222动物细胞融合与单克隆抗体76210.ppt

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1、动物细胞工程动物细胞工程2.2.2.2.2.2.动物细胞融合与动物细胞融合与单克隆抗体单克隆抗体一、动物细胞融合：一、动物细胞融合：2 2、原理：、原理：细胞膜具有一定的流动性细胞膜具有一定的流动性1 1、概念：、概念：选修选修3 3P.52P.52动物细胞融合也称细胞杂动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的细胞结合形成一个细胞的过程。过程。诱导方式诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒（特有的方法）（特有的方法）3 3、过程：、过程：（与植物细胞融合的基本原理相同）（与植物细胞融合的基本原理相同）离心、电

2、激、振动离心、电激、振动聚乙二醇聚乙二醇u细胞完成融合的标志：细胞完成融合的标志：细胞核融合为一个核细胞核融合为一个核融合后形成具有原来两个或多个融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，成为细胞遗传信息的单核细胞，成为杂交细胞杂交细胞意义意义：突破了有性杂交方法的局限，使远突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能缘杂交成为可能5 5、动物细胞融合的应用：、动物细胞融合的应用：成为研究细胞遗成为研究细胞遗传、细胞免疫、传、细胞免疫、肿瘤和生物新品肿瘤和生物新品种培育等的重要种培育等的重要手段手段制备单克隆抗体制备单克隆抗体（重要应用）（重要应用）主要用于制备主要用于制备主要用于制

3、备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株用途用途用途用途物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）（同左）（同左）生物：灭活生物：灭活生物：灭活生物：灭活的病毒的病毒的病毒的病毒物理（离心、振物理（离心、振物理（离心、振物理（离心、振动动动动、电刺激）电刺激）电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法诱导方法诱导方法用胰蛋白酶处理使细用胰蛋白酶处理使细胞分散后诱胞分散后诱导细胞融导细胞融导细胞融导细胞融合合合合酶解法去除细胞壁后酶解法去除细胞壁后诱诱

4、导原生质体融合导原生质体融合导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理原理原理动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体：二、单克隆抗体：其由何种细胞产生其由何种细胞产生？主要分布在哪里？主要分布在哪里？如何得到抗体？如何得

5、到抗体？提提问问？关于抗体关于抗体抗原抗原动物体内动物体内抗体抗体刺激刺激刺激刺激效应效应效应效应B B B B细胞细胞细胞细胞不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异性差，灵敏度低性差，灵敏度低抗原不纯抗原不纯抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一的效应筛选单一的效应B B细胞细胞（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）抗原抗原动物体内动物体内抗体抗体刺激刺激刺激刺激效应效应效应效应B B B B细胞细胞细胞细胞B B淋巴细胞与骨髓

6、瘤细胞融合的原因淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因1 1、每一个、每一个B B淋巴细胞只能分泌一种特淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，不同种类的异性抗体，不同种类的B B淋巴细胞分泌淋巴细胞分泌的抗体不同的抗体不同2 2、B B淋巴细胞在体外培养时不能无限淋巴细胞在体外培养时不能无限增值，骨髓瘤细胞能够无限增值增值，骨髓瘤细胞能够无限增值制备单克隆抗体1 1、原理：、原理：B B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，胞能无限增殖，杂交瘤细胞具有两个亲本杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。够数量

7、的单一抗体。2 2、单克隆抗体的制备过、单克隆抗体的制备过程：程：获得杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞动物细胞培养动物细胞培养动物细胞培养动物细胞培养提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体将抗原注入小鼠体内获得效应将抗原注入小鼠体内获得效应将抗原注入小鼠体内获得效应将抗原注入小鼠体内获得效应B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞效应效应效应效应B B B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合融合融合融合用特定培养基筛选出杂交瘤细胞用特定培养基筛选出杂交瘤细胞用特定培养基筛选出杂交瘤细

8、胞用特定培养基筛选出杂交瘤细胞筛选能够产生所需抗体的细胞群筛选能够产生所需抗体的细胞群筛选能够产生所需抗体的细胞群筛选能够产生所需抗体的细胞群再在培养液或小鼠腹腔中培养再在培养液或小鼠腹腔中培养再在培养液或小鼠腹腔中培养再在培养液或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取细胞融合后培养液中有几种细胞细胞融合后培养液中有几种细胞B B细胞、细胞、细胞、细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B与与B融合、瘤瘤融合融合、瘤瘤融合自身融合的细胞：自身融合的细胞：未融合的细胞：未融合的细胞：杂交瘤细胞杂交瘤细胞：B细胞与骨髓瘤

9、细胞融合细胞与骨髓瘤细胞融合5种种 在整个制备的过程中要经过几次筛选在整个制备的过程中要经过几次筛选？筛选得到杂交瘤筛选得到杂交瘤细胞，细胞，筛选先在多孔培筛选先在多孔培养板上，在每孔只养板上，在每孔只有有一个杂交瘤细胞一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异下培养筛选出特异抗体的细胞群抗体的细胞群3 3、单克隆制备过程中用到的生、单克隆制备过程中用到的生物技术手段物技术手段动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养4 4、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用:应用应用:疾病的诊断、治疗和预防。疾病的诊断、治疗和预防。优点优点:特异性强、灵敏度高，产量大特异性强、灵敏度高，产量大实例实例:各种癌症、肝炎病毒、各种癌症、肝炎病毒、SARSSARS病毒、细菌病毒、细菌 及血吸虫等数百种疾病的诊断；及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士,能识别能识别“自己自己”与与“异己异己”，一旦发现，一旦发现 致病致病因素便与之结合将其杀死。因素便与之结合将其杀死。若在单抗上带上抗癌药物制成若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。细胞又不会伤害健康细胞。