资料和数据，如对植物药菟